血清低密度脂蛋白胆固醇化学选择性抑制酶测定法

1、血清低密度脂蛋白胆固醇化学选择性抑制酶测定法1. 实验原理以往LDL-C的测定通常用总胆固醇、HDL-C和甘油三酯的检测结果进行综合，经Friedwald公式计算而得3。本LDL-C试剂盒为均相方法，省却离心步骤直接检测LDL-C。在反应第一步，LDL被选择性保护，而非LDL脂蛋白被酶处理。第二步中，LDL被释放，由胆固醇酶法显色反应选择性地测定出LDL-C。1) LDL试剂1 LDL被保护 CHE&CHO HDL,VLDL,乳糜微粒 胆甾烯酮H2O2 POD H2O2 H2O2) 保护的LDL + 试剂2 释放LDL CHE&CHO LDL-C 胆甾烯酮+H2O2 POD H2O2 H-DA

2、OS4-氨基安替比林 醌亚胺染料注：H-DAOS为：N-(2-羟基-3-丙磺基)-3,5-二甲氧基苯胺2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。2.2 类型：血清，肝素抗凝血浆。3. 标本存放：稳定性：-20保存至少可稳定1周。4. 标本运输：常温条件下保存运输。5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。6. 实验材料6.1 试剂 威特曼LDL-C测定试剂盒 试剂1；试剂2 6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂保存于28，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能

3、继续使用。6.1.4 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂6.2 校准品：使用威特曼公司提供的HDL/LDL校准品LDL-C对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与I

4、I质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。11. 计算方法：以TruCal HDL/LDL校准品HDL-C校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。12. 参考值范围 4合适范围 3.4mmol/L高度危险临界值 3.44.1mmol/L高度危险范围 4.1mmol/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13. 临床意义1,2：胆固醇由体细胞合成和来自对食物的吸收1，是细胞膜的组分和类固醇激素、胆汁酸的前体。血液中的脂

5、蛋白是脂肪和载脂蛋白的复合物，由它转运胆固醇。脂蛋白有四种形式：高密度脂蛋白（HDL），低密度脂蛋白（LDL），极低密度脂蛋白（VLDL）和乳糜微粒。LDL参与将胆固醇运送至外周细胞，而HDL负责从细胞中吸收胆固醇。四种形式的脂蛋白与冠状动脉粥样硬化有着明确的关系。低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）作用于动脉内膜形成动脉粥样硬化斑块，与冠心病(CHD)以及相关的死亡率有着非常密切的关系。即使总胆固醇在正常范围内，LDL-C浓度的升高也预示了高度危险。HDL-C 具有抵御斑块形成的作用，它与冠心病的发生呈负相关。事实上，低HDL-C值是独立的危险因子。进行个体总胆固醇的检测只是起过筛作用，如果要对

6、危险作较好的评估，必须另外进行HDL-C和LDL-C检测。近年来，通过控制饮食、改变生活方式的治疗、和/或使用各种药物治疗(特别他汀类药物HMG CoA还原酶抑制剂)临床试验，说明了降低总胆固醇和LDL-C水平可极大地减少CHD的危险。欧洲预防冠心病实施计划推荐：总胆固醇浓度应小于5.0mmol/L，低密度脂蛋白胆固醇浓度小于3.0mmol/L2。14. 操作性能14.1 线性范围：0.0310.3mmol/L14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU2700批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内精密度n=20

7、(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)批间精密度n=20(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)样品12.610.0160.63样品12.790.0361.29样品23.130.0210.66样品23.490.0511.45样品34.240.0280.6714.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与参考方法(x)，同时对50个样品进行LDL-C检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.02x+0.06mmol/L；r=0.994。14.4 灵敏度：本试剂的检测限为0.03mmol/L。14.5 病人结果可报告范围：0.0310.3mmol/L。15. 超出范围结果处理：本

8、法对LDL-C检测范围为0.0310.3mmol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+1稀释，重新测定，结果乘以2。16 病危报警值的处理：无。17. 方法局限性17.1 本法对LDL-C检测范围为0.0310.3mmol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+1稀释，重新测定，结果乘以2。17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度 2840mol/L，游离胆红素浓度860mol/L，结合胆红素浓度688mol/L，血红蛋白浓度5.00g/L，甘油三酯浓度11.3mmol/L时没有观察到干扰。18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进

9、行维修。19. 参考文献Rifai N, Bachorik PS, Albers JJ. Lipids, lipoproteins and apolipoproteins. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz textbook of clinical chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999.p.809-61.Recommendation of the Second Joint Task Force of European and other Societies o

10、n Coronary Prevention. Prevention of coronary heart disease in clinical practice. Eur Heart J 1998;19:1434-503.Bachorik PS. Measurement of low-density lipoprotein cholesterol. In: Rifai N, Warnick GR , Dominiczak MH, eds. Handbook of lipoprotein testing. Washington: AACC Press, 1997.p.145-60.Schaefer EJ, McNamara J. Overview of the diagnosis and treatment of lipid di