吸入一氧化氮对大鼠无心跳供体肺缺血再灌注损伤的影响

1、吸入一氧化氮对大鼠无心跳供体肺缺血再灌注损伤的影响【摘要】目的讨论一氧化氮(N)对大鼠无心跳供体(NHBD)肺缺血再灌注损伤(IRI)的影响。方法大鼠随机分为组:有心跳供体(HBD)组;组:NHBD-吸氧组;组:NHBD-吸氧N组。组在处死的同时灌注4低钾右旋糖苷液(LPD),组、组处死后维持辅助呼吸,放置室温中30in再灌注LPD液。供肺置于4LPD液中4h后行原位左肺移植术。术后维持辅助呼吸1h。组通气吸氧的同时吸入浓度为4010-6的N。结果与组比拟,组肺顺应性、动脉血氧分压高,肺组织丙二醛含量低(P0.05)。结论吸入低浓度N可减轻大鼠NHBD肺缺血再灌注损伤。【关键词】一氧化氮;组织

2、供者;肺移植;缺血;再灌注损伤;疾病模型,动物KEYRDS:nitrixide;tissuednrslungtransplantatin;isheia;reperfusininjury;diseasedels,anial肺移植是治疗晚期肺部疾病的成熟方法。但肺移植例数却一直得不到显著进步,其中一个重要原因就是适宜供体肺严重短缺。假设能应用无心跳供体(NHBD)肺,将极大缓解供肺来源紧张的状况。先前笔者的研究已证实NHBD肺可作为供体肺1。但缺血再灌注损伤(IRI)限制了NHBD肺应用。为减少IRI对NHBD肺造成的影响,保护NHBD肺的构造和功能的完善,笔者讨论一氧化氮(N)对NHBD肺的保护

3、作用。1材料和方法1.1动物安康雄性Sprague-Daley大鼠60只,体质量(35012.5)g(上海第二医科大学实验动物科学部,合格证书:医动字第07-23-4号)。1.2主要仪器动物人工呼吸机(DH-140B型,浙江医科大学医疗仪器实验厂);低钾右旋糖苷液(LPD,福州嘉华制药);N监测仪(英国iredial公司);N标准气体(北京普莱克斯气体);手术显微镜(SXP-1B型,上海医用光学仪器厂);血气分析仪(i-STAT便携式,美国雅培公司);1.3方法大鼠随机分为3组，供、受体各10只。组:有心跳供体(HBD)组;组:无心跳供体(NHBD)-吸氧组;组:NHBD-吸氧N组。组在处死的

4、同时灌注4LPD;组、组处死后维持辅助呼吸,放置室温中30in再灌注LPD液。供肺置于4LPD液中4h后行原位左肺移植术。术后维持辅助呼吸1h。组通气吸氧的同时吸入浓度为4010-6的N。供体大鼠腹腔注射戊巴比妥钠50g/kg。仰卧位,气管插入16号穿刺针,连接动物人工呼吸机,吸入氧浓度(Fi2)50%,呼吸形式为持续容量控制,呼吸频率8090in-1,潮气量1L/100g,保持呼气末正压(PEEP)23H2(1H2=9.8Pa)。自左股静脉注射肝素钠500IU。5in后剪开胸骨及腹壁,剪断腹主动脉放血。心脏停跳的同时于肺动脉主干插入20号穿刺针,结扎并固定,剪破左心耳,维持通气的同时自穿刺针

5、灌注4LPD液20L,灌注压25H2,在肺吸气末切下心肺组织,立即浸泡在4LPD液中5in,剪下膨胀的左肺,保存在4LPD液中4h。处死供体鼠后,室温下维持通气30in再灌注LPD液。NHBD-吸氧组吸入气不含N,NHBD-吸氧N组吸入浓度为4010-6的N。受体鼠麻醉、插管后,右侧卧位,经左第5肋间切口充分暴露左肺门,尽可能靠近远心端剪除左肺。供肺包以冰水浸泡的湿纱布,放入左侧胸腔,在手术显微镜下9-0锦纶线依次吻合左肺静脉、左主支气管、左肺动脉,连续吻合主支气管膜部,软骨部连续吻合,10-0锦纶线连续吻合肺动脉,连续吻合肺静脉。左肺获得再灌注后,连续加大PEEP,使其充分膨胀。组受体在肺移

6、植过程中维持N通气(浓度为40106)。1.4观察指标左肺再灌注后1h,经右第5肋间结扎右肺门,采集数据。呼吸机直接读取数据肺顺应性=潮气量/(吸气末压-呼气末压)受体鼠结扎右肺门前后15,30in分别从颈动脉放血0.3L,测定动脉血氧分压(Pa2)和二氧化碳分压(Pa2)。取11的肺组织,冲洗干净,研磨成匀浆,按文献2硫代巴比妥法测DA含量。LPD液灌注前取11右肺组织,结扎右肺门后0.5h取11左肺组织行光镜组织学检查(H-E染色40)。1.5统计学处理数据以xs表示,采用SPSS10.0统计软件处理,组间比拟采用ne-ayANVA方差分析。P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1肺组织

7、顺应性、DA含量及动脉血氧分压组与组比拟差异无统计学意义;组与组比拟差异有统计学意义(表1,2)。表13组实验大鼠肺顺应性和肺组织DA含量比拟略表23组实验大鼠动脉血气分析比拟略2.2肺组织光镜检查组和组肺泡间质均有一定量炎性细胞浸润(P0.05),组炎性细胞浸润相对较轻(图1)。3讨论当前,适宜肺供体的严重短缺极大制约了肺移植的开展。Egan等首次应用无心跳供体肺于肺移植研究中,发现狗肺死后尸体原位热缺血1h、取出冷保存4h、移植1h后仍可维持完善的气体交换和血流动力学功能3。本课题组早期研究显示,与HBD移植肺相比,大鼠NHBD肺热缺血30in,移植后肺的顺应性、肺能量代谢物含量,肺气体交

8、换功能维持正常1。本次研究显示,组和组移植肺顺应性、血气分析和肺组织DA含量差异无统计学意义。但是,供肺在保存过程中存在的IRI,不仅造成肺移植患者术后的早期死亡,而且增加了急性排挤反响的发生率,导致长期存活受体的移植物失功4。NHBD肺还存在热缺血过程,随着热缺血时间的延长,术后IRI更加严重1,5。移植肺发生IRI的过程中,内源性N明显减少6-7。内源性N可对肺IRI产生明显的保护效果。研究人员运用多种方法处理实验对象,包括腹腔注射曲匹地尔、鼻饲氯匹格雷、肺保护液内参加硝酸甘油(NTG)、左旋精氨酸等,以促进机体内源性N的产生,减轻IRI,使肺功能显著改善8-12。但所有这些实验都是在有心

9、跳供体的肺移植中所获得的成果。为了获取构造和功能保存更好的NHBD肺,本研究在前期工作的根底上,给予采用外源性低浓度N(40106)于大鼠NHBD肺移植中,并贯穿于供肺保存、手术期间及术后1h整个过程。结果发现,吸入N组(组)和单纯吸氧组(组)相比,吸气末压分别为(19.090.35)H2和(21.370.61)H2,肺组织顺应性分别为(0.1790.0020)和(0.1580.0058),两者比拟有统计学意义,提示肺的IRI得到明显改善。结扎右肺门后15,30in的Pa2也得到很大的提升,说明移植肺氧合功能也有一定程度的进步;同时肺组织DA含量显著降低。DA是氧自由基介导的细胞膜脂质过氧化产

10、物,是氧自由基致机体组织细胞损伤的重要指标,是器官IRI最主要的因素,检测DA是判断是否发生脂质过氧化反响的重要方法2。组DA降低,提示IRI造成氧自由基对细胞的损害明显缓解。这和肺组织病理切片上所观察到的结果是一致的。本研究结果与文献报道根本一致13-15。笔者认为,吸入低浓度外源性N对NHBD肺的IRI具有一定的缓解作用。【参考文献】1廖东山,廖崇先,李增棋.大白鼠无心跳供体肺移植模型的建立J.中华实验外科杂志,2022,21(6):747-749.2StrieterR,KasaharaK,AllenR,etal.ytkineinduedneutrphil-derivedinterleuk

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