rh血型分析专题知识讲座

1、rh血型分析专题知识讲座rh血型分析专题知识讲座第1页RH血型研究历史19世纪40年代发觉了人类红细胞RH血型19世纪60年代,发觉了RH血型不合有效治疗方法19世纪80年代,成功分离了RH蛋白19世纪90年代,认识了RH基因结构20世纪90年代,清楚了RHD和RHCE氨基酸序列rh血型分析专题知识讲座第2页RH血型系统发觉1940年,发觉多数人红细胞上有一个血型抗原物质,与恒河猴（Rhesus monkey)红细胞抗原物质是相同.1940年还发觉,三例ABO血型相同，同种输血后却发生了严重输血反应.同一年，一名O型孕妇产后大出血，输入O型丈夫血液后发生了溶血性输血反应，这是人类因为妊娠产生同

2、种免疫作用第一例汇报这就表明除ABO血型系统外,还存在另外血型系统.rh血型分析专题知识讲座第3页RH血型系统命名“Rh”是依据恒河猴英语单词前两位字母而由来咱们现在通常把红细胞上含有D抗原称为RH阳性，而不含有D抗原称为RH阴性RH系统还有C、c 、E 、e 四种抗原，也有用1、2、3、4、5来表示，D+红细胞有用RH1表示，而D-细胞用RH-1来表示，对应等位基因用R1和R-1来表示rh血型分析专题知识讲座第4页RH血型意义临床意义很大!RH阴性个体在亚洲汉族人当中很稀有，比率为0.3%左右，在欧美等白种人中，百分比较高为15%左右。RH血型不合输血,有可能产生危及生命溶血性输血反应，胎、

3、母RH血型不合妊娠有可能发生新生儿溶血病，严重者可造成新生儿死亡,或是使胎儿死于子宫内。RH血型检验和ABO血型同等主要，已被列为血型常规检验之一。rh血型分析专题知识讲座第5页RH血型是怎样遗传?RH(-)基因是隐性基因。当RH阳性父母都带有RH阴性基因，且同时遗传给后代时，其后代即表现为RH阴性。当双亲中有一人是RH(-)时，其儿女为RH(-)机会增大。rh血型分析专题知识讲座第6页RHD(-)有何意义?正常RHD阴性者，血浆中不含抗-D抗体，所以当RHD阴性人第一次输入RHD阳性血液时，不会发生凝集反应，但此时RHD阴性者却会因为各种免疫而产生抗D抗体，当再次输入RHD阳性血液时，就可能

4、发生严重输血反应甚至造成死亡。RHD阴性妇女怀有RH阳性胎儿，胎儿红细胞就会刺激母体产生抗-D抗体，当再次怀有RHD阳性胎儿时，能够造成新生儿溶血性贫血而死亡。rh血型分析专题知识讲座第7页RHD(-)者怎样自我保护?RHD阴性者普通情况下尽可能防止输入RHD阳性血液，必须输注相同RH阴性血，以免因为RHD血型不合而发生输血反应。80%RHD阴性病人在输入200ml阳性红细胞后，在2-5个月后，血浆中可检测到抗体。RHD阴性妇女应注意婚后防止流产，确保第一胎正常分娩，以防发生RH新生儿溶血病。有资料统计14.3%屡次妊娠D阴性孕妇产生抗-D抗体，造成新生儿溶血病。rh血型分析专题知识讲座第8页

5、血站为RHD(-)者做哪些工作?常年在数以万计供血人群中筛选RHD(-)供者。对有流产史RH阴性妇女，在妊娠早期做一些关于RH血型系统产前免疫检验。一旦发生RH新生儿溶血病，马上用RH阴性同型血液进行换血治疗，挽救新生儿生命。rh血型分析专题知识讲座第9页关于RhD表型1.RhD阳性 中国汉族：约99.7% 白人：约85%2.RhD阴性 中国汉族：约0.03% 白人：约15%3.弱D（Weak D)4.个别D（Partial D)5.Del型现今称谓：D Variant（D变异型）rh血型分析专题知识讲座第10页弱D型(Weak D)血清学表现为盐水介质阴性,IAT检测为阳性.D抗原数量降低,

6、但抗原表位数目基础不变.抗原质量不变碱基突变形成，改变氨基酸位于细胞膜层中间或细胞膜层内rh血型分析专题知识讲座第11页个别D(Partial D)红细胞缺乏一些（部份）抗原表位与正常抗原相比，抗原质量发生了改变.(正常红细胞上抗原包含个表位）形成原因：基因单或多核苷酸碱基取代、杂交基因。所改变氨基酸位于抗原分子细胞膜外个别.rh血型分析专题知识讲座第12页个别危险性许多个别红细胞与抗直接反应，但有些需要用才能判定，细胞反应强度不一样，取决于试剂制造商个别个体是能够产生抗，所以必须接收血液，在日常工作中许多个别都被定为，往往在产生抗体以后才被发觉rh血型分析专题知识讲座第13页DEL型(D 放

7、散型)盐水介质阴性,IAT检测阴性,但吸收放散试验阳性.红细胞上D抗原数目比弱还要少,红细胞上D抗原质量也有改变一些型红细胞抗原缺失一些表位，能够产生抗抗体.第九外显子碱基突变形成.rh血型分析专题知识讲座第14页经典抗原密度比较抗原型别红细胞上抗原数正常阳性个体10.000 - 30.000个别型个体Weak D 型个体DEL 型个体rh血型分析专题知识讲座第15页各种试验对应试剂血型血清学 分子生物学单克隆抗-D PCR试剂盒（商品化）IgM IgG 自行设计引物（难度大）IgM + IgG多克隆抗-D 怎样用？何时用？能处理什么？D抗原检测方法rh血型分析专题知识讲座第16页RHD血型判

8、定流程盐水介质检测阳性阴性抗人球蛋白介质阳性阴性阳性加做直抗试验吸收放散试验阴性放散试验再次定型阳性阴性 DelPCR-SSP受检标本Weak D/Partial D测序rh血型分析专题知识讲座第17页RHD基因进化RHAGRHceRHce和RHce复制体RHCE基因和RHD基因rh血型分析专题知识讲座第18页RHD基因进化RHD基因祖先基因是Rh 相关糖蛋白基因(RHAG 基因),该蛋白有一条N多糖链.RHAG和RHD、RHCE有38%同源性，在红细胞上含有相同拓扑结构，由位于6号染色体上单个基因编码。RHAG不含有多态性，所以它不携带血型抗原，不过它对RHD和RHCE定向到膜上有主要作用。

9、没有RHAG，RHCE和RHD都不能表示到红细胞膜上.在红系分化中先表示RHAG,然后表示RHCE,再表示RHD.RHAG基因首先复制形成Rhce基因, 第二次复制发生在同一染色体短臂,形成“Rhce 复制体”,随即Rhce基因 和其复制体沿不一样路径进化,最终形成现今人类RHD基因,而RHce 基因经过突变或与RHD基因发生交换形成常见Rhce RHcE RHCe RHCE基因.rh血型分析专题知识讲座第19页RhD基因结构RH基因结构当前已确定:位于染色体1p34.3-36.1,主要由RHD和RHCE两个基因组成.这两个基因 3, 端相对,相隔约有 3万bp.在它们之间为小膜蛋白1基因(S

10、MP1),即SMP1基因.在RHD基因两侧各有一段约9000bp 侧翼序列片段,称为RH盒子(Rhesus box )序列,5端为上游R盒子(Upstream),长9142bp ,3端为下游R盒子(Downstream Rhesus box),长为9145bp ,上下游盒子方向相同,与RHD基因一致.RHD和RHCE基因各由10个外显子组成,二者有43个碱基有差异,其中第1、2 、8外显子序列基础一致，所以绝大多数RHD基因测定中，引物选择扩增RHD基因3-7以及9-10外显子。通常只有D抗原阳性个体拥有一或二条RHD基因，而D阴性个体则缺失RHD基因，RHD阴性个体RHD基因缺失发生在上下游

11、盒子之间，并形式一个融合（Hybrid Rhesus box)。rh血型分析专题知识讲座第20页RHD基因locusrh血型分析专题知识讲座第21页RH 和基因结构图1p36.11rh血型分析专题知识讲座第22页RHD等位基因形成基因缺失：RHD基因完全缺失形成RHD(-)单倍体；基因交换：因为RHD基因和RHCE基因在RH座位上方向相反，二个同源基因之间发生交换机率增大，通常RHCE基因为供者基因，RHD为受者基因；碱基变异：包含突变、缺失、mRNA拼接位点变异等。 rh血型分析专题知识讲座第23页近几年研究发觉 D基因结构存在种族差异,RhD(-)白种人中,D基因是完全缺失.在黑人中,RH

12、D（-）个体，D基因却完整存在，66%D基因在第3内含子和第4外显子之间有37bp插入片断，造成了抗原不表示。黄种人中RhD(-)个体表现出显著多态性.rh血型分析专题知识讲座第24页黄种人D基因多态性D基因完全缺失(10个外显子全部缺失)造成了D抗原不表示.D基因个别缺失,(有两边缺失和中间缺失)造成D抗原不表示.D基因完整存在,(碱基突变),造成D抗原不表示.rh血型分析专题知识讲座第25页RHD基因阳性、D抗原阴性等位基因 基因交换形成融合等位基因rh血型分析专题知识讲座第26页RHD基因阳性、D抗原阴性等位基因 碱基变异形成等位基因rh血型分析专题知识讲座第27页Del等位基因 rh血

13、型分析专题知识讲座第28页All DEL alleles are associated with Cerh血型分析专题知识讲座第29页RhDel型基因变异K409K又叫1227A,指第九外显子最终一个基因GA突变，也是第九外显子与第九内含子拼接位点碱基突变，即使位置氨基酸末改变，不过剪接点突变造成产生了不正常抗原rh血型分析专题知识讲座第30页弱D等位基因（种）rh血型分析专题知识讲座第31页个别D等位基因rh血型分析专题知识讲座第32页 中国人RhD分子背景rh血型分析专题知识讲座第33页中国人RhD分子背景D阳性个体RHD基因与在其它民族中报道正常RHD基因序列相同；真实D阴性中国人中以R

14、HD-CE(2-9)-D2等位基因为主，比率为10.5%；同时还存在比率不低个体因碱基变异造成RHD基因ORF错位，造成正常D抗原不能表示。在真实D阴性中国人中RHD基因总阳性率为15.8%rh血型分析专题知识讲座第34页中国人RhD分子背景中国人Del个体主要携带RHD 1227A等位基因(K409K)。该等位基因是Genbank收录第一个Del等位基因 (GenBank统计AF390110)，但也是中国人中唯一发觉Del等位基因，而在欧洲人中除RHD1227A等位基因外，还观察到另外几个Del等位基因弱D表型个体当前发觉主要是弱D15型、还发觉了2例RHD 1227A等位基因携带者；个别D

15、表型观察到DVa(Hus)和DVI III型。 rh血型分析专题知识讲座第35页中国人RHD等位基因rh血型分析专题知识讲座第36页RHD基因分型技术应用血清学定型结果难以判定,为了预防一些弱D被误定为RH-,用分子生物学检测作为辅助伎俩；D抗原弱阳性个体弱D型或个别D型别判定；经过羊水预测胎儿D表型；慢性屡次输血患者、大量输血患者、同种免疫或本身免疫溶血性贫血患者、以及红细胞直接抗球蛋白试验阳性患者D抗原表型检测和纠正；对于中国人，判定Del表型 rh血型分析专题知识讲座第37页rh血型分析专题知识讲座第38页中国人RHD未来研究方向 真实D阴性个体RHD基因序列研究，深入了解产生中国人D抗

16、原阴性特征分子机制，发觉更多RHD等位基因 ：D抗原弱表现型个体分子背景研究，用以了解中国人弱D和个别D表型常见型及频率。当前在中国人中观察到弱D型是弱型和二种个别D型，而国际上报道弱D型确有很各种，而不一样分子机制形成其它个别D表型也很多rh血型分析专题知识讲座第39页中国人RHD未来研究方向相关Del研究，Del在中国人中比率非常高，综合近几年文件，在经IAT确认D阴性群体中平均为28.1%。尽管当前国家没有要求DEL型血液不能供给给临床,不过从理论上来讲,DEL型是有可能刺激机体产生抗体。稀有血型分子生物学研究和调查。 rh血型分析专题知识讲座第40页1.RhD阳性/阴性，同型输注2.D

17、变异型输血2.1弱D围产期妇女被误定为D-，而给予了无须要RHD免疫球蛋 白，一样是无害2.2弱D血液被误定为D-,而输注给了D-患者，要注意，尽管弱D抗原免 疫原性较弱，但也可能使D-者致敏2.3弱D1.2.3型产生抗-D可能性较小，弱D11和15型已经有产生抗-D报 道，其它弱D产生抗体风险不清楚。RHD血型输血策略2.4个别D患者输入D+血液后，可能会产生针对其缺失抗原个别抗-Drh血型分析专题知识讲座第41页3.抢救情况下输血3.1正常成年男性或不需再生育女性3.2未生育女性：要高度重视，见临床输血技术规范第十条 对于Rh（D）阴性和其它稀有血型患者，应采取本身输血、同型输血或配合型输血。第十五条 输血科（血库）要逐项查对输血申请单、受血者和供血者血样，复查受血者和供血者ABO血型（正、反定型），并常规检验患者Rh（D）血型（急诊抢救患者紧急输血时Rh(D)检验可除外），正确无误时可进行交叉配血。RHD血型