生物安全实验室的检测验证全国培训班市公开课获奖课件

1、生物安全试验室检测验证 /051第1页第1页概 述生物安全试验室是通过物理围场方式将病原微生物操作局限在能预防感染性材料尤其是预防感染性生物气溶胶扩散到试验室外环境。为了确保病原微生物试验室在试验操作过程中产生含有病原微生物“三废”（即感染性固体废物、感染性液体废物和感染性空气）不扩散到试验室外环境，通过各种物理和/或化学手段，使排出试验室 “三废”中病原微生物达到“零排放”。 /052第2页第2页概 述试验室生物安全通用要求（GB19489）11.4条，明确要求“对于新安装生物安全柜和安全罩及其HEPA滤器安装与更换，应由有资格人员进行，安装或更换后应按照经确认办法进行现场生物和物理检测，并

2、每年进行验证。” /053第3页第3页概 述在中华人民共和国卫生行业原则微生物和生物医学试验室生物安全通用准则（WS 233），在附录B（规范性附录）相关级生物安全柜现场检测B.5中要求，“在颁布实行我国级生物安全柜相关原则之前，进口级生物安全柜必须符合生产国相应原则，生产国无相关原则产品不得进口使用。国产级生物安全柜生产厂家必须制定相应公司原则，其性能指标不得低于国外同类产品原则。出厂时必须按公司原则对每台生物安全柜进行检测并出具检测汇报，使用微生物进行生物安全防护检测不得省略。” /054第4页第4页概 述生物安全试验室设施检测与验证，主要是排放口HEPA滤器；生物安全试验室设备检测与验证

3、，主要是生物安全柜和安全罩。高压灭菌器检测验证，国家已有相关原则和要求。 /055第5页第5页一、生物安全试验室设施检测验证 生物安全试验室设施检测对象主要：半污染区和污染区洁净度检测半污染区和污染区以及缓冲间负压值检测半污染区和污染区气流流速和流向检测HEPA滤器物理检测气密性检测验证对象主要是半污染区和污染区排风口HEPA滤器对微生物气溶胶滤除率生物学检测验证。 /056第6页第6页半污染区和污染区洁净度检测检测技术办法参考洁净室施工及验收规范（JGJ 7190）。BSL3和ABSL3试验室、BSL4和ABSL4试验室半污染区和污染洁净度检测合格范围应当是空气中0.5m尘粒数35粒/m3到

4、350粒/m3，5m尘粒数2930粒/m3到29300粒/m3。 /057第7页第7页半污染区和污染区以及缓冲间负压值检测BSL3和BSL4试验室由外向内分别是清洁区、缓冲间、半污染区、缓冲间和污染区，它们负压值分别是0Pa、10Pa、20Pa、30Pa和40Pa。 ABSL3和ABSL4试验室由外向内分别是清洁区、缓冲间、半污染区、缓冲间和污染区，它们负压值分别是0Pa、10Pa、25Pa、40Pa和60Pa。负压值测定应在所有门关闭时进行，并应从平面上最里面房间依次向外测定。/058第8页第8页半污染区和污染区气流流速和流向检测气流流速检测 （1）单向流气流测定办法 在距送风面0.5垂直截

5、面测定。截面上测点间距不应2，测点数应不少于10个，均匀布置。采用热球风速仪作为检测仪器。（2）评价原则 应符合生物安全试验室设计每小时换气次数换算气流流速，同时应考虑试验室内气流流速不应0.24m/s。 /059第9页第9页半污染区和污染区气流流速和流向检测气流方向检测和评价（1）测定办法 用发烟器装置测定，测点在送风口和排风口之间连线方向上，高度为1.1m，均匀布置不少于3个。（2）评价原则 气流流向应符合GB194896.3.3条要求。 /0510第10页第10页HEPA滤器物理检测HEPA滤器物理检测项 目送风系统HEPA滤器检漏 排风HEPA滤器检漏 检漏办法粒子计数扫描法，执行洁净

6、室施工及验收规范（JGJ 71） 粒子计数扫描法，执行洁净室施工及验收规范（JGJ 71） 检漏工况送、排风系统正常运营 关闭送风，只开排风，室内含尘浓度（0.5m）不小于5000粒/L 评价原则 超出3粒/L，即判断为泄漏 第一道滤器，超出3粒/L，即判断为泄漏；第二道滤器，超出2粒/升，即判断为泄漏 /0511第11页第11页气密性检测 生物安全试验室缓冲间、半污染区、缓冲间和污染区房间气密性应按下列要求进行检测和评价。1. BSL-3试验室应通过直观检查证实围护结构密封完好。2. BSL-4试验室除了应通过直观检查证实围护结构密封完好外，还应进行下列检测和评价： /0512第12页第12

7、页气密性检测办法一：压力衰减试验A. 检测办法 关闭送风气密阀门，关闭门窗，启动排风机，使室内外压差达到160Pa，然后关闭排风机和排风密闭阀。B. 评价原则 观测微压差计压力上升速度，每分钟上升不超出16Pa即为合格。 /0513第13页第13页气密性检测诱导泄漏试验A. 检测办法a在室内靠近检测部位,发生0.5m下列粒子NaCl气溶胶，使粒径局部浓度达到1106/m3以上。b. 在试验室四周外侧，贴近要评估墙面和门口结构连接处，用光学粒子计数器以大约30cm/min速度在离表面20cm处进行扫描。c. 在敞开房间门外，用光学粒子计数器60 cm处进行扫描。B. 评价原则 结构连接无泄漏，门

8、外60 cm处粒子浓度应室内粒子浓度0.1%。 /0514第14页第14页其它检测项目 除上述检测内容之外，还需要温度、湿度、噪声和照度等检测，这些参数检测均应按洁净室施工及验收规范(JGJ 71)检测办法进行，检测结果符合试验室生物安全通用要求 (GB19489)和生物安全试验室建筑技术规范(GB50346-) 或生物安全试验室设计指标即可。 /0515第15页第15页HEPA滤器对微生物气溶胶滤除率生物学检测验证生物学检测验证结果应表达三方面防护效果：一是HEPA滤器对微生物气溶胶滤除效果；二是能够反应出安装过程中对HEPA滤器有无损伤；三是反应出HEPA滤器安装是否严密，不漏气。因此，在

9、对生物安全试验室排风口HEPA滤器物理检测完毕后，必须用经确认生物学办法进行检测验证。 /0516第16页第16页HEPA滤器对微生物气溶胶滤除率生物学检测验证生物安全试验室排风口HEPA滤器生物学检测验证主要包括下列几种环节：检查试验室是否处于正常工作状态；本底采样；发生批示微生物气溶胶和批示微生物气溶胶本底采样；一级和二级HEPA滤器后空气样本采集；采集样本培养计数和HEPA滤器滤除率计算。 /0517第17页第17页二、生物安全试验室设备检测验证 生物安全试验室设备检测验证主要是生物安全柜和安全罩。高压灭菌器检测验证，国家已有相关技术原则，参考执行即可。 /0518第18页第18页生物安

10、全柜检测和验证级生物安全柜在出厂前就已经完毕了物理（包括噪声、照度、向内风速、下送风速、气流流型等）和生物学检测验证，应有检测汇报。生物安全柜在试验室安装后，应进行全面检测，尤其是生物学检测，包括人员保护、样品保护、交叉污染保护和出风口泄漏检测验证。 /0519第19页第19页生物安全柜检测和验证人员保护检测验证 人员保护检测验证详细操作办法能够参考美国国家原则级（层流）生物安全柜（NSF49）。合格鉴定原则：从6个AGI-30采样器采集到粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌CFU数量，在每次检测时不得超出10个。采样时间达30 min时，裂隙式空气采样器平板计数不得超出5个菌落。必须重复3次试验。对照

11、平板必须是阳性结果。当平板含有300个以上粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌菌落时，即为阳性。 /0520第20页第20页生物安全柜检测和验证试验样品保护检测验证 试验样品保护检测验证详细操作办法能够参考美国国家原则NSF49。合格鉴定原则：每次试验中，在琼脂平板上粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌菌落数不得超出5个。必须重复3次试验。对照平板必须是阳性结果。当平板含有300个以上粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌菌落时，即为阳性。 /0521第21页第21页生物安全柜检测和验证交叉污染检测验证 交叉污染检测验证详细操作办法能够参考美国国家原则NSF49。合格鉴定原则：从袭击侧壁到距离侧壁36 cm之间一些琼脂平板能够得到粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌菌落，它们用作阳性对照。每次测试时，在不小于38 cm中心处琼脂平板所得到菌落总数不得超出2个。在安全柜左侧和右侧各做3次重复试验。 /0522第22页第22页生物安全柜检测和验证出风口泄漏检测验证 出风口泄漏检测是在美国NSF49原则、欧洲EN12469中没有检测验证项目。造成出风口泄漏主要原因有两个：一是HEPA滤器与固定框之间密封不严，二是HEPA滤器在安装过程中有损伤。对出风口生物检测验证能够及时发觉泄漏。出风口泄漏检测验证详细操作办法能够参考美国国家原则NSF49人员保护测试验证中气溶胶发生，采样用Andersen 2级采样器在出风口处采样30m