乳与乳制品病原微生物检验方法溶血性链球菌的检验

1、乳与乳制品病原微生物检验方法溶血性链球菌的检验 YLNB4.51仪器及器材1.1 恒温培养箱：361。1.2 恒温水浴锅：361。1.3 显微镜。1.4 离心机：4000 r/min1.5 均质器或灭菌乳钵。1.6 灭菌平皿：直径90mm。1.7 灭菌试管：10mm100mm 、16mm160mm1.8 灭菌吸管：1mL、5mL 、10mL。1.9 冰箱：041.10 灭菌锥形瓶：100mL。1.11 架盘药物天平：0g500g,精确至0.5g。1.12 灭菌棉签、镊子等。2. 培养基和试剂2.1 葡萄糖肉浸液肉汤：按GB 4789.28中4.1规定，在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖。 2.2 肉

2、浸液肉汤：按GB 4789.28中4.1规定。2.3 匹克氏肉汤：按GB 4789.28中4.62规定。2.4 血琼脂平板：按GB 4789.28中4.6规定。2.5 人血浆。2.6 0.25%氯化钙。2.7 灭菌生理盐水。2.8 杆菌肽药敏纸片(含0.04单位)。3. 检验程序检 样25g(ml)+225ml灭菌生理盐水361血 平 板葡萄糖肉浸液肉汤或匹克氏肉汤24h361 24h血平板（分纯培养）361 24h观 察 溶 血杆菌肽敏感试验革兰氏染色链激酶试验报 告4. 方法4.1 样品处理按无菌操作称取食品检样25g （mL），加入225mL灭菌生理盐水，研成匀浆制成混悬液。4.2 培养

3、将上述混悬液吸取5mL，接种于50mL葡萄糖肉浸液肉汤；或直接划线接种于血平板，如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经361培养24h，接种血平板，置361培养24h，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肽敏感试验。4.3 形态与染色本菌呈球形或卵圆形，直径0.51m，链状排列，链长短不一，短者48个细胞组成，长者2030个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体培养中易呈长链；在固体培养基中常呈短链，不形成芽孢，无鞭毛，不能运动。4.4 培养特性该菌营养要求较高，在普通培养基上生长不良，在加有血液、血清培养基中生长

4、较好。溶血性链球菌在血清肉汤中生长时管底呈絮状或颗粒状沉淀。血平板上菌落为灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直径约0.50.75mm，为圆形突起的细小菌落，乙型溶血链球菌周围有24mm界限分明、无色透明的溶血圈。4.5 链激酶试验致病性乙型溶血性链球菌能产生链激酶(即溶纤维蛋白酶)，此酶能激活正常人体血液中的血浆蛋白酶原，使成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋白。吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水，混匀，再加入1824h361培养的链球菌培养物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL(如氯化钙已潮解，可适当加大至0.3%0.35%)，振荡摇匀，置于361水浴中10min，血浆混合物自行凝固(凝固程度至试管倒置，内容物不流动)。然后观察凝块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不溶解即为阴性。草酸钾人血浆配制：草酸钾0.01g放入灭菌小试管中，再加入5mL人血，混匀，经离心沉淀，吸取上清液即为草酸钾人血浆。4.6 杆菌肤敏感试验挑取乙型溶血性链球菌液，涂布于血平板上