运脾中药复方制剂降低厌食大鼠下丘脑腹内侧区神经元的兴奋性

1、运脾中药复方制剂降低厌食大鼠下丘脑腹内侧区神经元的兴奋性运脾中药复方制剂降低厌食大鼠下丘脑腹内侧区神经元的兴奋性【关键词】运脾复方yunpipresriptinreduesexitabilityfvnneurnsinanrexirats【abstrat】ai:texplretherlefyunpi,atraditinalhinesepresriptin,inreduingthesensitivityfthevnneurnsttheperipheralafferentsignalinanrexiaratsethds:theanrexiratdelasestablishedbyfeedingrat

2、sithspeiallypreparedfragefr1eekflledbydailyintragastriadinistratinfliquidextratfyunpipresriptinfr3eeks.theextraellularrerdingfrratvnasthenndutedtharaterizetherespnsesfstiulatinggastrivagalnerveandintravenusinjetinfsulfatedhlystkinintapeptide(k8)inthentrl,delandyunpitreatedgrups.results:theduratinfth

3、evnneurnalexitatintthegastrivagalnervestiulatinindelgrupassignifiantlylngerthanthatinntrlgrup(p0.05)andthenuberfksensitiveneurnssignifiantlyinreasediththedereasefstiulatinintensityindelgrupparediththatinntrlgrup(p0.05).hever,thereasnsignifiantdiffereneintherespnsesfvnneurnstthestiulatinfgastrivagaln

4、erveandthekadinistratinbeteentheyunpitreatedgrupandthentrlgrup.nlusin:yunpipresriptinanreduethesensitivityfvnneurnstthenegativefeedbaksignalfrtheperipheryandiprvetheappetiteftheanrexiarats.【keyrds】yunpiplexpresriptin;anrexia;ventredialhypthalainuleus;stah;vagusnerve;hleystkinin【摘要】目的：证实运脾中药复方儿宝颗粒降低厌

5、食大鼠下丘脑腹内侧核vn神经元对外周传入信号的敏感性.方法：用特制饲料喂养大鼠1k制备厌食模型，再用运脾复方灌胃治疗3k，然后用细胞外记录法，记录大鼠vn神经元的自发放电，观察其对电刺激胃迷走神经、静脉注射八肽胆囊收缩素k8的反响，比拟对照组、模型组和治疗组3组间的差异.结果：模型组大鼠vn神经元对胃迷走神经刺激的兴奋性反响时程延长p0.05，刺激强度降低p0.05，这些迷走兴奋的vn神经元对静脉注射k的敏感率也增加p0.05；而治疗组大鼠vn对胃迷走神经刺激和静脉注射k的反响与正常组无显著差异.结论：运脾复方儿宝颗粒可以降低vn神经元对外周传入的摄食负反响信号的敏感性，从而到达促进食欲的目的

6、.【关键词】运脾复方；厌食；下丘脑腹内侧核；胃；迷走神经；胆囊收缩素0引言近20年的临床理论证实运脾复方儿宝颗粒治疗婴幼儿厌食有可靠疗效1.其机制研究说明，该复方能在外周程度上调节与摄食控制相关的多种因素2，如促进胃肠道蠕动、增强消化酶的活性、促进小肠吸收功能、调节胃肠道激素程度等，而我们近年来的研究结果说明，儿宝颗粒还能在中枢程度上影响摄食行为的控制3-4.我们通过观察厌食大鼠下丘脑腹内侧核神经元ventredialhypthalainulear,vn对胃迷走神经刺激和静脉注射k的反响，进一步分析了运脾复方对vn神经元兴奋性的影响.1材料和方法1.1材料日龄3540d的sd大鼠45只，体质量

7、6010g第四军医大学实验动物中心提供，随机分为对照组、模型组和治疗组，每组15只.所有动物均单笼饲养，自由进食水.1.2方法说明模型制备成功.从实验第8日开场，治疗组大鼠用运脾复方儿宝颗粒浸膏第四军医大学科研药厂提供，药物组成苍术、陈皮、山楂、白芍，每毫升含生药1.5g灌胃，1次/d，剂量为37.6g/kg(为临床2倍等效量)，同时给予对照组和模型组大鼠等容积生理盐水灌胃，连续3k.1.3胃迷走神经刺激和vn神经元自发放电的记录实验第28日晚禁食，次日用细胞外记录法观察大鼠vn神经元对刺激胃迷走神经和静脉注射k8的反响.手术步骤：经大鼠腹腔注射乌拉坦0.8g/kg和氯醛糖65g/kg混合麻醉

8、剂，麻醉后施行颈外静脉插管术，以备追加麻醉剂、注射k810g/kg，美国siga公司产品和生理盐水.沿左肋弓切开腹腔，别离胃迷走神经前干与后干，挂于钩状双极刺激电极以备刺激.缝合腹腔，用电热板维持动物体温于(37.00.5).然后，将动物固定于脑立体定位仪上，施第4脑室脑脊液引流.根据paxins和astn鼠脑立体定位图谱6，于vna-2.3-2.8,l0.51,h89上方开颅直径约1.5.以负相矩形双脉冲100500a,0.5s,100hz刺激胃迷走神经干，用充以含10g/l滂胺天蓝的0.5l/l醋酸钠溶液的玻璃微电极直流阻抗510细胞外记录vn神经元单位放电.神经元的放电信号经放大器放大后

9、输入窗口甄别器，触发窗口甄别器输出的标准矩形脉冲5v,1.0s，通过模/数转换器输入计算机进展实时数据分析.由计算机采集的神经元放电信号自动生成刺激前后时间直方图，分析细胞对刺激胃迷走神经采样间隔2s，每次采样800点，重复采样100次和静脉注射k采样间隔1s，每次采样900点，采样1次的反响.比拟刺激后反响时间段内刺激后窗口神经元的放电频率与刺激前一样时间段内刺激前窗口神经元的根底放电频率，假如刺激后窗口内的放电频率降低到刺激前窗口内根底放电频率的30%以下，或增加到200%以上，那么认为该细胞对刺激产生了抑制或兴奋反响.1.4组织学定位每次实验完毕时，用阴极电流20a,10in将玻璃微电极

10、内的滂胺天蓝染料微量渗析到电极尖端的记录点，然后取脑固定.1k后用冰冻切片机制备80厚的脑切片，检查记录点位置图1，凡实际记录点偏离vn者，所获数据弃之不用.sd大鼠前囟后2.56横切面，上方箭头指示电极尾部痕迹，下方箭头指示电极记录位置处于vn区域.比拟用2检验，p0.05认为组间差异有统计学意义.2结果2.13组大鼠日摄食量在实验过程中28d，3组大鼠日平均摄食量变化趋势不同p0.05；实验第17日内，模型组与治疗组大鼠日平均摄食量较对照组下降快，说明造模成功.经儿宝颗粒治疗后，治疗组日平均摄食量上升较快，模型组日平均摄食量上升较慢图2.说明运脾复方儿宝颗粒有促进食欲的作用.2.23组大鼠

11、vn神经元对刺激胃迷走神经的反响3组大鼠共记录328个vn神经元，其中对照组106个，模型组110个，治疗组112个.胃迷走神经刺激引起的vn神经元反响类型有兴奋性和抑制性反响两种，即抑制性反响图3a和兴奋性反响图3b，但以兴奋性反响为主.对照组、模型组和治疗组的vn神经元对刺激胃迷走神经的反响性无显著性差异p0.05，表1.3组大鼠抑制性反响的vn神经元反响埋伏期、反响时程和刺激强度亦无显著性差异表2.但是，模型组vn神经元的兴奋性反响时程明显高于对照组p0.05和治疗组(p0.05)，其所需的刺激强度却显著低于对照组(p0.05)和治疗组(p0.05).这就使模型组大鼠vn神经元兴奋性反响

12、的反响时程显著大于其抑制性反响的反响时程p0.05，前者所需刺激强度却显著小于后者p0.05.而在对照组和治疗组，vn神经元的反响埋伏期、反响时程和刺激强度在兴奋性反响和抑制性反响之间无显著性差异.表1vn神经元对刺激胃迷走神经的反响性略表2胃迷走神经刺激引起的大鼠vn神经元的反响特征略2.23组大鼠vn神经元对静脉注射k的反响我们对自发放电比拟稳定的vn神经元包括对胃迷走神经刺激有反响和没有反响的细胞做了k敏感性测试，假如被检测细胞对静脉注射k呈现出特异且显著的兴奋性反响，而对生理盐水不出现反响，那么认为该细胞为k敏感神经元.在对胃迷走神经刺激无反响的vn细胞中,各组间k敏感神经元比例无显著

13、性差异表3.而在对胃迷走神经刺激有反响的vn神经元中，模型组k敏感神经元明显高于对照组(p0.05)和治疗组(p0.05).表33组大鼠vn神经元的k敏感性测试个数(略)我们在7只大鼠上正常组2个，模型组2个，治疗组3个发现切断胃迷走神经显著衰减静脉注射k引起的vn神经元兴奋性反响图2d.2.4组织学经组织学检查，对胃迷走神经刺激有反响的神经元以及对静脉注射k敏感的神经元记录位点散在分布于vn中.3讨论运脾复方儿宝颗粒选用轻清之剂调和脾胃，既不用克削通导之药，也不用呆补滋腻之品，关键在“调和，其促进食欲的作用机制应是协调机体各系统间的功能平衡，而不仅仅是对外周或中枢个别因素的孤立影响.本研究着

14、眼于摄食中枢神经元活动与外周摄食因素间的信息联络，观察了厌食大鼠vn神经元对胃迷走神经刺激和血中k浓度这两个重要的外周抑食因素的反响，从而讨论运脾法促进食欲的整体作用机制.vn是摄食控制环路中的一个重要核团，因其显著的抑食作用被称为饱中枢7.胃肠道迷走神经是外周摄食信息传递入脑的主要通路.胃迷走神经传入纤维可将摄食负反响信号传入vn，vn再通过胃迷走神经传出纤维抑制胃肠运动，终止摄食行为8-9.本研究发现模型组大鼠vn神经元兴奋性反响的反响时程显著大于对照组和治疗组，而所需刺激强度却显著低于后两者.这一结果说明模型组大鼠vn神经元更容易被胃迷走神经传入信号所激活，提示其承受到的摄食负反响信号比

15、另外两组强烈.这可能是模型组大鼠摄食量下降的主要原因，同时也提示运脾治疗有效地减弱了模型大鼠vn神经元对胃迷走神经刺激的兴奋性反响，使神经元产生兴奋性反响的阈值增高，反响时程缩短.k是一种生理性饱因子，在进食过程中由小肠内分泌细胞释放入血，其血浓度在开场进食后20in内达顶峰，产生显著的抑食作用8.本研究显示静脉注射k能激活部分vn神经元，大部分k敏感神经元也对胃迷走神经刺激敏感，而切断胃迷走神经能显著减弱k引起的vn神经元反响.这一结果提示k血浓度升高产生的饱效应大部分是由胃迷走神经介导的.实验结果显示模型组大鼠对胃迷走神经刺激敏感的vn神经元中的k敏感细胞数明显增多，提示厌食大鼠胃迷走神经

16、介导的k饱信号较对照组和治疗组强烈.虽然vn神经元承受胃迷走神经传入信息后主要通过其兴奋性反响发出饱信号，但本研究显示仍有约20%vn神经元对胃迷走神经传入信号表现出抑制性反响，这些抑制性反响的神经元与兴奋性反响神经元的反响埋伏期、反响时程和刺激强度均无显著性差异.我们推测，这一小部分抑制性反响的神经元，可能对兴奋性神经元的活动起拮抗作用，以便vn能发出适度的饱信号，不致于过快和过分强烈地抑制进食.但在模型组，这种平衡严重失调：模型大鼠vn神经元兴奋性反响的时程显著高于抑制性反响的时程，而刺激强度显著低于后者.这一现象同样提示厌食大鼠vn发出的饱信号比正常大鼠强烈，而运脾治疗可能通过降低厌食大

17、鼠vn神经元对胃迷走神经刺激的兴奋性反响，从而协调vn的整体活动，发出适度的饱信号.我们研究结果说明，运脾复方儿宝颗粒通过降低厌食大鼠vn神经元对胃迷走神经传入信息的敏感性，抑制厌食大鼠胃迷走神经传入信息对外周k饱信号的介导，同时也协调了vn兴奋性神经元和抑制性神经元的活动，这种直接针对机体自身调节规律的研究，可能更有利于提醒中医药疗效的整体机制.【参考文献】1汪受传，尤汝娣，郁晓维，等.运脾方药治疗小儿厌食症的临床及实验研究j.中西医结合杂志,1991,11(2):75-78.2万力生,汪受传.小儿厌食的中医药治疗现状与展望j.南京中医药大学学报,2000,16(1):63-64.3杜永平，

18、张月萍，胡三觉.运脾复方对幼龄厌食大鼠lh,vh神经元自发放电的影响j.神经解剖学杂志，2001,17(2):183.4duyp,zhangyp,angs,etal.alteratininhypthalausandperipheryfbraingutpeptidesinanrexiinfantileratdelandtheregulatinbyerbagranulej.rldjgastrenterl,2001,7(2):275-280.5汪受传,张月萍,陶勇,等.特制饲料喂养幼龄大鼠建立小儿厌食症模型j.南京中医药大学学报，1999,15(3):148-150.6paxinsg,astn.theratbraininsteretaxirdinates.sandieg:aadeipress,1988:29-31.7张月萍，王建军.摄食控制的神经体