乌司他汀治疗失血性休克的实验研究

1、乌司他汀治疗失血性休克的实验研究【摘要】目的讨论乌司他可应用失血性休克治疗时血管活性物质一氧化氮(N)和血管内皮素(ET)程度的变化及其意义。方法复制大鼠失血性休克模型，于复苏时予以乌司他汀治疗，采用酶联免疫法(ELISA)测定大鼠血浆一氧化氮合酶(NS)及血管内皮素(ET)的含量。结果对照组血浆NS呈逐渐下降趋势，而治疗组2h及4h时NS均明显上升(P0.05)。对照组血浆中iNS在体克末及复苏时均明显上升，而治疗组在复苏后iNS测定值明显下降。治疗组在复苏后2h及4h与对照组相比对ET的增高有明显抑制(P0.05)。结论失血性休克后体内iNS及ET升高，乌司他汀对其升高有抑制作用，并可促进

2、NS的释放，从而对机体起保护作用。【关键词】失血性休克；乌司他汀；N；ET乌司他汀(ulinastatin，UTI)具有稳定溶酶体膜，抑制溶酶体酶及炎症介质的释放和产生，抑制过量超氧化物的生成和去除产生的超氧化物，去除氧自由基的作用，可以较好的控制炎症开展1，但其抗休克的治疗机制并未完全明了。本研究通过建立失血性休克大鼠模型，于休克不同时期给予不同剂量的UTI，观察其对休克过程中一氧化氮(N)及内皮素ET)的影响，讨论UTI在失血性休克过程中的治疗作用及可能机制。1材料与方法1.2动物模型的制作SD大鼠采用双侧股骨创伤法建立创伤性休克模型2。大鼠腹腔注射乌拉坦和氯醛糖麻醉后，右侧颈动脉、颈静脉

3、插管，以生理记录仪监测血压变化并输液复苏，用枸橼酸钠抗血凝，稳定10in后，从0.3高处用2.5kg铁轮自由落体砸致大鼠两后肢上端骨折，动脉压(AP)至40Hg时记录休克时间，断肢包扎止血，通过放血或输液维持该血压1.5h。在此期间一侧股动脉插管以备放血和采血。复苏时回输3.5倍失血量的林格液，使血压恢复至失血前的34以上并保持。拔管缝合下肢创口，按手术常规无菌操作。复苏前死亡的大鼠不计入本组实验，另取大鼠补充。1.3动物分组SD大鼠随机分为二组：失血性休克对照组予静注林格液；失血性休克UTI治疗组在休克末期静注乌UTI(广东天普生化医药股份)5万U/kg(溶于林格液)，每组各10只。动物在实

4、验前禁食12h，禁水8h。1.4测定各组血浆一氧化氮合酶(NS)及ET1.4.1血浆NS浓度变化在休克前、休克末、复苏后2、4h各时相点静脉采血2l，注入含10依地酸二钠(EDTA)30l和抑肽酶40l的试管中混匀，3000rin离心10in，别离血浆置-20冷冻保存。每份离心液取50l按NS检测试剂盒要求操作，在波长530n处测吸光度，按每分钟生成1nlN为一个NS酶活力单位计算。1.4.2血浆ET浓度变化分组及处理同前。股静脉取血并应用放免试剂盒采用放射免疫法测定血浆ET浓度。1.4.3UTI对失血性休克大鼠存活率的影响对照组和治疗组均给予林格液复苏，复苏时，治疗组给予5万Ukg的UTI。

5、然后放鼠笼内记录，计算24h存活率。1.5统计学处理应用统计软件行t检验，24h存活率比拟行2检验。2结果2.1各组原生型NS(NS)和诱生型NS(iNS)血浆浓度变化在休克前、休克末、复苏后2、4h各时相点数值见表1。对照组血浆NS呈逐渐下降趋势，而治疗组2h及4h时NS均明显上升(P0.05)。对照组血浆iNS在休克末及复苏时均明显上升，治疗组在复苏后iNS测定值明显下降(P0.01)。转贴于论文联盟.ll.表1各组NS和iNS血浆浓度变化略与对照组比拟：1)P0.05，2)P0.012.2各组ET测定值血浆浓度变化对照组和治疗组相比拟，在休克前、休克末、复苏后2h、4h各时相点数值见表2

6、。对照组ET值在休克末及复苏后2h、4h较休克前显著增高(P0.05)。治疗组ET值在休克末也较休克前显著增高(P0.05)，但在复苏后2h及4h与对照组相比对ET的增高有明显抑制(P0.05)。表2各组ET测定值血浆浓度变化略与同组休克前比拟：1)P0.05，与对照组比拟：2)P0.052.3UTI对存活率的影响对照组24h存活率为9，而治疗组24h存活率有显著进步，分别为49.7和79.6，两组相比显著差异(P0.01)。3讨论在失血性休克时组织灌注减少引起缺氧和体内产生内毒素，细胞内溶酶体膜被破坏，释放出各种水解酶使重要脏器发生大范围的损伤。UTI是从男性尿中别离纯化的尿胰蛋白酶抑制剂，

7、为糖蛋白，是一种典型的Kuniz型蛋白酶抑制剂，具有两个活性功能区。由于两个活性功能区均有很广的抑酶谱，且不完全重叠，可以同时竞争性或非竞争性抑制胰蛋白酶、磷脂酶AZ、透明质酸酶、弹性蛋白酶等多种水解酶的活性以及炎性介质的释放，可改善休克时的循环状况，抑制休克的恶性循环，减少器官功能衰竭的发生、对休克的治疗提供了有力的支持。本研究说明UTI可明显抑制休克时iNS及ET的产生和释放。目前发现NS有两种：一种为NS，主要分布在血管内皮细胞及神经系统中，合成和释放的N发挥生理调节功能；一种为iNS，主要分布在巨噬细胞、库普弗细胞、肿瘤细胞及肝细胞中，其基因正常情况下不表达，在创伤、休克、感染、再灌注损伤等病理条件下其活性增加，合成大量的N，产生细胞毒作用，参与机体的病理损害，同时还抑制了构造型NS的活性，使内源性N的合成减少，调节机体正常生理功能的才能减弱，加重了休克的病理生理过程3。而ET显著增加可引起循环衰竭，表如今低血压、心排血量降低及左右心室做功指数降低。ET以旁分泌及自分泌的方式作用于细胞上的特异性受体，引发其强烈的缩血管效应。休克后血浆ET程度升高，在休克早期使外周血管