基因工程试题

1、基因工程试题A 一、名词说明（每题2 分,共 20 分）1、转染 : 2、质粒不亲和性 : 3、cDNA 文库: 4、RACE: 5、基因工程 : 6、RT-PCR 7、插入失活 : 8、S-D 序列: 9、穿梭质粒载体 : 10、多克隆位点 : 二、挑选题（每题1 分,共 15 分）供体 II 受体 III 载体 IV 抗体 V 配体 1（）基因工程操作的三大基本元件是:I I + II + III I + III + IV II + III + IV II + IV + V III + IV + V 2（）基因工程的单元操作次序是 增,转,检,切,接 切,接,转,增,检 接,转,增,检,切

2、 检,切,接,增,转 切,接,增,转,检 3 生物工程的上游技术是 基因工程及分别工程 基因工程及发酵工程 基因工程及酶工程 基因工程及细胞工程 基因工程及蛋白质工程 4 以下对逆转录酶描述正确选项：A 依靠于 RNA的 DNA聚合酶或称为 RNA指导的 DNA聚合酶 B 依靠于 cDNA的 DNA聚合酶或称为 cDNA指导的 DNA聚合酶 C 依靠于 DNA的 DNA聚合酶或称为 DNA指导的 DNA聚合酶 D 依靠于 RNA的 RNA聚合酶或称为 rNA 指导的 RNA聚合酶 5 以下对限制性内切酶描述正确选项 限制性内切酶可识别任一的 DNA序列 使用限制性内切酶时,有时可显现星活性 限

3、制性内切酶可识别碱基数不超过 5 个 限制性内切酶切割碱基序列产生都是黏性末端6 T 4 -DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起,其底物的关键基团是 2 -OH 和 5 -P 2 -OH 和 3 -P 3 -OH 和 2 -P 3 -OH 和 5 -P 5 -OH 和 3 -P 7 以下有关连接反应的表达,错误选项 连接反应的正确温度为 12 16 连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于 10% 连接反应缓冲体系的 ATP 浓度不能高于 1mM 连接酶通常应过量 2-5 倍 DTT 在反应中可加也可不加8（）以下哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大 . A 质粒 B 黏粒

4、 C 酵母人工染色体 YAC D 噬菌体9 （）载体的功能是 I 运输外源基因高效进入受体细胞 II 为外源基因供应复制才能III 为外源基因供应整合才能 I I + II I + III II + III I + II + III 10 考斯质粒（ cosmid）是一种 自然质粒载体 由 入-DNA 的 cos 区与一质粒重组而成的载体 能裂解受体细胞的烈性载体 具有溶原性质的载体 能在受体细胞内复制并包装的载体11 以下有关基因的描述,错误选项 蛋白质是基因表达唯独的产物 基因是 DNA链上具有编码功能的片段 基因也可以是 RNA 基因突变不肯定导致其表达产物转变结构 12（）关于 cDN

5、A的最正确的提法是： A 同 mRNA互补的单链 DNA B 同 mRNA互补的双链 DNA C 以 mRNA为模板合成的双链 DNA D 以上都正确 13（）某一重组 DNA （ 6.2 kb ） 的载体部分有两个 SmaI 酶切位点；用 SmaI 酶切 后凝胶电泳上显现四条长度不同的带子,其长度总和与已知数据吻合,该重组分子插入片段上的 SmaI 酶切位点共有 5 个 4 个 3 个 2 个14（） 同一种质粒 DNA,以三种不同的形式存在,电泳时,它们的迁移速率是： A OC DNASC DNPLDNA B SC DNAL DNAOC DNA C L DNAOC DNASC DNA D

6、SC DNAOC DNAL DNA 15（） cDNA 法获得目的基因的优点是 胜利率高 不含内含子 操作简便 表达产物可以分泌 能订正密码子的偏爱性三、简答题（每题 5 分,共 25 分）1、什么是包涵体？2、PCR反应体系包括哪些内容？基本反应过程是什么？3、限制性核酸内切酶的活性受哪些因素影响？4、作为基因工程载体必需具备的基本条件是什么？5、基因工程产生的理论基础是什么？四、论述题（每题 10 分,共 40 分）1 简述载体构建的一般过程2 大肠杆菌作为基因工程受体菌的优点和缺点是什么？3 如何有效地提高外源基因的表达效率？4 试述 3RACE技术原理和方法基因工程试题标准答案及评分标

7、准 A 一、挑选题（每题 1 分,共 15 分）1、 A 2、 A 3、 A 4、 A 5 、B 6 、D 7 、E 8 、C 9、 E 10 、B 11 、A 12、 C 13 、D 14 、B 15、 B 二、名词说明（每题 2 分,共 20 分）1、转染：专指感受态的大肠杆菌细胞捕捉和表达噬菌体 DNA 分子的生命过程；2、质粒不亲和性：在没有挑选压力的情形下,两种不同质粒不能够在同一宿主细胞系中稳固地共存的现象；3、cDNA 文库：是指某生物某一发育时期所转录形成的 cDNA 片段与某种载体连接而成的克隆的集合；4、RACE ：是一种通过 PCR 进行 cDNA 末端快速克隆的技术,是

8、以 mRNA 为模板反转录成 cDNA 第一链后用 PCR 技术扩增出某个特异位点到 3,或 5,端之间未知序列的方法；5、基因工程 :在分子水平上的进行的遗传操作,指将一种或多种微生物的基因或基因组提取出来,或人工合成基因,按着人们的愿望,进行严密的设计,经过体外加工重组,转移到另一种生物体的细胞内,使之能在受体细胞遗传并获得新的遗传性状的技术；6、RT-PCR: 先用逆转录酶作用于mRNA ,以寡聚dT 为引物合成cDNA 第一链,然后用已知一对引物,扩增嵌合分子,这种方法称为逆转录PCR 7、Insert inaction: 即插入失活,基因工程载体上的某些挑选标记基因经常含某种或某几种

9、限制性内切酶的单一酶切位点,在该位点用相应的限制性内切酶处理,并将外源DNA 片段插入该位点,就插入的外源DNA 片段将破坏原有基因的读码框,往往导致原有的挑选标记基因无法翻译表达,或即使翻译表达,形成的也是丧失了原有生物活性的蛋白质,这一现象称为插入失活；8、S-D 序列：在大肠杆菌 mRNA 的核糖体结合位点上,含有一个转译起始密码子及同 16S 核糖体 RNA 3,末端碱基互补的序列,该序列最初由 Shine 、Dalgarno 发觉,故后来命名为 ShineDalgarno 序列,简称 S-D序列；9、穿梭质粒载体：指一类由人工构建的具有两种不同复制起点的挑选标记,因而可在两种不同宿主

10、细胞中 存活和复制的质粒载体；10、MCS ：指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点的 DNA 片段；三、简答题（共 25 分,每题 5 分）1、什么是包涵体？重组蛋白在胞内表达时,经常以不溶性蛋白集合成的晶状物形式存在,这种晶状体即包涵体；包涵体的 形成是外源蛋白的高效表达时的普遍现象,这是由于肽链折叠过程中部分折叠的中间态发生了错误聚合,而 不是形成成熟的自然态或完全解链的蛋白；2、PCR反应体系包括哪些内容？基本反应过程是什么？PCR 反应体系所要求的条件: a、被分别的目的基因两条链各一端序列相互补的DNA 引物（约 20 个碱基左右）；b、具有热稳固性的酶如：T

11、agDNA 聚合酶； c、dNTP ；d、作为模板的目的DNA 序列, E 无菌水,F,缓冲液 PCR 反应体系的基本反应过程：预变性、变性、退火、延长、复延长；3、限制性核酸内切酶的活性受哪些因素影响？酶的纯度； DNA 样品的纯度； DNA 的甲基化程度；酶切反应的温度与时间； DNA 分子的构型；限制性核酸内切酶的反应缓冲液；4、作为基因工程载体必需具备的基本条件是什么？能在宿主细胞内进行独立和稳固的自我复制 具有合适的限制内切酶位点 具有合适的挑选标记基因5、基因工程产生的理论基础是什么？是现代分子生物学领域理论上的三大发觉和技术上的三大创造；理论上的三大发觉：证明了 DNA 是遗传物

12、质 揭示了 DNA 分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理 遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定 技术上的三大创造：限制核酸内切酶的发觉与 DNA 切割 DNA 连接酶的发觉与 DNA 片段的连接 基因工程载体的讨论与应用 四、问答题（每题 10 分,共 40 分）1 简述载体构建的一般过程 A 目的基因分析（1）ORF 分析（ 2）酶切位点分析 B 载体挑选与分析（1）多克隆位点分析（2）抗性标记分析（3）启动子与其他挑选标记分析 C 连接体系与连接时间确定 2 大肠杆菌作为基因工程受体菌的优点和缺点是什么？优点：大肠杆菌培育便利、操作简洁、成本低廉,基础生物学、分子遗传学等方面的背景学问清

13、晰,对 其基因表达调控的分子机理也比较明白,而且历经二十年的基因工程实践,大肠杆菌已进展成为一种安全的 基因工程试验体系,有多种适用的寄主菌株和载体系列,大肠杆菌易于进行工业化批量生产；缺点：在通常情形下,细菌的RNA聚合酶不能识别真核的启动子；很多真核基因的蛋白质产物需要经过翻译后的加工修饰,如正确的折叠和组装,而细菌中通常并没有这样的修饰机制,从而可能导致真核基因 在大肠杆菌中的翻译产物无法产生有活性的蛋白；外源真核基因所表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白酶识别,并被当做“ 异已分子” 降解掉；3 如何有效地提高外源基因的表达效率？提高启动子强度 缩短启动子同克隆基因间距离 高效的翻译起

14、始序列 高效的转录终止区提高质粒拷贝数及稳固性 用以下方法提高翻译水平：调整 SD 序列与 AUG 间的距离用点突变的方法转变某些碱基增加 mRNA 的稳固性的 减轻细胞的代谢负荷：诱导表达表达载体的诱导复制 提高表达蛋白的稳固性,防止其降解：克隆一段原核序列,表达融合蛋白采纳某种突变菌株表达分泌蛋白质4 试述 3RACE 技术原理和方法PCR 用于扩增代表 mRNA 转录物某一单位点与其 3 或 5 末端之间区域的部分 cDNA 称为快速扩增 cDNA末端技术；假如已敿目的 mRNA 的一片段链内短序列,据此或设计基因特异引物,用原先存在的 polyA 尾（3 末端）或附加的同聚尾（5 末端）互补的序列做末端引物,就可