蚕豆根尖微核试验检验花露水对人体及环境的危害

1、蚕豆根尖微核试验检验花露水对人体及环境的危害朱园园 安徽大学生命科学学院 09 生物科学类D00914035摘要 采用蚕豆根尖微核试验技术，选取不同浓度的六神花露水为诱变剂 , 分别处理蚕豆根尖细胞, 计算蚕豆根尖细胞的微核率。发现蚕豆根尖经过不同浓度的花露水处理液处理后 , 根尖细胞形态受到不同程度的损伤, 根尖长度明显变短,颜色发黄、变黑。结果显示, 不同浓度的花露水处理蚕豆根尖细胞可诱发不同频率的微核率 , 在一定浓度范围内 , 微核率随花露水浓度升高而增高，达到一定浓度后，微核率出现下降趋势。推断一定浓度的花露水对蚕豆根尖细胞有一定的诱导作用。Abstract: By using th

2、e micronucleus test technique, we useddifferent concentrations of Liushen Florida Water, as mutagen, todispose the cells of Vicia faba root tip respectively, and calculatedthe rate of Vicia faba root tip cells micronucleus. We found apicalcell morphology in Vicia faba root tip cells was damaged to d

3、ifferentextent after the treatment of different concentrations of LiushenFlorida Water, while the root tip s length became shorter and thecolor became yellow or black. The result shows that differentconcentrations of Florida Water s treatment in root tip cells of Viciafaba could induce micronucleus

4、rate in different frequencies. Themicronucleus rate increases in a certain concentration range with the increasion in concentrations of Floridawater, but trends to decline when reaching a certain concentration.So we guess that Florida Water in a certain concentration range have some certain inducing

5、 effect on Vicia faba root tip cells.关键词 蚕豆根尖 ; 微核试验 ; 花露水 ; 微核千分率Key words: Vicia faba root tip; micronucleus test; Florida Water;micronucleus rate随着生活水平的日益提高 , 由化工原料合成的生活日用品日益成为人类日常生活中必不可少的一部分。其中，花露水就是夏天人们使用频率很高的生活用品之一，其对于防蚊虫和止痒消肿都有不错的功效。但是作为直接接触皮肤类的化学产品，花露水中包含少量劣质香精及75%左右的酒精，会引起某些过敏体质产生过敏; 且花露水含有

6、一种叫“伊默宁”的成分，可使蚊虫丧失对人叮咬的意识，但如果在患皮炎后涂抹花露水，“伊默宁”成分可导致皮肤出现过敏反应，加重皮炎症状; 此外，根据网上查阅资料可得，芬芳剂部分成分有毒，制造芬芳剂至少需要5000 种化学成分，只有不到20%做过毒性试验，结果是都含有毒性，被不少国家列为危险品，而每种香水的化学成分会多达600 多种。花露水也是一种香水类产品，其所有成分是否均做过毒性试验，我们不得而知。蚕豆根尖微核试验是一种世界范围内广泛推广运用的环境致突变性检测技术。其具有材料方便、培养简单、技术容易掌握、成本低等优点 , 而成为目前研究和运用较多的、拟以代替动物培养细胞检测环境致癌、致畸、致突变

7、物质的高等植物体细胞检测系统。本文即运用蚕豆根尖微核实验方法, 研究花露水对蚕豆根尖遗传毒性的作用 , 进 而为花露水对人体及环境的影响提供一定的理论参考。材料与方法实验材料蚕豆 （ 实验室提供） ，六神花露水（ 超市购买 ）实验试剂及工具乙醇，冰醋酸，醋酸地衣红染液，改良苯酚染液，盐酸，蒸馏水试剂 :95%工具 : 镊子，培养皿，脱脂棉，烧杯，载玻片，盖玻片，显微镜，试管，标签，滴管实验方法蚕豆根尖培养: 选择无虫、饱满、大小均匀的蚕豆种子放入盛有蒸馏水的培养皿中， 26? 左右浸泡 24h, 其中换水 3 次。种子吸胀后，在培养皿中铺一层脱脂棉，倒入少量蒸馏水，将种子置于其中培养2 天，大

8、部分初生根长至1,2cm 左右时进行微核试验。处理方法 :预实验 : 将上述六神花露水分别配成0.1%， 1%， 10%， 20%， 30%， 40%， 50%，60%， 70%， 80%， 90%， 100% 十二种浓度的溶液（ 蒸馏水溶解） ，设蒸馏水为对照，选取生长良好、根长一致的幼苗随机分组，对蚕豆进行处理后，用蒸馏水恢复培养24 h 。预实验后发现在20%以上的溶液中的蚕豆全部发黑死亡，故将浓度调整为1%，2%， 3%， 4%， 5%， 6%， 8%， 10%八种浓度花露水溶液，蒸馏水做对照，考虑花露水中含有大量酒精，故添加75%酒精溶液做对照。制片与观察：取根尖用卡诺氏固定液固定2

9、4 h ,用1 mol?L盐酸解离。用醋酸地衣红染色后进行制片镜检观察。每组镜检 3个根尖，每个根尖计数1000个左右细胞。1.4数据处理根据观测结果，计算各处理下微核的千分率：微核率（MCN尸测试样品（或对照）观察到的微核个数/测试样品（或对照）观察 细胞总数X 1000%“污染指数”判别：（实测微核率/标准（蒸储水）微核率）污染指数在0,1.5区间为基本没有污染；污染指数在1.5,2区间为轻度污染；污染指数在2,3.5区间为中度污染；污染指数在3.5以上为重度污染。结果与分析2.花露水对蚕豆根尖染色体的影响用不同浓度花露水处理蚕豆根尖后，可发生多种类型的染色体异常，包括细胞 核凸起、单微核

10、、双微核、细胞核融合、染色体桥和染色体片断等，且微核可出现在细胞有丝分裂的不同时期。花露水对蚕豆根尖染色体影响花露水对蚕豆根形态的影响蚕豆根经不同浓度花露水处理后，颜色和形态发生变化，因花露水中大量的酒 精可以使细胞的蛋白质变性而杀死细胞，所以在花露水浓度较高时，蚕豆变黑，根 尖不能生长。在花露水浓度超过 20淅，蚕豆根尖变黑变烂，无法继续生长；10%- 20麻度间处理的蚕豆根尖出现变黑现象，但可以继续生长；10%浓度以下处理的根尖虽有部分变黄变软现象，但不影响生长。经花露水处理后变色的蚕豆根尖花露水对蚕豆根尖细胞微核率的影响第一次观察所得结果浓度 0% 1% 2% 3% 4% 5% 6% 8

11、% 10% 75%精编号1千2 2 5 5 7 10 14 19 14分率（%）编号2千3 3 4 5 8 11 17 16 15 分率（%）平均值 2.5 2.5 4.5 5 7.5 10.5 15.5 17.5 14.5（先）第二次观察所得结果浓度 0% 1% 2% 3% 4% 5% 6% 8% 10% 75%精编号1千1 2 3 6 7 11 13 19 13分率（%）编号2千2 2 5 5 9 11 15 18 13分率（%）平均值 1.5 2 4 5.5 8 11 14 18.5 13（先）第三次观察所得结果浓度 0% 1% 2% 3% 4% 5% 6% 8% 10% 75酒%精 编

12、号1千3 3 5 6 7 12 16 19 14分率（%）编号2千2 3 4 6 8 11 19 18 12分率（%）平均值 2.5 3 4.5 6 7.5 11.5 17.5 18.5 13（先）最终结果浓度 0% 1% 2% 3% 4% 5% 6% 8% 10%千分率平 均值 2.2 2.5 4.3 5.5 7.7 11 15.7 18.2 13.（%）5浓度 1% 2% 3% 4% 5% 6% 8% 10%1.14 1.95 2.50 3.50 5.00 7.07 8.27 6.14 污染指（无（轻（中（中（重（重（重（ 重数 污染 ） 度污度污度污染） 度污染 ） 度污染 ） 度污度污

13、染）染） 染） 染）20151050024681012 浓度小结与分析结果分析 :在从1%-8%的浓度范围中，微核率为正相关，但是在10%这一浓度中，微核率突然下降。我们猜想原因可能是在这一浓度时花露水的主要成分酒精的含量过高，限制了根尖细胞的分裂，所以造成微核率的降低。实验条件允许的话，希望以后可以对以上猜想进行验证。实验方案改进建议 :实验中75%酒精对照组中的蚕豆苗全部死亡，猜想是酒精浓度过高所致，应根据花露水的浓度梯度进行对应设立对应浓度的酒精对照组。后期实验内容设想 :在 10%的浓度后设定12%， 14%， 16%几组浓度，查看是否还是有千分率下降的情况发生 ;如果可以的话，希望可以将花露水中的酒精蒸发掉，用剩下的溶剂来看是否酒精是主要的影响因素;用不同种类、品牌的花露水进行微核率的比较。致谢感谢尹老师的指导感谢实验试剂准备室老师对实验物品的提供感谢薛纯同学的改良苯