肿瘤化疗多药耐药研究新进展

1、肿瘤化疗多药耐药研究新进展【摘要】肿瘤化疗失败的主要原因是多药耐药(DR)的产生。肿瘤多药耐药的机制非常广泛，其中以ATP结合盒式构造超家族成员研究较多。文章重点综述目前研究较多的多药耐药机制，并对肿瘤耐药逆转进展作简要介绍。【关键词】肿瘤多药耐药药物疗法esearhPrgressfultidrugResistanetanerhetherapyKeyrds:neplass;hetherapy;ultidrugresistane多药耐药ultidrugresistane，DR指肿瘤对一种抗肿瘤药物出现耐药的同时,对其他许多构造各异、作用机制不同的抗肿瘤药物亦产生穿插耐药现象。易使肿瘤细胞产生多药

2、耐药的药物多为天然的分子量较大的亲脂性药物，如蒽环类、长春花碱类、鬼臼类、紫杉烷类等。近年来多药耐药的研究有很多打破，有一些多药耐药逆转药物已经在临床试验中显示了良好的应用前景。1膜药物排流泵或类似物对药物的主动排出1.1P糖蛋白P糖蛋白(P-glyprtEin,P-gp)是耐药相关机制研究最早最深化的机制之一。它于1976年首先在对秋水仙碱耐药的中国仓鼠卵巢癌细胞上别离出来，是分子量约为170kD的磷酸糖蛋白,故又称为p170。其编码的基因可分为dr1和dr2两种,前者位于染色体7q21.1,可引起DR,后者作用尚不明确,可能与DR无关。P-gp是ATP结合盒式构造超家族成员，含1280个氨

3、基酸,具有ATP依赖性的药物外排泵功能，能将药物泵出细胞膜外而降低胞内药物浓度。它由两个同源性片段组成，每一片段又含有6个跨膜区和1个ATP结合区，ATP结合区是P-gp外排功能所必须的，第1片段的第1个胞外肽链环上有3个糖基化位点，它们与P-gp的外排活性无关1。P-gp在许多具有分泌、排泄功能的正常组织上均有较高的表达。细胞耐药既是正常细胞维持自身稳定的防御机制之一，也是引起肿瘤化疗失败及肿瘤复发的主要原因。P-gp是具有广泛特异性的膜转运体，可以作用于不同构造的药物如长春花碱类、蒽环类抗生素、紫杉烷类、鬼臼乙叉甙、丝裂霉素等2。P-gp的表达与肿瘤的耐药及预后亲密相关，TadaY等3认为

4、，膀胱癌患者DR表达与阿霉素耐药明显相关，且化疗后残留肿瘤的DR表达比未经治疗的肿瘤高5.7倍。而晚期鼻咽癌患者dr1阳性者，那么预示全身化疗后总生存率较低4。在体内，肿瘤细胞耐药性可以以sup67Ga/sup68Ga标记的分子影像作为P-gp转运功能的非侵入性评价5。针对P-gp的耐药机制，可以通过抑制P-gp的表达和功能逆转其引起的耐药。Rittierdt等6采用针对P-gpRNA的反义寡(脱氧)核苷酸成功抑制了P-gp的表达，同时进步了恶性胶质瘤细胞系U-87G细胞内阿霉素的浓度。粉防己碱是一种体内和体外均有效的DR介导的耐药的逆转剂，它可以通过与P-gp结合而进步细胞内长春新碱的聚集，

5、在0.625l/L的低浓度下就可以逆转对长春新碱耐药的KBv200细胞DR达7.6倍，但并不影响对药物敏感的KB细胞株的药物敏感性2。新一代DR逆转剂包括:粉防己碱tetrandrine2、LY335979、GF120918、R101933、1442093及XR95767等，新一代DR逆转剂的突出特点是不改变化疗药物的药代动力学和毒副作用。1.2多药耐药相关蛋白多药耐药相关蛋白(utidrugresistaneprtein,RP)是1992年由leSP等在对阿霉素耐药的人小细胞肺癌细胞系H69AR中发现的另一种转运蛋白，RP编码的RNA约7.88.2kb，位于染色体16p13.1。RP家族有9

6、个成员，研究较多的是RP1,其产物为约190ku的膜结合糖蛋白,是一种有机阴离子运载体,几乎存在于所有组织中，与P-gp的构造和功能类似，也是利用ATP能量将药物转运至细胞外，属于AB超家族成员7。RP1介导的药物外排与谷胱甘肽glutathine，GSH有关,GSH可调节RP1介导的药物转运,RP1可能是通过促进药物与谷胱甘肽的结合物的外排而致多药耐药。AkanI等证明N-乙酰半胱氨酸可以增加人类胚肾细胞(HEK293)及其转染全长RP1的293RP细胞两者对RP介导的长春新碱的耐药性，而DL-Buthinine(S，R)-sulfxiine(BS)可以降低其效应，由于N-乙酰半胱氨酸是一种

7、谷胱甘肽前体，BS可以抑制GSH的合成，说明RP1耐药性的产生依赖于GSH，且BS是一种针对RP1介导的耐药的富有前景的药物8。RP除了有药物外排泵的作用，还可能通过细胞内药物的重新分布产生耐药性，而并不影响细胞内药物总的蓄积量。LahariyakulP等研究说明对足叶乙甙耐药的SiHa/VP16细胞酸性细胞器内药物浓度明显低于其亲SiHa细胞，这种机制可能是由于SiHa细胞内涵体和溶酶体到细胞膜的循环速度较慢，导致了细胞器肿胀和死亡，这说明了P-gp和RP蛋白可以阻止药物从胞液到细胞质内酸性细胞器的转运9。在体外实验中RP基因扩增引起肿瘤细胞高度耐药。TadaY等发现，47例膀胱癌患者RP1

8、和RP3RNA表达与阿霉素耐药明显相关，且残留和复发病人RP1、RP2和RP3表达增高3。而淋巴结扩散的大B细胞淋巴瘤病人免疫组化检测RP1表达阳性组完全缓解率明显低于阴性组10。同样，RP介导的耐药的对策主要是基因逆转和RP抑制剂。第2代多药耐药蛋白抑制剂是新构造类型的化合物，例如S-209、GF-120918和VX-710等7。1.3肺耐药相关蛋白肺抗性蛋白(lungresistaneprtein，LRP)最早是1993年从肺癌细胞中别离得到。它不与细胞膜相关，缺少AB转运蛋白特有的ATP结合位点，无跨膜转运区域，是分子量约110kD胞质穹隆蛋白，控制药物从细胞核向胞浆转运7。它与细胞核、

9、细胞质运输有关，一方面可降低药物的核质分布比例以降低药物的有效浓度，另一方面可通过囊泡转运和胞吐机制将胞质内药物排出细胞外，降低药物的绝对浓度。LRP在原发性和继发性耐药非小细胞肺癌细胞中广泛表达，在临床上常为独立的耐药和预后不良因素。HaradaT等说明LRP阳性表达的鳞状细胞性NSL病人对铂类为主的化疗应答只有33%，而LRP阴性者为100%，两者有显著性差异，并认为经支气管(肺)活组织检查做免疫组化LRP染色可以评价病人的化疗敏感性11。hsaa等用免疫组化的方法在41例淋巴结扩散的大B细胞淋巴瘤病人中发现，RP1、LRP和P-gp的表达阳性组完全缓解率明显低于阴性组，且LRP阳性的病人

10、具有较小的总生存分数10。YehJJ等将首治的SL病人分为化疗耐药组和敏感组，发现两者P-gp和RP1的表达均有显著性差异，但LRP的表达无显著性差异，认为SL病人的化疗效应与P-gp和RP1有关，但与LRP无关12。hiuJF等认为NSL病人以紫杉酚类为根底的化疗应答与P-gp相关，与LRP无关13。这种差异可能与病种选择、化疗药物、检测方法等有关，LRP的功能有待进一步说明。1.4乳腺癌耐药蛋白乳腺癌耐药蛋白(breastanerresistaneprtein，BRP)是一种95kD的磷酸糖蛋白药物转运体，其构造与P-gp和RP不同，BRP只包含一个跨膜构造和一个ATP结合区域，因此BRP

11、相当于半个运载体7，只有形成二聚体或四聚体的时候才有运载活性，低氧会诱导其表达。BRP的作用机制和作用底物和P-gp非常相似，BRP过表达可以增加化疗药的耐药性。持续暴露在10甲磺酸伊马替尼的a2细胞，BRP和DR1的表达呈时间双相性，分别在第3d和第25d达顶峰，并且使细胞内浓度降低50，这可能是由于BRP和DR1的表达上调导致其介导的药物泵出增加14。GuB等证明对紫杉醇抵抗的F-7细胞系与阿霉素的穿插耐药性较小，而对阿霉素抵抗的细胞系对紫杉醇的耐药性明显增大，对阿霉素抵抗的细胞系P-gp和BRP的表达量比对紫杉醇抵抗的细胞系多，因此临床上用药要注意用药的顺序，以期减少耐药程度15。TR包

12、含三个可以抑制AB转运体家族转录的反式作用的锤头状核酶，3个顺式作用DR1/P-gp特异性RNA酶，3个DR1/P-gp-类似物间隔片段组成。另外有3个细胞模型，包括表达DR1/P-gp的EPG85-257RDB胃癌细胞系，表达BRP的EPG85-257RNV胃癌细胞系，表达RP2的卵巢癌A2780RIS细胞系，TR可以特异性抑制AB转运体家族转录，在RNA程度降低DR1/P-gpRNA97%，BRPRNA80%，RP2RNA96%。逆转耐药在EPG85-257RDB中为100%，EPG85-257RNV为94%，A2780RIS为63%。所以,TR技术为我们提供了逆转多种AB转运体介导的耐药

13、的有效的新方法18。BRP抑制剂主要有VX710和GF1209187，其在临床试验中表现了广阔的应用前景。2机体解毒作用增强与机体解毒作用增强相关的有谷胱甘肽-S转移酶(glutathineS-transferase，GST)，金属硫蛋白(etallthinEins，T)，博来霉素水解酶(bleyinhydrlase，BH)，二氢叶酸复原酶(dihydrflateredutase，DHR)和胸苷酸合成酶(thyidylatesynthase，TS)等。GST的研究相对较多，GST在正常细胞主要表达在细胞浆中，分为、和三种，其中GST-是人体内一种相代谢酶,参与体内非特异解毒过程。许多化疗药物如

14、烷化剂、铂类均为氧化性物质，谷胱苷肽可自发性与之结合，也可由谷胱苷肽转移酶(GSHtransferene，GST)催化后再与之结合，使细胞免受药物攻击。GST-与肿瘤耐药和疾病进展亲密相关，在许多人类和动物肿瘤模型中GST-往往高表达，成为肿瘤细胞耐药的标志之一，用BS(buthininesulfxiine，一种人工合成氨基酸)阻止GSH合成也可逆转肿瘤细胞耐药8。且耐药细胞中GST-向核内转运增多，细胞核内GST-聚集与细胞对蒽环类、铂类、喜树碱类等化疗药物耐药相关，而抑制GST-的核转运可进步细胞对药物的敏感性19。但也有不同观点存在，HsuH等在晚期鼻咽癌病人中发现GSTpi的表达与预后

15、及包含顺铂的治疗应答无关4。过表达GSH超家族成员gst1的耐药鼠B细胞淋巴瘤细胞系LY-ar细胞尽管bl-2表达比其亲代高30倍，对其它抗癌药物抗拒，但对As23敏感，因此gst1可以作为细胞对As23敏感性的标志。已有不少实验提示As23可逆转某些耐药特性,在细胞对其他化疗药物抗拒的情况下，As23为我们提供了一条可能的治疗途径20。GST-介导耐药的机制已根本明确，但其表达对化疗药的预测价值，以及与其它耐药途径的关系尚有待于进一步的实验研究来说明。3其他途径除上述耐药途径外，发现肿瘤细胞还可以通过其他途径引起耐药：药物前体活化失败,如:细胞色素P450复原酶(ythreP-450redu

16、tase，P450)和DT-心肌黄酶(DT-diaphrase，DTD)等；靶酶TP活性的改变；DNA修复才能的增强，如:6-甲基鸟苷-DNA转移酶(6-ethylguanine-DNAethyltransferase，GT)，hLH1，p21AF1/IP1等；凋亡通路受阻，如：p53、bl-2等；某些癌基因活化，如:Her-2/neu、-y、ras、-jun、-fs、D2和P210BR-ab等。目前大多数研究局限于某一个耐药机制，而多药耐药是多种机制同时存在的结果。各种耐药机制的内在联络正在越来越受到重视，全面分析肿瘤DR的机制,必将对各种肿瘤临床化疗和DR逆转的深化研究发挥重要的指导作用。

17、相信随着肿瘤耐药机制的研究深化,逆转耐药的药物将不断涌现,肿瘤耐药问题会得到逐步解决。【参考文献】1StuhTR,Gudundssn.Prgressinunderstandingthestruture-ativityrelatinshipsfP-glyprteinJ.AdvDrugDelRev，2002,54(3):315-328.2FuL，LiangYJ，DengL，etal.haraterizatinftetrandrine,aptentinhibitrfP-glyprtein-ediatedultidrugresistaneJ.anerhetherPhal，2022,53(4)：349-

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