临床免疫学和免疫检验2016讲义

1、免疫原和抗的免疫原和抗的抗原和抗体是免疫反应的基本条件也是免疫检验的两大重要。抗原是特异性抗体的前提条件，抗体可用于纯化抗原和检测抗原，也是医学检验中用于免疫原的免疫佐剂和研究的重要物质。抗抗抗的的鉴定和保存的纯化颗粒性抗原的颗粒性抗原主要是指细胞抗原和细菌抗原,细胞抗原绵羊红细胞。细菌抗原菌体 O 抗原。可溶性抗原的的方法较简单,通过分离或纯培养即到。可溶性抗原：蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、细菌外毒素等。（一）组织可溶性抗原的粗提（二）可溶性抗原的纯化（三）纯化抗原的鉴定（一）组织可溶性抗原的粗提1.组织均浆的：高速组织捣碎机法、研磨法；2.细胞的破碎：反复冻融法、超声破碎法、自溶法

2、、酶处理法、表面活性剂处理法。（二）可溶性抗原的提取和纯化1.超速离心法；选择性沉淀法：核酸去除法、盐析法、凝胶过滤法；离子交换层析法；亲和层析法；电泳法。（三）纯化抗原的鉴定沉淀法、聚合物沉淀法；主要包括蛋白含量测定、分子量测定、纯度鉴定、免疫活性鉴定等。半抗原性免疫原的半抗原只具有抗原性而无免疫原性；如某些多肽、多糖、激素、小分子量的药物等。半抗原与蛋白质载体或高分子聚合物结合后才有免疫原性。（一）载体蛋白质类：牛血白蛋白等；多肽聚合物：多聚赖氨酸等；大分子聚合物和某些颗粒：聚乙烯吡咯烷酮等。（二）半抗原与载体的连接方法物理方法：通过电荷和微孔吸附半抗原，吸附的载体有淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、

3、硫酸葡聚糖、羧甲基素等。化学方法：利用某些功能基团将半抗原连接到载体上。如碳二亚胺法、戊二醛法等。（三）半抗原性免疫原的鉴定与载体结合的半抗原数目与免疫原性密切相关。所以，应测定半抗原与载体的比例，方法有：吸收光谱分析法：放射性核素标记半抗原渗入法。免疫佐剂指先于抗原或与抗原同时注入体内，可增强机体对抗原的免疫应答的物质。佐剂的作用机制改变抗原的物理性状，延缓抗原降解和排除；增强 APC 处理和提呈抗原的能力；刺激淋巴细胞增殖和分化；改变抗体的产生类型；诱导迟发型超敏反应。抗将抗体的的好的免疫原按照一定的程序，免疫动物，使其产生多克隆抗体。然后动物血液，分离含有，即为抗。免疫动物的选择抗原来源

4、与动物种属差异越大，免疫原性越强，免疫效果越好。适龄、健康、体重合适。对于蛋白质抗原大部分动物皆适合，常用的是和家兔。免疫程序1.免疫原的剂量：由免疫原性的强弱、动物的状态和免疫时间确定。2.免疫途径：初次免疫一般选择接种，加强免疫和颗粒性抗原一般选择静脉注射。3.免疫间隔时间：重要般为 710 天。动物采血法颈动脉采血法心脏采血法静脉采血法。第 1 次与第 2 次免疫间隔时间以 1020 天为好，第 3 次及以后的间隔一抗抗的鉴定和保存的鉴定抗体特异性的鉴定抗体效价的测定抗体纯度的鉴定抗体亲和力的鉴定抗的保存28保存：用于短期保存；冷冻保存：一般可保存 5 年；真空干燥保存：用真空冻干机进行

5、干燥，在冰箱中可保存 510 年。抗的纯化纯化方法有盐析法、凝胶过滤法、离子交换层析法、亲和层析法等。【习题】属于颗粒性抗原的是A.脂多糖 B.球蛋白 C.白蛋白 D.DNAE.血小板正确E颗粒性抗原包括血小板。可溶性抗原：蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、细菌外毒素等。颗粒性抗原免疫接种方法一般采用A.淋注射B.静脉注射C.注射D.皮下注射E.肌肉内注射正确B颗粒性抗原免疫接种方法一般采用静脉注射。要从组织和细胞匀浆中粗提某种蛋白抗原，最常用又简便的分离方法盐析法凝胶过滤法离子交换层析法 D.免疫亲和层析法 E.免疫电泳法正确A盐析法是组织和细胞中粗提蛋白抗原最常用且简便的分离方法。纯化特异性抗体时，可采用下列哪种方法除去杂抗体盐析法凝胶过滤法离子交换层析法 D.免疫亲和层析法 E.免疫电泳法正确D免疫亲和层析法能有效的去除杂抗体。蛋白质抗原首次免疫接种后，最好间隔多长时间再进行第二次免疫A.710 天 B.1020 天 C.2030 天 D.3060 天E.3 个月正确B蛋白质抗原首次免疫接种后，最好间隔 1020 天