重组类生物制品蛋白原液检验

1、重组类生物制品蛋白原液检验重组类生物制品蛋白原液检验第1页参考资料重组类生物制品蛋白原液检验第2页目录序言原液检定半成品检定成品检定重组类生物制品蛋白原液检验第3页一、序言重组DNA蛋白制品是采取重组DNA技术，对编码所需蛋白质基因进行遗传修饰，利用质粒或病毒载体将目标基因导入适当宿主菌，从而表示并翻译成蛋白质，经过提取纯化等步骤制备而成含有生物学活性蛋白制品，用于疾病预防和治疗。重组类生物制品蛋白原液检验第4页质量控制必要性药品要求使用安全、有效、合理质量控制与分子大小、结构特征、质量属性复杂程度以及生产工艺相关。重组类生物制品蛋白原液检验第5页二、原液检定理化检定生物检定残余杂质检定重组类

2、生物制品蛋白原液检验第6页理化检定蛋白含量 紫外光谱纯度 分子量等电点 判别试验肽图 N端氨基酸序列重组类生物制品蛋白原液检验第7页蛋白质含量检测目标： 其它检测项目检测前提 制备药品制剂前提方法：凯氏定氮法 福林酚法（Lowry法）双缩脲法 BCA法考马斯亮蓝法 紫外-可见分光光度计法重组类生物制品蛋白原液检验第8页紫外光谱检测目标：对于某一重组蛋白来说，其最大吸收波长是固定，在生产过程中每批产品紫外吸收光谱应该是一致检测方法：用水或者生理盐水将样品稀释至100-500g，在光路1cm、波长230-360nm处进行扫描重组类生物制品蛋白原液检验第9页纯度目标：纯度是重组类蛋白质药品检测主要指

3、标之一检测方法：SDS非还原电泳HPLC法重组类生物制品蛋白原液检验第10页分子量目标：对于某一重组蛋白来说，其相对分子质量应该是一致检测方法：SDS还原型电泳重组类生物制品蛋白原液检验第11页等电点目标：生产过程中，批与批之间重组蛋白等电点应该是相对一致检测方法：等电聚焦电泳毛细管电泳重组类生物制品蛋白原液检验第12页判别试验目标：对于重组类蛋白药品来说，其含有抗原性检测方法： 免疫印迹 免疫斑点重组类生物制品蛋白原液检验第13页肽图目标：肽图分析可作为与天然产品或参考品蛋白质一级结构作精密比较伎俩，与氨基酸组成和序列分析合并研究，可作为蛋白质一级结构准确判别。方法：裂解法：化学法 蛋白酶裂

4、解法 特殊方法处理分析法：反相HPLC、 SDS电泳、毛细管电泳、质谱分析重组类生物制品蛋白原液检验第14页N端氨基酸序列目标：蛋白质结构主要指标检测方法：基础原理为Edman化学讲解法 現已经有全自动蛋白测序仪重组类生物制品蛋白原液检验第15页生物学活性检测 目标：基因工程化学本质是蛋白质、多肽，其活性由产品氨基酸序列及其空间结构决定。 其生物学活性是蛋白质药品主要质控指标。活性测定必须采取国际上通用方法，用国际或国家标准品对测定结果进行校正，以国际单位或指定单位表示。重组类生物制品蛋白原液检验第16页方法： 体外测定法 体内测定法 酶促反应测定法 免疫活性方法重组类生物制品蛋白原液检验第1

5、7页残余杂质检测宿主菌残余蛋白质宿主DNA残留量检测残余抗生素残留量细菌内毒素重组类生物制品蛋白原液检验第18页宿主菌残余蛋白质目标：在临床上需要重复屡次注射药品，则需要做残余宿主菌蛋白质含量测定方法：双抗夹心ELISA重组类生物制品蛋白原液检验第19页宿主菌DNA残留量宿主菌DNA含有致癌性，是其所含可编码活性致肿瘤基因特异性DNA序列。方法：DNA探针杂交法 荧光染色法重组类生物制品蛋白原液检验第20页残余抗生素目标：生产工艺标准上不使用抗生素。假如使用了抗生素，不但要在纯化工艺上去除，也要对终产品进行检测。最常见抗生素是氨苄西林抗生素残留量检测法（培养法），依据抗生素抑菌作用，此试验仅为

6、定性试验。重组类生物制品蛋白原液检验第21页细菌内毒素检测由革兰氏阴性菌产生细菌内毒素，内毒素为外源性致热源，可引发发烧反应。方法：细菌内毒素能够引发凝胶反应，从而创建了鲎试剂检测法，此法现已广泛应用，另外还有光度测定法。重组类生物制品蛋白原液检验第22页制剂检测外观检测 可见异物检测澄明度检测 pH检测 渗透压摩尔浓度检测 水分检测装量差异（最低装量） 无菌检测生物学活性 判别试验重组类生物制品蛋白原液检验第23页外观、可见异物、澄明度检测是指在要求条件下，肉眼可观察到。装量差异（最低装量）检测是考查制品均匀性。pH检测：蛋白质是带电荷，在其等电点处易沉淀。人体内环境是弱碱性。重组类生物制品蛋白原液检验第24页水分测定目标：是对生物制品稳定性影响较大，水分越少，越稳定方法： 费休氏法：1、容量滴定法、2、库伦滴定法 烘干法 减压干燥法 甲苯法 气相色谱法 重组类生物制品蛋白原液检验第25页渗透压摩尔浓度生物膜含有半透膜性质，简单扩散属于渗透，阻