秦巴山区智力低下儿童FRAXF基因多态性研究

1、秦巴山区智力低下儿童FRAXF基因多态性研究张素珍，张富昌，谢学建，魏亚宁，舒青【关键词】儿童StudynFRAXFgeneplyrphisinhildrenithentalretardatininQinbauntaindistrit【Abstrat】AI:TinvestigatetheassiatinbeteenFRAXFgeneplyrphisandthehildintelligeneinQinbauntaindistrit.ETHDS:FRAXFgentypeasdetetedin84entalretardatin(R)hildrenand74nralntrlsbyusingPRandp

2、lyarylaidegeleletrphresis(PAGE)ethds.TheassiatinfFRAXFgeneplyrphisandthehildintelligeneasstudied.RESULTS:NineteenalleleshadbeenhekedutinRgrupiththerepeatfrequenyranging728.Tentynealleleshadbeenhekedutinntrlgrup,therepeatfrequenyranging120.ThedistributinfFRAXFgentypeassignifiantlydifferentbeteenRandn

3、trlgrups(2=14.05,P0.005).NLUSIN:ThereasanassiatinbeteenFRAXFgeneplyrphisandthehildintelligene.FRAXFgeneaybeneftheandidategenespredispsingtR.【Keyrds】plyrphis(genetis);hild;intelligene;FRAXF【摘要】目的：研究秦巴山区儿童FRAXF位点多态性与儿童智力之间的关系.方法：应用多聚酶链式反响PR结合聚丙烯酰胺电泳凝胶分析系统分析技术对84例智力低下儿童及对照组72例智力正常儿童的FRAXF基因多态性进展检测比拟，讨论

4、FRAXF基因多态性对儿童智力的影响.结果：病例组共检出该位点19个等位基因，重复次数范围为728.对照组共检出该位点21个等位基因，重复次数范围在120.通过2检验，两组之间等位基因多态性分布差异显著2=14.05,P0.005.结论：结果提示FRAXF基因的不稳定性可能与儿童的智力发育有关.FRAXF基因可能是儿童智力低下的易感基因之一.【关键词】多态现象遗传学；儿童；智力；FRAXF0引言1969年Lubs等首次发现X染色体上具有1个脆性位点FRAXA1，此后遗传学家相继在人类基因组上发现了26个脆性位点，其中3个位于Xq2728区带上FRAXA,FRAXF及FRAXE2-4.过去认为除

5、FRAXA和FRAXE之外，其他24个脆性位点只是人类基因组中正常的多态性位点5.FRAXF基因是否可以作为R的候选基因尚在讨论.秦巴山区地处秦岭深处，交通不便，地域因素造成了互相较为隔绝的人群，平均每个自然村智力低下患者到达7%8%，是智力低下儿童基因多态性研究的一个特殊群体.本研究通过对这个特殊地区的正常儿童及智力低下儿童FRAXF基因多态性的检测，讨论了FRAXF基因多态性与儿童智力之间的关系.1对象和方法1.1对象智力低下entalretardatin,R组为84(男45，女39)例,均为柞水安康两地经智商测定(采用韦克斯勒儿童智力表法)为R儿童，年龄014岁.对照组72(男35,女3

6、7)例，为同一地区同龄智力正常儿童，年龄014岁.R者与对照组在年龄上进展了匹配，二者无显著性差异.引物由上海博亚生物技术合成，TaqDNA聚合酶购自鼎国公司.PR扩增试剂盒购自宝生物公司.测序由上海基康生物公司完成.采集研究对象的外周静脉血5L，加AD抗凝，保存于-20冰箱中，全血经蛋白酶K消化，采用酚/氯仿法抽提基因组DNA.1.2方法1.2.1基因多态性检测PR引物序列参照文献Fu等,1991.基因序列从美国生物信息中心NBI网站上查询.扩增片段长度为360bp.引物序列P1:5TGAGGTTATGGGGAGAA3,P2：5GTATAGTAT3.PR反响体系：模板DNA50g/L2L，引

7、物50pl/3L1.5L,10ldNTP2.4L,Taq酶33.34kat/L1L,10Buffer(g+)3L,H221.6L,总体积30L.扩增反响在PerkinEler9600扩增仪中进展.反响条件：95变性7in后加Tag酶；94变性2in，55退火1in,72延伸2in，循环30次后，72延伸7in,扩增产物4冰箱保存.通过15g/LAgrse凝胶电泳观察是否有PR扩增产物，通过80/L聚丙烯酰胺凝胶电泳，凝胶分析系统分析，确定PR扩增产物碱基个数，同时随机挑选PR产物由上海基康技术测序，进一步确定所扩片段是否准确以及侧翼序列的碱基个数.多态位点G重复次数nPR扩增产物碱基数量-侧翼

8、序列碱基个数/3，从而确定G的个数.鉴定基因型.统计学处理：组间基因频率差异用2检验.所用统计软件为SPSS10.0软件包.2结果2.1智力低下儿童FRAXF基因多态性检测了84例智力低下儿童外周血标本，72例正常儿童对照.病例组共检出该位点19个等位基因，片段大小381444bp，基因频率在0.8%13.3%之间，重复次数范围为728.重复次数多为11,13.对照组共检出该位点21个等位基因，片段大小360420bp，基因频率在1.8%11.9%之间，重复次数范围为120，重复次数多为9次(图1).两组之间等位基因多态性分布差异显著2=14.05,P0.05，表2.2.3PR产物测序确定扩增

9、片段(G)重复次数及片段大小(图2).表1FRAXF基因多态性在病例组与对照组之间的分布略表2FRAXF基因在病例组及对照组中男女之间的分布略图1FRAXF基因多态性在病例组及对照组中的柱形分布图略图2FRAXF基因多态性的测序图谱略3讨论1943年artin首次报道了一个X连锁形式的智力低下家系，以后命名为脆性X综合症.FRAX系X性遗传疾病，是儿童R的常见原因，在人群中发病率男性约1/4000，女性稍低5.其分子学机制是因FR1基因第1外显子非翻译区G重复区异常扩增及异常甲基化，引起FR1基因此不转录，或转录后翻译效率低，生成编码蛋白脆X智力低下蛋白(fragileXentalretard

10、atinprtEin,FRP)减少或不能生成FRP所致6.因为中枢神经系统发育多有FRI基因的高度表达，假设FR1RNA缺乏可能会损害皮层和边缘系统的发育，影响依赖于皮层和边缘系统功能意志、学习和记忆行为7.现研究说明，除FRAXA基因外，其他FRAX基因尚无足够的证据证明其与R有关.提示FRAXF基因多态性与儿童智力有相关性.该基因G重复次数大于20时，儿童智力异常的可能性较大.本研究是在秦巴山地区这个物殊儿童群体进展FRAXF基因多态性的研究，发现FRAXF基因多态性与儿童智力可能有相关性，该位点等位基因分布符合Hardyeinberg平衡遗传定律8，具有代表性.多态信息量PI：0.86，结果说明该位点具有