微生物真菌专题知识讲座

1、微生物真菌专题知识讲座微生物真菌专题知识讲座第1页2 概 念真菌(fungus)是一类含有经典细胞核，有核膜和核仁，胞浆内有完整细胞器，无根、茎、叶，不含叶绿素，无光合色素，细胞壁含几丁质和纤维素单细胞或多细胞异养真核细胞型微生物。微生物真菌专题知识讲座第2页真菌概念真菌(fungus)：真核细胞型微生物含有经典细胞结构（细胞核、细胞器、细胞壁）无根、茎、叶，不含叶绿素细胞壁含几丁质和（或）纤维素以腐生或寄生方式摄取养料能进行有性生殖和（或）无性繁殖生长迟缓微生物真菌专题知识讲座第3页4 概 念真菌分布广泛，种类繁多，大多数无害，甚至有利。有些真菌也是造成动植物病害病原，与医学相关约数百种，少

2、数真菌能够引发人类感染性、中毒性及变态反应性疾病。多年来，因为抗菌药品广泛应用和或应用激素、抗癌药品造成机体免疫功效降低等原因，机会致病真菌感染也显著增多。微生物真菌专题知识讲座第4页原核细胞型微生物与真核细胞型微生物比较 原核细胞型微生物真核细胞型微生物 细胞核结构核膜 无 有核仁 无 有分裂方式 主要以二分裂 有丝分裂，减数分裂细胞质结构细胞膜 常缺乏固醇 常有固醇 细胞壁 含肽聚糖 含几丁质和（或）纤维素细胞器 较简单，有中介体 复杂，有内质网和高尔基体核糖体 70S 80S 呼吸系统 质膜或中介体 线粒体 微生物真菌专题知识讲座第5页 第一节 分 类真菌分类主要依据为：有性生殖各种器官

3、 无性菌丝和孢子及菌落形态等特征 大多数学者认为真菌应作为一个独立界真菌界，并曾将真菌分为两个门，即黏菌门和真菌门,真菌门又依据其生物学性状等传统地分为五个亚门。最新真菌分类是把真菌界分为四个门。微生物真菌专题知识讲座第6页分 类真菌门：5个亚门（传统） 鞭毛菌亚门 接合菌亚门 子囊菌亚门 担子菌亚门 半知菌亚门（医学相关： 后4个亚门）最新分类：真菌界：4个门： 接合菌门 担子菌门 子囊菌门 壶菌门微生物真菌专题知识讲座第7页第二节 基础特征一、形态特征真菌比细菌大，用普通光学显微镜低倍或高倍镜就可见。真菌菌体外有一层坚硬细胞壁；其细胞膜含固醇而细菌无。按形态可将真菌分为单细胞和多细胞两类。

4、微生物真菌专题知识讲座第8页第二节 基础特征一、形态特征单细胞真菌： 圆形或卵圆形，常见于酵母菌或类酵母菌多细胞真菌： 菌丝+孢子 交织成团菌丝体（霉菌） 二相性真菌： 37呈酵母型，25呈丝状型真菌微生物真菌专题知识讲座第9页单细胞真菌 形态：圆形或椭圆形，如酵母型和类酵母型真菌。（1）酵母型真菌：有孢子，无菌丝 菌丝：无 繁殖方式：从母细胞芽生 菌落形态：与细菌相同 微生物真菌专题知识讲座第10页芽生孢子微生物真菌专题知识讲座第11页酵母菌在培养基上菌落形态微生物真菌专题知识讲座第12页单细胞真菌（2）类酵母型真菌：芽生孢子与假菌丝 菌丝：假菌丝 假 菌 丝：长芽体可伸进培养基内 繁殖方式

5、：从母细胞芽生 菌落形态：与酵母型相同，由假菌丝联结成假菌丝体，称为类酵母型菌落微生物真菌专题知识讲座第13页假菌丝假菌丝：类酵母菌进行出芽生殖时，子母细胞不马上分离而以狭小面积相连，这种藕节状细胞串为假菌丝。 假菌丝与真菌丝显著不一样处在于其两细胞间有一细腰，而不象真正菌丝横隔处两细胞宽度一致。 微生物真菌专题知识讲座第14页微生物真菌专题知识讲座第15页微生物真菌专题知识讲座第16页多细胞真菌 由菌丝和孢子两大个别组成 1.菌丝 (hypha) 2.孢子 (spore)微生物真菌专题知识讲座第17页18（一）菌丝（hypha)真菌在适宜环境中，由孢子出芽长出芽管，逐步延长呈丝状，称为菌丝（

6、hypha）。菌丝继续分支，交织成团，称菌丝体（mycelium）。菌丝分为营养菌丝和气生菌丝，气生菌丝中能形成孢子叫做生殖菌丝。有些真菌菌丝含有隔膜，叫有隔菌丝；有些真菌菌丝无隔膜，叫无隔菌丝。微生物真菌专题知识讲座第18页不一样形态菌丝含有判别意义(1) 单纯菌丝 细长管状组织，有粗有细分枝或不分枝，有隔或无隔，有色或无色。(2) 球拍状菌丝 菌丝在隔膜部位一端膨大球拍状，排列规整。(3) 破梳状菌丝 菌丝一侧有不规则梳齿状凸起，梳齿参差不齐如破梳状。(4) 螺旋状菌丝 菌丝呈弹簧状，有规律性旋转状生长。(5) 结节状菌丝 稍膨大侧枝细胞、菌丝端细胞或中间性细胞弯曲成团，互缠成结。(6)

7、鹿角状菌丝 菌丝顶端呈不规则分枝，状如鹿角。微生物真菌专题知识讲座第19页微生物真菌专题知识讲座第20页微生物真菌专题知识讲座第21页22（二）孢子(spore)孢子（spore）是真菌繁殖结构。孢子分有性与无性两类。孢子与细菌芽胞不一样。 真菌孢子 细菌芽胞抵抗力不强，6070短时间即死强，煮沸短时间不死数目一条菌丝可产生多个孢子一个细菌体只形成一个芽胞作用为繁殖方式之一不是繁殖方式形状形状各种多样圆形或椭圆形真菌孢子与细菌芽胞区分微生物真菌专题知识讲座第22页二相真菌：一些真菌可因寄生环境及培养条件（营养、温度、氧气等）不一样而交替形成两种形态，即在室温中呈霉菌型，在37摄氏度或体内呈单细

8、胞酵母型，这类真菌有双向性，所以称之为双态真菌或二相真菌。如球孢子菌、组织胞浆菌及芽生菌。二相真菌微生物真菌专题知识讲座第23页二相真菌机体内寄生37单细胞型：多细胞型：含动物蛋白培养基酵母菌沙保氏培养基25普通培养基25丝状菌微生物真菌专题知识讲座第24页孢子 (spore)孢子是生殖结构，由生殖菌丝产生。是判定和分类依据。 (1) 无性孢子 不经过两性细胞配合而产生 ，菌丝上细胞分化或出芽生成，病原性真菌大多形成无性孢子。 (2) 有性孢子同一菌体或不一样菌体上2个细胞融合经减数分裂形成。绝大多数为非致病性真菌所含有。微生物真菌专题知识讲座第25页26无性孢子分为：分生孢子：大分生孢子小分

9、生孢子叶状孢子：芽生孢子关节孢子厚膜孢子孢子囊孢子有性孢子分为：卵孢子、接合孢子、子囊孢子及担孢子（二）孢子(spore)微生物真菌专题知识讲座第26页无性孢子1) 叶状孢子 由菌丝细胞直接形成 芽生孢子 经过发芽方式形成圆形或卵形细胞 关节孢子 由菌丝分化成长方形几个节段，胞壁稍厚 厚膜孢子 是一个休眠细胞，条件适宜可再发芽微生物真菌专题知识讲座第27页微生物真菌专题知识讲座第28页2) 分生孢子 常见一个无性孢子形状、大小、结构、颜色等：分类、判定 大分生孢子 体积较大，多细胞性。孢子呈纺锤形，棍棒状等。 小分生孢子 体积小，单细胞性，外壁薄，球形、卵形、梨形以及棍棒状等。无性孢子微生物真

10、菌专题知识讲座第29页微生物真菌专题知识讲座第30页生殖菌丝末端细胞分裂或收缩形成；也可从菌丝侧面出芽形成大分生孢子形态微生物真菌专题知识讲座第31页3) 孢 (子) 囊孢子由丝末端形成一个囊状结构（孢子囊），内有许多孢囊孢子。 无性孢子微生物真菌专题知识讲座第32页多细胞真菌形态微生物真菌专题知识讲座第33页微生物真菌专题知识讲座第34页真菌孢子和细菌芽胞区分真菌孢子细菌芽胞抵抗力不强，60-70短时间杀死强，煮沸短时间不死数目一条菌丝可产生多个孢子一个细菌体只形成一个芽孢作用为繁殖方式之一不是繁殖方式形成位置可在细胞内外形成只在细菌细胞内形成形状形态、色泽多样圆形或椭圆形微生物真菌专题知识

11、讲座第35页繁殖与培养 真菌繁殖方式依靠孢子及菌丝进行繁殖:有性繁殖 无性繁殖无性繁殖 1.芽生: 酵母菌及酵母样真菌 2.裂殖: 以二分裂法进行繁殖 3.萌管: 萌发芽管，芽管伸延后形成菌丝 4.隔殖: 在分生孢子梗某一段落形成一隔膜，随之原生质浓缩而形成一个新孢子。孢子可再独立繁殖。 微生物真菌专题知识讲座第36页真菌培养特征 真菌营养要求不高 常见沙保培养基 ：蛋白胨、葡萄糖、氯化钠和琼脂。 温度：2228，但一些深部感染真菌为37。 pH：4.06.0 生长速度:较慢“三低两高”微生物真菌专题知识讲座第37页常见培养基沙氏琼脂培养基Sabourauds Agar蛋白胨 10.g葡萄糖

12、40.0g琼脂 20.0gpH值5.60.2 蛋白胨提供碳源和氮源；葡萄糖提供能源；琼脂是培养基凝固剂。 微生物真菌专题知识讲座第38页马丁氏(Martin)培养基(分离真菌用)配方KH2PO4 1gMgSO4 7H2O 0.5g 蛋白胨 5g葡萄糖 10g琼脂 15-20g水 1000mLpH 自然此培养液1000mL加1%孟加拉红1%水溶液3.3mL.临用时每100mL培养基中加入1%链霉素液0.3mL. 微生物真菌专题知识讲座第39页基础原理葡萄糖主要作为碳源,蛋白胨主要作为氮源,KH2PO4和MgSO4 7H2O作为无机盐,为微生物提供钾,磷,镁离子.而孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线

13、菌抑制剂,对真菌无抑制作用,因而真菌在这种培养基上能够到达优势生长,从而到达分离真菌目标.微生物真菌专题知识讲座第40页察氏琼脂Czapek Dox Agar硝酸钠磷酸氢二钾硫酸镁氯化钾硫酸亚铁蔗糖琼脂 3.01.00.50.50.0130.015.0 原理： 硝酸钠提供氮源；磷酸氢二钾是缓冲剂； 硫酸镁、氯化钾、硫酸亚铁提供必须离子； 蔗糖提供碳源；琼脂是培养基凝固剂。用途：用于青霉,曲霉判定及保留菌种用(GB标准)微生物真菌专题知识讲座第41页孟加拉红培养基（虎红培养基）Rose Bengal Medium蛋白胨 葡萄糖磷酸二氢钾硫酸镁(无水)琼脂孟加拉红氯霉素 5.010.01.00.5

14、20.00.0330.1 微生物真菌专题知识讲座第42页原理：蛋白胨提供碳源和氮源；葡萄糖提供能源；磷酸二氢钾为缓冲剂；硫酸镁提供必须微量元素；琼脂是培养基凝固剂；氯霉素可抑制细菌生长；孟加拉红作为选择性抑菌剂可抑制细菌生长，并可减缓一些霉菌因生长过快而造成菌落漫延生长。 微生物真菌专题知识讲座第43页在沙保培养基上， 3种类型菌落： 1.酵母型菌落 ：菌落柔软、光滑、湿润。镜下可见单细胞性芽生孢子，无菌丝。隐球菌菌落 2.类酵母型菌落（酵母样菌落） ：和酵母型菌落相同，镜下可见假菌丝。白色念珠菌菌落 3.丝状型菌落 ：由多细胞菌丝体组成絮状菌落（一个别向空中生长，并形成孢子）。丝状真菌或霉菌

15、菌落。 (菌落较大)真菌培养特征微生物真菌专题知识讲座第44页微生物真菌专题知识讲座第45页赭曲霉微生物真菌专题知识讲座第46页镰刀菌及其大分生孢子微生物真菌专题知识讲座第47页黄曲霉菌落形态微生物真菌专题知识讲座第48页黄曲霉镜下特征微生物真菌专题知识讲座第49页青霉菌菌落形态微生物真菌专题知识讲座第50页青霉菌镜下形态微生物真菌专题知识讲座第51页镰刀菌菌落形态微生物真菌专题知识讲座第52页镰刀菌镜下特征微生物真菌专题知识讲座第53页变异与抵抗力变异性 屡次传代或孵育过久，轻易变异（形态、结构、菌落性状、色素以及生理性状 (毒力)改变。 抵抗力 热：不强。孢子普通60经1h即被杀灭（不一样

16、于芽胞）。 干燥、日光、紫外线及各种化学药品：耐受性较强。 1%3%石碳酸、2.5%碘酊、0.1%升汞及10甲醛液：较敏感。 微生物真菌专题知识讲座第54页55三、 致病性致病物质： 细胞壁糖蛋白（有内毒素样活性）、毒素、荚膜等。致病方式： 病原性真菌感染（主要是外源性真菌感染） 条件致病性真菌感染（主要是内源性真菌） 真菌变态反应性疾病（皮炎、哮喘等） 真菌性中毒（毒素引发） 真菌毒素与肿瘤关系（黄曲霉毒素等）微生物真菌专题知识讲座第55页真菌性感染 真菌病 (mycoses)： 由真菌引发感染并表现临床症状者 真菌致病力比细菌弱 致病性真菌、条件致病性真菌原发性感染： 球孢子菌(Cocci

17、diodes)、 皮炎芽生菌 (Blastomyoes dermatitidis)、 组织胞浆菌(Histoplasma)等继发性感染： 机体防御机能显著低下时。 致病机理：真菌粘附能力，对免疫系统功效抑制，胞壁中酶类微生物真菌专题知识讲座第56页真菌性超敏反应 按性质分：感染性超敏反应：感染后, 型接触性超敏反应： 吸入或食入, 型按部位分: 皮肤超敏反应: 皮炎、湿疹、荨麻疹、瘙痒症等呼吸道超敏反应: 支气管哮喘以及过敏性鼻炎消化道超敏反应 微生物真菌专题知识讲座第57页真菌毒素中毒 农作物、食物或饲料上表现: 1. 肝、肾、神经、造血系统损伤 2. 致癌性: 黄曲霉毒素,等 （原发性肝癌

18、）微生物真菌专题知识讲座第58页 免疫力不强，不能形成稳固病后免疫 1. 抗体作用 2. 细胞免疫及超敏反应 免 疫 性 微生物真菌专题知识讲座第59页微生物学检验法 取材：浅部：鳞屑、病发或甲屑 深部：分泌物、排泄物、体液、 痰液及血液直接镜检： 粘稠或含角质标本:先加10%KOH，加温后镜检 液体标本：离心后镜检培养： 含抗生素沙保弱培养基 25 (丝状真菌) 37 (酵母型真菌) 微生物真菌专题知识讲座第60页3.菌种判定(1)丝状真菌：依据菌落形成所需要时间，在不一样条件下生长情况，菌落表面及后面形态、色素，培养基中有没有色素，培养物用乳酚棉蓝染色后镜检找特征性标志结构。主要是形态学判

19、定，如直接涂片观察，小培养显微镜判定， 微生物真菌专题知识讲座第61页毛霉 根霉 梨头霉 微生物真菌专题知识讲座第62页微生物真菌专题知识讲座第63页微生物真菌专题知识讲座第64页微生物真菌专题知识讲座第65页微生物真菌专题知识讲座第66页曲霉结构图微生物真菌专题知识讲座第67页烟曲霉菌落烟曲霉,光镜 X400微生物真菌专题知识讲座第68页黄曲霉菌落黄曲霉,光镜 X200 微生物真菌专题知识讲座第69页黄曲霉镜下特征微生物真菌专题知识讲座第70页黑曲霉菌落 黑曲霉,光镜 X200微生物真菌专题知识讲座第71页土曲霉菌落 土曲霉，光镜 X200 微生物真菌专题知识讲座第72页构巢曲霉菌落 构巢曲

20、霉,光镜 X400微生物真菌专题知识讲座第73页杂色曲霉菌落杂色曲霉,光镜 X400微生物真菌专题知识讲座第74页青霉菌菌落形态微生物真菌专题知识讲座第75页青霉菌镜下形态微生物真菌专题知识讲座第76页镰刀菌菌落形态微生物真菌专题知识讲座第77页镰刀菌镜下特征微生物真菌专题知识讲座第78页2)酵母菌判定：形态学判定主要观察有没有假菌丝产生，如有则为念珠菌属，如无则为念珠菌以外酵母菌;玉米吐温诱导下特征菌丝及特征孢子检验，血清芽管形成在形态学基础上还必须进行生化判定：有标准判定，自动仪器判定，显色判定，其中，自动仪器判定(如API20C，ID32C等)，显色判定对于酵母样真菌判定，特点是快速简便;微生物真菌专题知识讲座第79页标准判定是按传统双歧表流程判定(包含糖同化试验，糖发酵试验，CAFC酚氧化酶试验，尿酶试验，KNO3同化试验，脂肪酸需求试验)，是真菌判定金标准，系统准确，缺点是程序繁琐，耗时长，与临床治疗不太适应。血清学玻片凝集试验，动物致病性试验，微生物真菌专题知识讲座第80页血清学方法检测真菌抗原成份 念珠菌感染和曲霉感染血清学检测可分为抗体检测和抗原检测两大类；因为发