各种缓冲液的配制方法-

1、各种缓冲液的配制方法-各种缓冲液的配制方法Na2HPO4- 柠檬酸钠缓冲液P0.2mol/L0.1mol/L P 0.2mol/L0.1mol/LHNa2HPO柠檬酸钠 HNaHPO柠檬酸钠424(ml)(ml)(ml)(ml)20.419.6510.729.28.2221.2418.76511.158.85.4422.1817.82511.608.40.6623.1716.83512.097.91.8834.1115.89612.637.37.0034.9415.06613.226.78.2235.7014.30613.856.15.4436.4413.56614.555.45.6637.1

2、012.90615.454.55.8847.7112.29716.473.53.0048.2811.72717.392.61.2248.8211.18718.171.83.4449.3510.65718.731.27.6649.8610.14719.150.85.88510.309.70819.450.55.00Na2HPO4。 2HO，分子量 =178.050.2mol/L溶液含 35.61g/L柠檬酸 . H 2O，分子量液含 21.01g/L=210.140.1mol/L溶柠檬酸 - 柠檬酸钠缓冲溶液（ 0.1mol/L ）P0.1mol/L0.1mol/LP0.1mol/L0.1mol

3、/LH 柠檬酸柠檬酸H柠檬酸柠檬酸钠（ml）钠（ ml）（ml）(ml)318.61.458.211.8.00317.22.857.312.7.22316.04.056.413.6.44314.95.155.514.5.66314.06.054.715.3.88413.16.963.816.2.00412.37.762.817.2.22411.48.662.018.0.44410.39.761.418.6.6649.210.8.8柠檬酸 . H 2O，分子量 =210.140.1mol/L液含 21.01g/L柠檬酸钠 . 2H 2O，分子量 =294.12 ；0.1mol/L液含溶溶醋酸缓冲

4、液（ 0.2mol/L，18）P0.2mol/L0.2mol/LP0.2mol/L0.2mol/LH NaAC(ml)HAC(ml)H NaAC(ml)HAC(ml)30.759.2545.904.10.6831.208.8057.003.00.8041.808.2057.902.10.0242.657.3558.601.40.2443.706.3059.100.90.4644.905.1059.400.60.68NaAC.3 H2O,分子量 =136.090.2mol/L溶液含 27.22g/L1）醋酸盐溶液的配制：醋酸醋酸钠缓冲液 (pH3.6)取醋酸钠 5.1g, 加冰醋酸 20ml，再

5、加水稀释至 250ml, 即得。醋酸醋酸钠缓冲液 (pH3.7)取无水醋酸钠 20g, 加水 300ml 溶解后，加溴酚蓝指示液 1ml 及冰醋酸 6080ml，至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至 1000ml，即得。醋酸醋酸钠缓冲液 (pH3.8)取 2mol/L 醋酸钠溶液 13ml 与 2mol/L 醋酸溶液 87ml, 加每 1ml 含铜 1mg 的硫酸铜溶液0.5ml, 再加水稀释至1000ml，即得。醋酸醋酸钠缓冲液 (pH4.5)取醋酸钠 18g, 加冰醋酸 9.8ml, 再加水稀释至 1000ml, 即得。醋酸醋酸钠缓冲液 (pH4.6)取醋酸钠 5.4g, 加水 50ml

6、 使溶解，用冰醋酸调节 pH值至 4.6 ，再加水稀释至 100ml，即得。醋酸醋酸钠缓冲液 (pH6.0)取醋酸钠 54.6g ，加 1mol/L 醋酸溶液 20ml 溶解后，加水稀释至 500ml，即得。用醋酸和醋酸钠配制的缓冲溶液的 PH=PKa+lgC(NaAc)/C(HAc) （在此， C(HAc)指醋酸的浓度， C(NaAc)指醋酸钠的浓度 ,Ka 是醋酸的解离常数 =1.8*10-5 （1.8 乘 10 的-5 次方）， PKa=-lgKa=4.75 ， 将 PH=5.5 代 入 ， 可 得 C(NaAc)/C(HAc)=5.6 通 常 我 们 配 制 时 会 使 C(HAc)=

7、0.1mol/L ，或是 C(HAc)=0.2mol/L 等。若 是 配 制 C(HAc)=0.1mol/L ， 则C(NaAc)=0.56mol/L 称 量 醋酸 钠固 体质 量为 82*0.56=46 克量取冰醋酸体积为 0.1*1000/17.5=5.7mL 。 将称好的醋酸钠和量好的冰醋酸加入 1000mL水中溶解、搅拌均匀即可。当然若想配制其它的浓度，也可照公式计算即可，通常缓冲溶液不能配的太稀， 否则缓冲能力要下降，太浓的话又浪费试剂。苯二甲酸氢钾 - 氢氧化钠缓冲液PH0.1mol/LNaOH(ml)0.2mol/L加水至苯二甲酸(ml)氢钾（ ml）4.00.4025.0010

8、0.004.23.6525.00100.004.47.3525.00100.004.612.0025.00100.004.817.5025.00100.005.023.6525.00100.005.229.7525.00100.005.435.2525.00100.005.639.7025.00100.005.843.1025.00100.006.045.4025.00100.006.247.0025.00100.000.2mol/L 苯二甲酸氢钾溶液：称取在硫酸干燥器中干燥过 24 小时的苯二甲酸氢钾 20.44g 溶于水中，稀释至 500ml。磷酸缓冲液（ 0.2mol/L）P0.2mol

9、/L0.2mol/LP0.2mol/L0.2mol/LHNaHPONaHPOHNaHPONaHPO24242424(ml)(ml)(ml)(ml)58.092.0761.039.0.80612.387.7772.028.0.02618.581.5781.019.0.24626.573.5787.013.0.46637.562.5791.58.5.68649.051.0894.75.3.80Na2HPO4 .2 H2O ,分子量=178.05 ，0.2mol/L溶液含 35.61g/LNaH2PO4 . 2 H2O , 分子量 =156.03 ，0.2mol/L溶液含 31.21g/LNaHPO

10、 . H2O,分子量 =138.03 ， 0.2mol/L24溶液含 27.6g/LNa2HPO4 .12 H2O,分子量=358.22，0.2mol/L溶液含 71.64g/L磷酸盐缓冲液（ PBS）配制方法0.01M PBSPBS(135 mMNaCl, 2.7 mMKCl, 1.5 mMKH2PO4, and 8 mM K2HPO4，pH 7.2)PBS 缓冲液（ pH7.27.4 ）：NaCl 137mmol/L ，KCl 2.7mmol/L ，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L称 7.9g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH2PO4(or

11、1.44gNa2HPO4)和 1.8g K2HPO4，溶于 800 ml 蒸馏水中，用 HCl 调节溶液的 pH 值至 7.4 ，最后加蒸馏水定容至 1 L 。保存于 4冰箱中即可。需要注意的是，通常所说的浓度 0.01 M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非 Na 离子或 K 离子的浓度， Na 离子和 K 离子只是用来调节渗透压的。母液的配制：0.2M Na2HPO4：称取 71.6gNa2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于 1000ml 水各种浓度 PB(pH=7.4) 的配制：先 配0.2MPB (

12、pH=7.4，100ml)： 取19ml0.2mol/L的NaH2PO4，Na2HPO4, 即可。81ml0.2mol/L的然后 只需将 0.2M PB (pH=7.4) 按相应比例适当稀释 即可，如：0.1M PB（PH=7.4） ：取 500ml 0.2M PB ，加水稀释至 1000ml 即可。0.01M PB （PH=7.4）：取 50ml 0.2M PB ，加水稀释至 1000ml 即可。0.02M PB （PH=7.4）：取 100ml 0.2 M PB ，加水稀释至 1000ml 即可。若 需 要NaCl 的 话 ， 加 入NaCl 至0.9%g/100ml ）即可。另：其它各种

13、另 PH 值的 0.2M PB（ 100ml) 配方 ：pH0.2M NaH2PO4 （ml）0.2MNa2HPO4（ml）5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.590.57.88.591.57.97938.05.394.70.01M 磷酸盐缓冲液（ PBS）配制方法称取 8g

14、 NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和 0.24g KH2PO4,溶于 800ml 蒸馏水中，用 HCl 调节溶液的 pH值至 7.4 ，最后加蒸馏水定容至 1L 即可。在 15lbf/in2(1034 105Pa)高压下蒸气灭菌（至少 20 分钟），保存存于室温或 4冰箱中。需要注意的是，通常所说的浓度 0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非 Na 离子或 K 离子的浓度， Na 离子和 K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话， 则需要在配置的时候分别加入 100 u/ml 青霉素和链霉素之后再调 PH、定容、灭菌消毒。PH7.67.47.27.

15、0H2O1000100010001000NaCl8.58.58.58.5Na2HPO4 2.22.22.22.2NaH2PO4 0.10.20.30.4根据经验来看，新鲜配置的PBS搅匀后其 PH值约在 7.2-7.4之间，可是在温度的影响下， 尤其在夏天，其电离常数发生了改变， 在经过昼夜的时间后， PH值会明显改变（我亲自测过偏酸） 。所以做实验的同学可要注意了， PH 值可能会影响实验结果， 甚至可能导致阴性。 所以务必记得这个时候和天气， 要加强实验条件控制问题。 每次使用前最好用试纸测一下过夜了的 PBS，如果发生偏酸或偏碱，注意重新换新液。PBS缓冲液称取 NaCl 8g，KCl

16、0.2g ，Na2HPO4?12H2O3.63g, KH2PO40.24g ，溶于 900ml 双蒸水中，用盐酸调pH值至 7.4 ，加水定容至 1L，常温保存备用。PBST缓冲液取 300l Tween-20 加入 PBS 100ml 中，混匀后即刻使用。现用现配。如果是把所有固体加大十倍， 配置为浓缩液， 工作时候十倍稀释，那么，在刚配好浓缩液时， PH在 6.5 左右，明显偏酸。不能用盐酸调。虽然可以用氢氧化钠颗粒调，但是有更方便的方法。十倍稀释以后， PH 自动升高到所需要的值。不需要其它任何处理。这个可以先取少量试一试，配好之后再测一次 PH8.0 的 PBS配方详细NaCl 137

17、mmol/L ，KCl 2.7mmol/L ，Na2HPO4 4.3mmol/L ， KH2PO4 1.4mmol/L向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。滴加浓盐酸将 pH值调节至 8.0 ，然后加入去离子水将溶液定容至 1 L 。高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述 PBS Buffer 中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充 1 mMCaCl2 和 0.5 mMMgCl2。0.05mol/L PBS( 磷酸缓冲液 Phosphate Buffer Solution ，PBS)的配制：甲液： 0.05mol/L Na2HPO4 溶液 ：称取磷酸氢二钠 9.465g 7.0

18、99g, 加蒸 馏水至 1000ml ; 乙液： 0.05mol/L KH2P04 溶液 : 称取磷酸二氢钾 , 9.07g 6.803g, 加蒸馏水至 1000m1。将甲乙液分装在棕色瓶内，于 4冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需 pH的缓冲液 , 见下表 :pH甲液 ml乙液 mI5.292.597.55.595.095.05.9110.090.06.2420.080.06.4730.070.06.6440.060.06.8150.050.06.9860.040.07.1770.030.07.3880.020.07.7390.010.08.0495.05.0你要配制 p

19、H=6.8 的 PBS，可用甲、乙液各 50ml 混合即可。硼酸缓冲液（ 0.2mol/L硼酸盐）P 0.05mol/0.2mol/LP 0.05mol/0.2mol/LHL 硼砂硼酸（ml） HL 硼砂硼酸（ml）（ml）（ml）71.09.083.56.5.4271.58.584.55.5.6472.08.086.04.0.8783.07.098.02.0.00硼砂 Na2B4O7.10H2O, 分子量 =381.43,0.05mol/L 溶液 =0.2mol/L 硼砂含 19.07g/L硼酸，分子量 =61.84,0.2mol/L 溶液含 12.37g/L 硼砂易失去结晶水， 必须在带塞

20、得瓶中保存； 硼砂溶液也可以用半中和的硼酸溶液代替盐酸 - 氯化钾缓冲液P 0.1mol0.02mo加 P 0.1mol0.02mo加H/LHCl(l/LKCl水 H/LHCl(l/LKCl水ml)(ml)至ml)(ml)至(（mmll）)194.562.701123.7638.1010.0.0107175.1012.451118.6840.6010.0.0208159.6820.151114.9842.5010.0.0309147.4026.301211.9044.0510.0.0400137.6431.20129.4645.0310.0.0501129.9035.00127.5246.25

21、10.0 .06020.02mol/LKCl溶液：溶 7.455g氯化钾于水中，稀释至 500ml苯二甲酸氢钾 - 盐酸缓冲液P0.1mol0.02mo加 P0.1mol0.02mo加H/LHCll/L 苯水 H/LHCll/L 苯水(ml)二甲酸至(ml)二甲酸至氢钾（氢钾（ml）m（ml）mii）246.6025.001314.8025.0010.0.0202239.6025.00139.9525.0010.0.0404233.0025.00136.0025.0010.0.0606226.5025.00132.6525.0010.0.0808320.4025.001.0000.02mol/L 苯二甲酸氢钾溶液：称取在硫酸干燥器中干燥过 24 小时额苯二甲酸氢钾 20.44g 溶于水中，