免疫学实验：免疫电泳

1、实验课要求1、不考试，实验报告80%+平时成绩20%2、报告内容：实验原理，实验材料与仪器，实验方法，实验结果，讨论与分析3、图：铅笔，标题在下，要有必要的图释， 彩图会加分 表：铅笔，标题在上免疫学 实验二1、示教：单向扩散、双向扩散、免疫电泳、火箭电泳2、操作：对流免疫电泳颗粒性抗原（如完整的细胞、细菌）与相应抗体以合适的比例发生特异性反应时，在一定温度和电解质存在的条件下，形成肉眼可见的凝集物，称为凝集反应(agglutination)。可溶性抗原（如蛋白质、多糖等）与相应抗体以合适的比例发生特异性反应时，在一定温度和电解质存在的条件下，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应。凝集反应分类

2、单向免疫扩散试验:在抗原抗体反应时，只有其中的一种成分发生扩散 双向免疫扩散试验:抗原和抗体在琼脂内各自向对方扩散，在最恰当的比例处，形成抗原抗体沉淀线火箭免疫电泳:将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术对流免疫电泳试验:将双向免疫扩散与电泳相结合的定向加速的免疫扩散技术沉淀反应总结 单向 火箭免疫电泳 免疫扩散 双向 对流免疫电泳+电泳 +电泳 1、单向扩散 在含有特异抗体的琼脂板中打孔，并在孔中加入定量的抗原，当抗原向周围扩散后与琼脂中抗体相结合，即形成白色沉淀环，其直径或面积与抗原浓度呈正相关。将一定量的抗体混合于琼脂内，倾注于玻片上，凝固后打孔在孔中加入定量的抗原，使可溶性抗原在

3、半固体琼脂介质中向四周扩散观察抗原抗体在比例合适处形成白色沉淀环量取沉淀环的直径，通过抗原标准品，计算待测抗原的浓度大小实验步骤：意义：主要用于检测正常人群或患者血清免疫球蛋白水平的定量测定。 2、 双向扩散双向免疫琼脂扩散 是指可溶性抗原与相应抗体在半固体琼脂介质中相互扩散，彼此相遇后形成一定类型的特异性沉淀线。 实验结果：1融合性沉淀孤，说明两孔中抗原相同，为同一性反应2两沉淀线独自形成并交叉，说明两孔中的抗原完全不同，为非同一性反应3. 融合性沉淀弧出现支线，或同时有另一条或两条沉淀线，说明两孔中抗原有相同成分又有不同成分，此为部分同一性反应实验意义： 通过沉淀线的不同来鉴定抗原或者抗体

4、之间是否相同。 3、火箭电泳是将单向扩散与电泳技术相结合的一种方法。实验原理：1、电泳时，含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动，而在电场作用下促使样品孔中的抗原向阳极泳动。2、当抗原与抗体分子达到适当比例时，形成一个状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰。3、峰的高度与检样中的抗原浓度呈正相关。4、当琼脂中抗体浓度固定时，根据样品的沉淀峰长度即可计算出待检抗原的含量。 实验意义：根据检测样品沉淀峰的高度可算出待测抗原的含量用于测定抗血清效价以及分析特异性抗体4、免疫电泳免疫电泳法 是一种将凝胶电泳与双向免疫扩散两种技术相结合的实验方法。在电场作用下，标本中各组分因电泳迁移率不同而分成区带，然后沿电泳平行方

5、向将凝胶挖一沟槽，将抗体加入沟槽内，使抗原与抗体相互扩散而形成沉淀线。 5、对流免疫电泳是一种将双向琼脂扩散和电泳技术结合在一起的方法。实验原理：1、大多数抗原为蛋白质，在碱性环境下带负电，电泳时从负极向正极移动；抗体属球蛋白，所带的负电少，相对分子质量较大，电泳力小，在电场中的电渗作用下，由正极向负极移动。2、 AgAb定向对流，发生反应，短时间内出现肉眼可见的沉淀线。根据沉淀线的数量、位置，分析标本中所含抗原的性质。实验意义：由于电泳的作用，不仅帮助抗体定向移动，因而加速了反应的出现，而且也限制了琼脂扩散时，抗原抗体向四周自由扩散的倾向，因而提高了敏感性，本法比琼脂扩散法的灵敏度要高101

6、6倍，而且反应时间短，可用于各种蛋白的定性和半定量测定。材料与仪器抗原 (Ag): HBsAg抗体 (Ab):抗HBsAg免疫血清 待测血清, 生理盐水 (阴性对照)巴比妥缓冲液(pH8.6),1%离子琼脂其它：电泳仪,载玻片,打孔器,移液器等实验方法 1将融化的1离子琼脂4-5ml倾注于玻片上制成琼脂板 2待琼脂板冷却凝固后，按照打孔模板用打孔器打孔，并用微量加样器加样，各孔中加入各样本10l 3将琼脂板置于电泳槽内，注意加抗原标本的一侧应放负极，并将已浸透缓冲液的滤纸一端覆盖于琼脂板两侧各约0.5cm，另一端浸于电泳液中 4接通电源，电压、电流及电泳时间应视仪器性能而定。一般地，电压6 Vcm，电流每板20mA，泳动时间12h 5电泳完毕，关闭电源，取出琼脂板，观察结果实验结果与分析： 根据沉淀线的位置，参照阳性对照，判断结果。可能出现的情况，各种合理的沉淀线意义。阴性对照不应出现沉淀线，否则实验无效。检测试剂应用免疫层析双抗体夹心法原理，制成HCG检测试纸，可在3分钟内测定尿液标本中的HCG。检测时，当被检尿样虹吸通过胶体金标记