玉郎伞多糖对过氧化氢诱导大鼠原代肝细胞损伤的保护作用

1、玉郎伞多糖对过氧化氢诱导大鼠原代肝细胞损伤的庇护作用段小群，焦杨，张士军，黄仁彬【摘要】目的研究玉郎伞多糖(YLS)对H22诱导大鼠原代肝细胞损伤的庇护作用及其机理。要领接纳IV型胶原酶灌流法分散大鼠肝细胞举行原代造就，用H22体外诱导肝细胞损伤，检测造就上清液中AST和ALT程度，测定肝细胞中DA和GSH含量，TT法检测细胞存活和增殖活性。效果YLS0.1251g/l可显着低落或规复由H22升高的造就上清液中AST和ALT程度及肝细胞中DA含量，还可进步H22低落的肝细胞存活率和GSH含量。结论提示YLS对大鼠原代造就肝细胞损伤有直接庇护作用，该作用大概与其抗氧化作用有关。【关键词】玉郎伞多

2、糖；肝细胞；过氧化氢；抗氧化作用Keyrds：YulangsanPlysaharide(YLS);Hepatyte;H22;Anti-xidativeativity玉郎伞是一种尚未开拓使用的民间草药，为蝶型花科植物疏叶岩豆illettiapulhraKurzvar.laxir(Dunn)ZEi的块根。具有散淤、消肿止痛之成效，民间用于高血压、肝炎、消化不良等的治疗，本课题组经多年研究证明玉郎伞提取物具有抗氧化和免疫调治作用，并对急、慢性实行性肝损伤均有显着的庇护作用1，2。玉郎伞多糖YulangsanPlysaharideYLS是玉郎伞提取物中重要的有用身分，为进一步研究YLS对肝损伤的作用，

3、本文接纳IV型胶原酶灌流法分散肝本色细胞举行体外造就，用过氧化氢(H22)诱导肝细胞损伤模子举行体外研究，不雅察YLS对体外肝细胞损伤的庇护作用及其机制。1东西2要领2.2YLS对H22诱导肝细胞损伤的作用5,6维生素E作阳性比较，用少量DS溶解，参加到造就液后其终浓度为50l/l。取上述贴壁生长的肝细胞，设H22模子组、YLS0.1251g/l4个剂量组和空缺比较组、维生素E组，每组至少设6个复孔。别离参加H220.6l/L，差异浓度的YLS,维生素E和溶媒，继承造就24h后，网络造就上清检测AST,ALT活性；弃肝细胞造就上清，参加0.2lTritn-100水溶液0.5l，混匀，2500r

4、/in离心10in，取上清测定肝细胞DA和GSH含量，同时用TT比色法，测定肝细胞的活率。2.3TT比色法待测细胞悬液于96孔造就板造就24h后，各孔参加20lTT试剂，轻轻混匀，继承37造就4h，吸出全部液体，加200lDS，微量振荡器上振荡15in，待溶解完全，于酶标仪570n波长比色。2.4赖氏法测定AST和ALT按试剂盒说明测定。2.5DA和GSH含量测定按试剂盒说明测定。2.6数据处置惩罚全部数据均以s表现，接纳t查验举行统计处置惩罚。3效果效果见表1。3.1YLS对H22损伤肝细胞ALT和AST活性的影响H22损伤肝细胞后，促进肝细胞内酶的开释，模子组的ALT，AST程度较正常组显

5、着升高，YLS在0.1251g/l剂量范畴内，能明显按捺H22损伤肝细胞后ALT，AST程度的上升，并呈显着的剂量依靠性；VitE也能显着按捺H22损伤肝细胞后ALT，AST程度的上升。3.2YLS对H22损伤肝细胞DA和GSH的影响H22损伤肝细胞后，肝细胞中的DA显着升高，GSH那么明显低落，除YLS0.125g/l外，别的YLS各剂量组均能明显进步H22损伤肝细胞中的GSH含量和低落H22损伤肝细胞中的DA含量，并呈显着的剂量依靠性；VitE对H22损伤肝细胞也具有进步GSH含量和低落DA含量的作用。3.3YLS对H22损伤肝细胞活性的影响TT法测定效果表白，H22损伤后模子组细胞活性显

6、着落落，YLS在0.1251g/l剂量范畴内，能明显规复和升高H22损伤肝细胞后的细胞活性，并呈显着的剂量依靠性；VitE也能规复和升高H22损伤肝细胞后的细胞活性。表1YLS对H22诱导肝细胞损伤的作用略与H22组比力，*P0.05，*P0.01，与比较组比力，P0.05，P0.01；n=64讨论在肝细胞损伤历程中,氧自由基xygenfreeradial，FR起了紧张作用。FR及其诱发的脂质过氧化物(LP)可引起猛烈的链式反响，产生几十种毒性分子，再次诱发成更多的FR，继而加快加重肝细胞膜、细胞器、卵白质以及DNA的损伤7。本实行应用H22诱导肝细胞损伤，H22可直接弥散入细胞内与种种细胞身

7、分彼此作用，且在富含铁的肝细胞内也变化为H，H等自由基可致DNA键断裂，并与细胞的紧张身分起反响，亦可打击膜磷脂中的多不饱和脂肪酸(PUFA)，引发膜脂质过氧化链式反响。双链脂肪酸过氧化(聚合)导致DA形成增多，肝细胞膜通透性增长，使ALT与AST开释增长811。同时H22可促进GSH等抗氧化物斲丧增多而程度落落，扫除自由基成效也落落，损伤进一步加重。据此，本实行选择造就上清中ALT与AST，肝细胞DA含量和GSH程度作为评价肝细胞损伤的指标。实行表白，H22损伤导致肝酶变革，如反响肝细胞损伤的AST，ALT均显着升高。在H22损伤的肝细胞中参加YLS后，随YLS剂量加大，细胞造就上清中的肝酶活性举行性低落，提示YLS能减轻肝细胞损伤，淘汰ALT与AST的开释。实行证明，在H22损伤的肝细胞中参加YLS后，YLS能低落肝细胞内的DA含量，提示YLS能有用对抗H22引起脂质过氧化作用，淘汰脂质过氧化物的形成。研究表现，在H22损伤的肝细胞中参加YLS后，YLS能规复肝细胞内的GSH含量，提示YLS能有用规复抗氧化物水安然平静扫除自由基成效。TT比色法测定肝细胞存活率表现，在H22损伤的肝细胞中参加YLS后，YL