药监系统官方培训 王似锦 非无菌药品的控制菌检查与不可接受微生物的评估

1、非无菌药品的控制菌检查与不可接受微生物的评估中国食品药品检定研究院王似锦2019-11非无菌药品的控制菌检查与不可接受微生物的评估01非无菌药品的控制菌检查02无菌药品中不可接受微生物的评估03案例分享一、非无菌药品的控制菌检查药品本身的降对人的威胁解与破坏免疫力低下的病人、儿童与老人药品中污染微生物被微生物利用致 菌与条件病菌被酶降解细菌与真菌毒素理化性质改变反映药品生产的卫生质量，一 程度上能够体现药品在生产的全过程中贯彻、执行药品生产质量管理规范（GMP）的情况一、非无菌药品的控制菌检查营养条件需氧菌总数指示菌：TSA上生长的所有菌指示菌致病菌大肠中国药典对非无菌药品污染微生物的控制微生

2、物限度检查及限度标准营养条件霉菌和酵母菌总数致病菌沙门指示菌：SDA上生长的所有菌指示菌致病菌耐胆盐G-指示菌致病菌控制菌金葡铜绿指示菌致病菌其它具有致病菌梭菌潜在危害的微生物致病菌白念一、非无菌药品的控制菌检查中国药典-非无菌药品-微生物限度标准制定依据非无菌药品人体微生物限度标准给药途径与用药部位不同剂型微生物的天然聚集体作用于人体的不同部位剂型（液体/固体）不同部位有其固有的微生物菌群胃肠道、粘膜、皮肤、腔道部位有其天然的免疫屏障一、非无菌药品的控制菌检查中国药典2015年版1107微生物限度标准一、非无菌药品的控制菌检查是药典各论/国家标准/产品标准中是依照执行，方法按否有微生物限度的

3、具体要求照药典1105,1106否是限度按照制剂通则的要求，方法按照药典1105,1106药典各论/国家标准/产品标准中是药品的微生物限度要求应如何执行？否有微生物限度要求否是 限度按照制剂通则根据剂型 阅药典制剂通则的要求，是否有微生物限度的要求的要求，方法按照药典1105,1106可以不进行微生物限度检验，但应符合1107微生物限度的要求否一、非无菌药品的控制菌检查中国药典2015年版二部各论的微生物限度标准序号 品名1大豆油（供注射用）39参照通 1105,1106，11072去氢胆酸112参照通则1105,1106，1107,同时10g供试品中不得检出沙门菌参照通则110 106,1g

4、供试品中需氧菌总数不得过10000cfu,霉菌和酵母菌总数不得过100cfu，不得检出大肠埃希菌。10g供试品中不得检出沙门菌参照通则1105，1106,110734567甲状腺1992112164 3444甲酚甲硝唑克 霉素磷酸酯外用溶液克林霉素磷酸酯栓参照通则1105，1106,1 07参照通则1105，1106,1107参照通则1105，1106,1107取本品不少于1ml，经薄膜过滤 处理，采用R2A琼脂培养基，30-35培养不少于五天，参照通则1105,1ml供试品中需氧菌总数不得过100cfu89纯化水苯扎氯铵溶液579605参照通则1105，1106,1107参照通则1105，1

5、106,1107。1g供 品中需氧菌总数不得过1000个，霉菌和酵母菌总数不得过100个，不得检出大肠埃希菌，10g供试品中不得检出沙门菌。10明胶6481112垂体后叶粉乳酸依沙吖啶溶液65768照非无菌产品微生物限度检查，参照通则1105 g供试品中需氧菌总数不得过10000cfu照非无菌产品微生物限度检查，参照通则1105，,1106,1107。取本品不少于100ml，经薄膜过滤法处理，采用R2A琼脂培养基，30-35培养不少于5天，参照通则1105,100ml供试品中需氧菌总数不得过10cfu。照非无菌产品微生物限度检查，参照 则1105，,1106,1107。照非无菌产品微生物限度检

6、查，参照通则1105，,1106,1107。参照胃蛋白酶项下方法131415161718注射用水药用炭胶囊胃蛋白酶胃蛋白酶片胃蛋白酶颗粒含糖胃蛋白酶702719739739739740参照胃蛋白酶项下方法参照胃蛋白酶项下方法取 品0.3g，照非无菌产品微生物限度检查，参照通则1105,1g供试品中需氧菌总数不得过300cfu19重组人胰岛素789一、非无菌药品的控制菌检查中国药典2015年版四部通则0101片剂0106鼻用制剂一、非无菌药耐胆盐革兰阴性菌耐胆盐革兰阴性菌是泛指在有胆盐的条件下能够生长的，利用葡 糖但不发酵乳糖的革兰阴性菌，例如肠杆菌科的细菌，产气单胞菌属和假单胞菌属等，除包括原

7、大肠菌群范畴的微生物外还包括诸如沙门菌属、 贺菌属、假单胞菌属、不动杆菌属等非乳糖发酵类型微生物，是对需氧及兼性厌氧，可耐受胆盐的革兰阴性杆菌这一大类微生物的统称。若在耐胆盐革兰阴性菌检查体系中检出，且经革兰染色判断为革兰阴性菌，则为耐胆盐革兰阴性菌。一、非无菌药品的控制菌检查耐胆盐革兰阴性菌培养温度 培养时间CHP 2015 2025 约2h关于约2小时的预培养USP /EP/JP 2025usually 2 hours but not more than 5 hours在上世纪七八十年代，微生物学家在用EE进行食品中肠杆菌检验时发现，如果直接将受伤injured/stressed的菌接种至

8、EE，会导致假阴性结果，即EE 法使受伤的菌恢复生长，通过研究发现，先将受伤的菌在非选择性培养基（如TSB、TSA）中预培养25小时，然后在用EE，即可达到能够生长的目的，因此，EP从上世纪七十年代引入肠杆菌检查时，就使用了25小时的预培养，在之后的药典协调过程中，就形成了现在的耐胆盐革兰阴性菌的检查法。一、非无菌药品的控制菌检查大肠埃希菌 在药品中检出大肠埃希菌，表明该样品受到人和温血动 的粪便污染，即可能污染肠道病原体。 大肠埃希菌除普通大肠埃希菌外尚有致病性大肠埃希菌，可引起婴幼儿、成人爆发性腹泻。为保证人体健 ，口服药品必须检查大肠埃希菌。 大肠埃希菌检查应鉴定到“种”水平。 大肠埃希

9、菌既是病原菌又是指示 ！一、非无菌药品的控制菌检查大肠埃希菌 麦康凯液体培养基能够抑制革兰氏阳性球菌如金黄色葡萄球菌，而能够使革兰氏阴性杆菌如大肠埃希菌生长。培养温度为4244，因为该条件是区分大肠埃希菌和大肠菌群其它种的关 条件，另外有文献报道表明近期受到人和温血动物粪便污染的大肠埃希菌在4244更容易生长。 大肠埃希菌在麦康 琼脂培养基上的典型菌落形态特征：鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润。一、非无菌药品的控制菌检查沙门菌 沙门菌属是肠杆菌科的重要致病菌，根据最新版的伯杰氏系 细菌学手册（第二版），沙门菌属分为2个种 分别是肠炎沙门菌(S.ente

10、rica)和乍得沙门菌(S. bongori)，其中肠炎沙门菌又分为6个亚种，分别是肠炎亚种（Enterica）、萨 拉 姆 亚 种 (Salamae亚 利 桑 那 亚 种(Arizonae)、双亚利桑那亚种(Diariaonae)、豪顿亚种(Houtenae)和印度亚种(Indica)。 在沙门菌的分类学研究和流行病学研究中，按照血清型进行分类更为常见，一般 说，O抗原抗血清的A-E群包含了沙门菌分离株的95，所以可以用沙门菌A-F O多价血清进行沙门菌初筛试验。一、非无菌药品的控制菌检查沙门菌 RV培养基通过氯化镁和孔雀绿的共同作用可一定程度 抑制革兰氏阳性菌、大肠杆菌、痢疾杆菌和伤寒杆菌

11、的生长 。 XLD培养基能够支持肠道致病菌的生长，包括沙门菌、志贺氏菌、大肠埃希菌等。其中，木糖能够支持除了志 氏菌外几乎所有的肠道菌生长；赖氨 用于分别沙门菌与其他非致病菌；随着木糖、乳糖和蔗糖被细菌发酵，会使培养基中的酚红从红色 黄色，从而区分不同的肠道细菌；硫代硫酸钠和枸橼酸铁铵的存在能够指示使硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色。沙门菌CMCC（B）50094 沙门菌在XLD平板上的典型菌落为淡红色或无色、透明或半透明、中心有或无黑色。XLD一、非无菌药品的控制菌检查沙门菌中国药典收载 利用三糖铁琼脂培养基高层斜面进行菌种确认的方法，若XLD平板上有疑似菌 生长，且三糖铁琼脂培养基的斜面为红

12、色、底层为黄色，或斜面黄色、底层黄色或黑色，应进一步进行适宜的鉴定试验，确证是否为沙门菌。如果平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，或三糖铁琼脂培养基的斜面未见红色、底层未见黄色；或斜面黄色、底层未见黄色或黑色，判断供试品未检出沙门菌。在进行该项试验时，为 辅助判断三糖铁琼脂培养基的斜面和底层的颜色反应，建议同时接种沙门菌、大肠埃希菌或其他类似肠杆菌科的标准菌种作为对照菌。TSI血清学一、非无菌药品的控制菌检查沙门菌 根据中国药典2015年版的1107 非无菌药品微生物限度标准，需要进行沙 菌检查的包括以下4部分：1. 含脏器提取物的化学药品、生物制品、不含药材原粉的中药制剂2.

13、 含动植物源成分或矿物的化学药品或生物制品3. 口服含药材原粉的中药制剂4. 研粉口服贵系饮片、直接口服及泡服饮片 建议生产企业以中国药典的要求为基础，通过对产品的工艺评估后，特别是关注原辅料的来源是否存在动物来源、是否存在未经提取的植物来源成分和矿物质等，来判断产品是否应该进行沙门菌检查。一、非无菌药品的控制菌检查铜绿假单胞菌 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，习称绿脓杆 ，为假单胞菌属菌种，广泛分布在土壤，水及空气，人和动物的皮肤、肠道、呼吸道均有存在，故可通过环境和生产的各个环节污染药品。 本菌是常见的化脓性 染菌、在烧伤、烫伤，眼科及其 外科疾患中常引起继发

14、感染，由于本菌对许多抗菌药物具有天然的耐药性，增加了治疗的 度 国内外药典均将铜绿假单胞菌检查列为外用制剂的检查项目之一。 铜绿假单胞菌检查应鉴定到“种”水平。一、非无菌药品的控制菌检查铜绿假单胞菌溴 化 十 六 烷 基 三 甲 铵（cetrimide）为阳离子表面活性剂，有较强的抑菌性，能够抑制革兰氏 性菌、大肠埃希菌、假单胞菌属的其它种，但铜绿假单胞菌 以在该培养基上生长，因此具有较强的选择性。铜绿假单胞菌CMCC（B）10104一、非无菌药品的控制菌检查铜绿假单胞菌 氧化酶试验过程简述：取一小块白色洁净的滤纸置 皿内，以无菌玻璃棒挑取营养琼脂斜面培养物少许，涂在滤纸上，随即滴加1滴新配制

15、的1%二盐酸二甲基对苯二胺试液，在30s ，纸片上的培养物出现粉红色，逐渐变为紫红色，即为氧化酶试验阳性反应。若培养物不变色或仅显粉色为阴性反应。 绿脓菌素试验、硝酸盐还原产气试验、42生长试验明和胶液化试验，相关详细内容可以参考化妆品安全技术规范2015年版。氧化酶试验一、非无菌药品的控制菌检查金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)为葡萄球 属中的一种，广泛分布于自然界，空气、水、土壤等，人和动物皮肤及与外界相通的腔道中，也经常有本菌存在。 本菌可产生多种毒素及酶，这些毒性物质能引起局部及全身化脓性炎症，严重时可发展成为败血 和脓毒血症，是人类化脓性感染

16、中重要的病原菌。 本菌也是人皮肤常见菌之一，有一定的指示作用。一、非无菌药品的控制菌检查金黄色葡萄球菌 典型的金黄色葡萄 菌在甘露醇氯化钠琼脂培养基平板上呈黄色菌落或外周有黄色环的白色菌落，而表皮葡萄球 则能使培养基呈红色。 除了甘露醇氯化钠琼脂培养基以外，还可以将疑似菌落划线至Baird-Parker平板和血琼脂平板，进行进一步的对疑似金黄 葡萄球菌进行鉴别。金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直径为2mm3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。 在血平板上，形成菌落较大，圆 、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色 ，菌落周围可见完全透明溶血圈

17、。Baird-Parker血平板一、非无菌药品的控制菌检查金黄色葡萄球菌确定为金黄色葡关键试验为血浆凝固酶试验，取无菌试管3支，各加入血浆和0.9%无菌氯化钠溶液(11) 0.5ml， 加入琼脂斜面培养物菌悬液（或被检菌的营养肉汤培养液）0.5ml，其余2支作对照管：1支加入金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003培养物菌悬液或营养肉汤培养液0.5ml作为阳 对照；另一支加入营养肉汤或0.9%无菌氯化钠溶液0.5ml作阴性对照。三管同时置37水浴或恒温培养箱，3h后开始检查，以后每隔适当时间观察一次，直至24h。检查时，轻轻将试管倾斜 (动作勿大) ，仔细观察，阴性对照管血浆 动自如，阳性对照管

18、血浆呈凝固状，试验管呈凝固者为阳性反应；不凝固为阴性反应。阳性对照管和阴性对照管任何一管不符合要求时，应另制备血浆，重新试验。也可使 商业化的冻干兔血浆，并按照说明书进行操作，注意同时进行阳性对照和阴性对照。血浆凝固酶试验（冻干兔血浆）一、非无菌药品的控制菌检查梭菌梭菌属（Clos ium）过去称为梭状芽胞杆菌属，菌体15m左右的革兰氏阳性杆菌，能形成芽胞。芽胞多大于菌体的宽度，细菌膨胀呈梭形，故名梭状芽胞杆 。该菌属中主要病原菌有产气荚膜梭菌（C,p fringens）、破伤风梭菌(C.tetani)、肉毒梭菌(C.botulinum)和艰难梭菌(C.difficile)，均能产生强烈的外毒

19、素使人和动物致病。 因此，对于某些用于阴 、创伤、溃疡的药品，必须控制梭菌。该检验项目需要微生物鉴别到“属”水平。一、非无菌药品的控制菌检查梭菌 因此检查时，将1：10的供试液在80加热10分 后迅速冷却，以杀死可能存在的杂菌繁殖体，使梭菌具有优势生长或在哥伦比亚琼脂培养基中加入庆大霉素，抑制杂菌，利于梭菌的分离培养。 为了保证厌氧条件，可使用商业化的密闭容器和厌氧产气袋实现厌氧条件，亦可使用真空干燥器、标本瓶或其他适宜容器替代使用；在厌氧培养的同时，可以使用厌氧指示条以方便观察是 达到厌氧条件。生孢梭菌CMCC（B）64941一、非无菌药品的控制菌检查梭菌阳性对照菌生孢梭菌(Clostrid

20、ium sporogenes)C CC(B)64941的生长 要厌氧培养，菌液的制备及计数方法为：取生孢梭菌接种 12ml硫乙醇酸盐流体培养基中，置3035 培养1 24小时，用0.9%无菌氯化钠溶液制成1ml含10100cfu的菌液。生孢梭菌标准菌液计数可取每ml含1001000cfu的菌液0.1ml 布于哥伦比亚琼脂培养基平板或血琼脂平板置厌氧条件下培养4872小时计数；也可以取每ml含10100cfu的菌液1ml接种于50200ml硫乙醇酸盐流体培养基中，摇匀，置3035 培养1620小时计数其中的灯笼状菌团（观察点计之前切 动培养基），一般情况下该灯笼状菌团数与平板计数菌落数相当。生孢

21、梭菌菌种的保存可取其硫乙醇酸盐流体培养物混匀、冻存管分装、超低温保存（如-80 ），用时取出自然解冻、经硫乙醇酸盐流体培养基复苏、复壮，制备新 培养物使用。生孢梭菌的计数（FTM）一、非无菌药品的控制菌检查白色念珠菌 白色念珠菌（Candida albicans）又名白假丝酵母菌 Saccharomyces albicaus）属假丝酵母菌属（Saccharom yces）。白色念珠菌是条件致病菌，是医学全身性真菌感染病的重要组成之 ，一旦感染，常可引起心内膜炎、肺炎、尿布疹、鹅口疮、阴道炎、脑膜炎及败血症等。 白色念珠菌广泛分布于土壤、水和空气中，目前国内外的药品、食品标 已把白色念珠菌作为微

22、生物检验中 母菌的代表菌，因此有些药品依据给药途径和剂型将白色念珠菌作为控制菌是非常必要的。白 念珠菌检查应鉴定到“种”水平。一、非无菌药品的控制菌检查白色念珠菌 白色念珠菌在沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上生长的菌落呈乳白色，偶见淡黄色，表面光滑有弄酵母气味，培养时间稍久则菌落增大，颜色变深、质地变硬或有褶皱。可用念珠菌显色培养基对疑似菌落进行进一步分辨。 如果平板上生长的菌落与上述菌落形态特征相符或疑似，并且念珠显色培养基呈阳性反应，应进一步进行适宜 鉴定试验，确证是否为白色念珠菌。白色念珠菌CMCC（F）98001一、非无菌药品的控制菌检查检出菌的鉴别与鉴定 与中国药典2005年版和2010年

23、版相比， 15年版的控制菌检查法对检出菌的鉴别方法及结 判断的规定更为开放和灵活，只是提供了关键的、初步的鉴别方法，凡是怀疑为阳性结果的均要求“应进一步进行适宜的鉴定试验”。 一般来说，微生物的鉴定包括表型鉴定方法和基因型鉴定方法，选用何种方法应根据需要达到的水 视情况而定。控制菌检查中需要进一步进行的适宜的鉴定试验，包括国内外各种 括药品、食品和化妆品在内的标准和规范如GB、FDA、AOAC、ISO、EN等相关标准，也可以使用国内外被大家认可的相应的鉴定技术，包括手动、半自动化的鉴定试剂条、自动化的鉴定系统等。在选用相应试剂条或鉴定系统时，应对供应商进行充分的评 ，其中关键的因素包括方法的可

24、靠性、重复性和准确性，该方法能够鉴定的菌种数据库等。无论是表型还是基因型的微生物鉴定方法，均有局限性，因此为了得到准确的鉴定结果，建议根据中国药典2015年版四部9204微生物鉴定指导原则，采用多种鉴定方 相互确认。二、非无菌药品中不可接受微生物的评估 中国GMP第一章 总 则 第三条： 本规范作为质量管理体系的一部分，是药品生产管理和质量控制的基本要求，旨在最大限度地降低药品生产过程中污染、交叉污染以及混淆、差错等风险，确保持续稳定地生产出符合预定用途和注册要求的药品。 中国药典201 年版四部通则： 控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生物。供试品检出控制菌或

25、其他致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。 中国药典2015年版四 通则： “本限度标准所列的控制菌对于控制某些药品的微生物质量可能并不全面，因此，对于原料、辅料及某些特定的制剂，根据原辅料及其制剂的特性和用途、制剂的生产工艺等因素，可能还需检查其他具有潜在危 的微生物。”其他具有潜在危害的微生物是什么？如何检验与评估？二、非无菌药品中不可接受微生物的评估什么是不可接受微生物？What are Objectionable Microorganisms？1）可在药品中 殖，并对其化学、物理性质产生不利影响，并破坏该药品的功能及疗效的微生物。2）在药品中存在的数量以及致病性会导致特定给药途径下使

26、用该药品治疗的患者发生感染的微生物。二、非无菌药品中不可接受微生物的评估USP以及美国cGMP对非无菌药品的微生物检验和控制的历史 USP had a test for the “Bacteriolog cal Examination of Gelatin” as earlyas 1942 In the l e 1960s several outbreaks of disease were traced back topath gen contaminated medications, and this prompted increasedattention to the microbial

27、content of non-s rile drugs However, most on-sterile medications in the US were not required toassay for micro iological quality attributes until the introduction of theMicrobial Li its Tests in 1970. Later in the 1980s there was a series of articles ap earing in theliterature describing c amination

28、 by P.cepacia (currently Burkholderia cepacia) This lead to the add tion of requirements in the 21 CFR to ensure thatthere are not objectionable organisms in product released to market二、非无菌药品中不可接受微生物的评估美国cGMP对不可接受微生物的要求 21 CFR 211.84(d)(6) “Each lot of a component, drug product container, orclosure

29、with potential for microbiologic l contamination that is objectionablein view of i ntended use shall be subjected to microbiological tests beforeuse.” 任何一批有潜在污染的原辅料和包材容器，其污染的微生物 可能通过预期用途而视为不可接受的，因此，在使用之前，均 进行微生物检验。 21 CFR 211.113(a) “ ppropriate written procedures, designed toprevent objectio able m

30、icroorganisms in drug products not required to besterile, shall be established and followed.” 对于非无菌产品，需要建立并执行 的书面程序以防止不可接受微生物的污染。 21 CFR 211.165(b) “Ther shall be appropriate laboratory testing, asnecessary, of each batch of drug product required to be free of objectionablemicroorganisms.” 在必要的情况下，对

31、于每一批次不应存在不可 受微生物的药品，应建立适当的实验室测试方法。二、非无菌药品中不可接受微生物的评估美国FDA的警告信Warning Letter Dated March 20, 2019: “Your firm f iled toconduct appropriate laborato y testing, as necessary, of each batchdrug product require be free of objectionable microorganisms(21 CFR 211.165(b) You released multipl batches of thes

32、e drugproducts withou conducting tests to ensure they were free fromobjectionable microorganisms. It is essen al that your drug productsare produced in a manner that is su ble for their intended uses and 没有针对不可接受微生物制定适当的检验方法（21 CFR 211.165（b）没有进行不可接受微生物的检验并且放行了多批产品。that each batch is tested for conf

33、once to appropriate icrobial 虽然企业提供了按照USP进行的微生物计数检验资料，但是企业无法证明之前的已经放行的产品其微生物指标的情况。quality specifications. In your esponse, you provided examples ofrecently tested batches utilizing the USP method for microbialenumeration testing. Your response is inadequa e because you didnot provide your verificati

34、on studies includita to show thesuitability of the compendial method being used. Your response alsofailed to provide data to show that all pre ously released products,that remain on the U.S. market, were tested and found to meet yournewly implemented USP microbial release specificatio二、非无菌药品中不可接受微生物

35、的评估企业未建立适当的质量控制措施，负责授Warning Letter Dated March 20, 2019: “Your firm failed to establish an adequate quality control unit with the responsibility and authority to approve orreject all components, drug product cont ners, closures, in-pro ess materials,packaging materials, labeling, and dru products (

36、21 CFR 211.22(a ). Over权批准或拒绝所有成分、容器、密封件、中间控制产品、包装材料、标签以及产品。（21 CFR 211.22（a）multiple years, your firm obtain d recurring test results for water usedcomponent of your drugs as well as results for finished redacted drugproducts, outside of mi logical limits. This t sting revealed extremelya 企业对作为产品原料

37、的水以及终产品进行微生物检测，得到多次超标的结果，并检测到了条件致病菌。high levels of microbiolog al contamination, including results that were TooNumerous to Cou (TNTC), and identified the presence of significantopportunistic pathogens in your drugs. Furth rmore, your tests of retainedsamples and customer complaint bottle ound objec

38、tionable microbiological 在留样和投诉的样品检测到了不可接受微生物。企业没有采取有效措施防止被污染的产品流入市场。contamination in already distributedSignificantly, you fa ed to takeactions to prevent consumer exposure to marketed drug product lots known byyour firm to contain microbiologi l contamination. In addition to these totalcount failu

39、res, you identified objectionable microo ganisms (suchas Burkholderia multivorans) in multiple drug roducts but lacked 除了需氧菌总数超标，在多批次产品中检测到了多噬伯克霍尔德菌。investigations. You did not take effective actions to inate root causes, andcorrect flaws, in your manufacturing operation and quality managementsystem

40、s to prevent recurrence of these serious q ality failures. Ultimately, youdid not ensure timely and effective corrective and preventative actions to未进行有效的调查，未能够找到根本原因，没有采取纠正和预防措施，采取有效的措施。在FDA发现严重的问题之前，未进行主动召回。prevent exposure of consumers to contaminated product. While youto obtain microbiological t

41、est results outside of acceptable limits ontinuedurringbasis, you did not initiate recalls until the FDA identified these se ous issues inour inspection and relayed safety concerns to you.”4二、非无菌药品中不可接受微生物的评估美国药典USP 针对每一个产品都列出其不可接受微生物是不现实的。什么样的微生物能够被确定 不可接受的，取决于产品特性、给药途径和用药人群等。药品企业有责任确 分离微生物是否为不可接受。

42、一般认为，不可接受微生物是通过用药途径使人致病的微生物。二、非无菌药品中不可接受微生物的评估非无菌药品潜在的微生物污染风险中国药典的微生物限度标准高风险给药途径吸 剂需氧菌总数/霉菌和酵母菌总数 控制菌102/101102/101102/101102/101102/10大肠、金葡、铜绿、G-鼻用制剂大肠、金葡、铜绿金葡、铜绿耳用制剂阴道用药金葡、铜绿、白念、梭菌金葡、铜绿外用制剂直肠用药10 /102102/101102/101103/102金葡、铜绿口服液体大肠、（沙门）大肠、（沙门）大肠、（沙门）低风险液体胶囊口服片剂和固体胶囊美国药典，中国药典四部1107二、非无菌药品中不可接受微生物的

43、评估非无菌药品的微生物检验方法的ICH协调方法61 Microbiological examination of nonsterile products:USP 61EP 2.6.12JP 4.05Microbial enumeration tests非无菌药品微生物限度检查：微生物计数ICH协调的微生物检验方法及限度标准62 Microbiological examination of nonsterile products:tests fo specified microorganisms非无菌药品微生物限度检查：特定微生物的检验USP 62EP 2.6.13P 4.051111 Micr

44、obiological examination of nonsterile products:Acceptance criteria for pharm ceutical preparation and substances forpharmceutical useUSP 1111EP 5.1.4JP 4.05非无菌药品微生物限度检查：药品及原辅料的可接受标准二、非无菌药品中不可接受微生物的评估美国药典2000年之前的微生物限度检查方法-USP23,1995Total aerobic microbial count需氧菌总数Total comb ned molds and yeasts cou

45、nt61 Microbial limit tests霉菌和 母菌总数微生物限度检Test for S. aureus and P. aeruginosa; Test forSalmonella sp. and E. li控制菌检查：金葡和铜绿；沙门和大肠USP23,1995二、非无菌药品中不可接受微生物的评估1999年美国药典论坛USP Pharm Forum25（2）USP PF 25 77617791（1999）Total aerobic microbial count需氧菌总数Total combined molds and yeastscount61 M crobial enumera

46、tion te ts霉菌和酵母菌总数Coliform count微生物计数大肠菌群计数61 Microbial limit testsEnterobacterial count微生物限度检查肠杆菌计数62 Micr ological procedur s forabsence of objectionablemicroorganismsTest for S. aureus, P. aeruginosa,Salmonella sp., E. coli, C. albicans,Clostridium, Burkholderia cepacia控制菌检查：金葡、铜绿、沙门、大肠、白念、生孢、洋葱伯

47、克霍尔德菌不可接受 生物二、非无菌药品中不可接受微生物的评估USP PF 25 77617791（1999）USP PF 25 77617791（1999）二、非无菌药品中不可接受微生物的评估USP PF 25 77617791（1999） 不得检出不可接受微生物 在各论中规定了有一种或多种不可接受微生物不得检出。 但是，药典中各论的规定并不能保证原料或辅料的微生物指标能够可接受。 生产商有责任了解物品的生物负载，包括不可接受微生物的种类。 对于非无菌药品，除非各论中有相应规定，不可接受微生物的判别可参考图1的决策树。但应注意的是有害的以及不可接受微生物不仅限于图1所示。二、非无菌药品中不可接

48、受微生物的评估USP PF 25 77617791（1999） 吸入剂：高风险品种，不得含有任何不可接受微生物。 粉剂和局部用软膏剂：不得检出梭菌属。 鼻用液体制剂以及阴道用制剂：局部损伤、感染和炎症皮肤以及粘膜使用时，应引起注意。 液体口服制剂：常用于儿童、老年以及身体虚弱等不能适应固体剂型的人群，因此应关注假单胞、克雷伯、伯克霍尔德以及肠杆菌科的菌，还包括一些酵母菌如白色念珠菌或霉菌。 固体制剂：该剂型微生物的污染风险较低，但是应关注低免疫力人群，如溃疡患者以及囊性纤维患者。二、非无菌药品中不可接受微生物的评估药品质量控制微生物实验室检查指南1993GUIDE TO INSPECTIONS

49、 OF MICROBIOLOGICAL PHARMACEUTICAL QUALITY CONTROL LABORATORIES For a variereasons, we have seen a number of problems associated with the microbiological contamination oftopical drug p oducts, nasal solutions and inhalation produ ts. The USP Microbiological Attributes Chapter provide little specific

50、 guidance other than The significance of microorganisms in non-sterile pharmaceuticalproducts should be evaluated in terms of the use of the product, the n ure of the product, and the potential hazard tothe user.“ 由于种种原因，局部药品、滴鼻剂和吸入剂存在许多微生物污染方面的问题。美国药典“微生 指标”章节指出:“应该从药品用法、性质及对患者的潜在危害等方面评价微生物在非无菌药品中的

51、重要性”，但是没有提供具体的指导。二、非无菌药品中不可接受微生物的评估药品质量控制微生物实验室检查指南1993GUIDE TO INSPECTIONS OF MICROBIOLOGICAL PHARMACEUTICAL QUALITY CONTROL LABORATORIES As a generae for acceptable levels and types of microbiological contamination in products, Dr. Dunnigan of theBureau of M dicine of the FDA commented on the he l

52、th hazard. In 1970, he said that topical preparationscontam ated with gram negative organisms are a probable moderate to serious health hazard. Through the literatureand through our investigations, it has been shown that a variety of in ctions have been traced to the gram negativecontamination of to

53、picalducts. The classical example being the Pseudomonas cepacia contaminat on of PovidoneIodine products reported b a hospital in Massachus tts several years ago. 作为非无菌药 对微生物污染的可接受程度及类型的般性指导，美国食品和药品监督管理局药品分局的邓尼根博士曾强调其对健康的危害性。 970年他提出被革兰氏阴性细菌污染的局部制剂可能 起中度至重度的健康危害。文献和调查表明，许多感染都源于局部用药的革兰氏阴性细菌污染。几年前马萨诸塞

54、州的家医院就报道过宗聚维酮碘(Povidone Iodine)的洋葱假单孢菌(Pseudomonas cepacia)污染的典型病例。二、非无菌药品中不可接受微生物的评估药品质量控制微生物实验室检查指南1993GUIDE TO INSPECTIONS OF MICROBIOLOGICAL PHARMACEUTICAL QUALITY CONTROL LABORATORIES Therefore,ompany is expected to develop microbial specifications for their non-st rile products. Likewise, theU

55、SP Microbi l Limits Chapter provides metho ology for selected indica or organisms, but not allobjecti able organisms. For example, it is widely recognized that Pseudomonas cepacia is objectionable if found ina topical product or nasal solution in high numbers; yet, there aretest methods provided in

56、the USP that willenable the identification e presence of this microorganism. 因此，每家公司都应该为自己的非无菌药品制订出一套关于微生物的质量标准。美国药典中“微生物限度”章节(USP Chapter 61)提供了检验几种指示微生物的方法， 并末涵盖所有有害微生物。例如医药界普遍认为，洋葱假单孢菌在局部药品或滴鼻剂中若大量存在则是有害的，但美国药典并没有提供鉴定该微生物是否存在的检验方法。二、非无菌药品中不可接受微生物的评估药品质量控制微生物实验室检查指南1993GUIDE TO INSPECTIONS OF MICR

57、OBIOLOGICAL PHARMACEUTICAL QUALITY CONTROL LABORATORIES A relevantple of this problem is the recall of Metaproterenol Sulfate Inhalation Solution. The USP XXIImonograph re uires no microbial testing for this product. he agency classified this as a Class I recall because theproduc was contaminated wi

58、th Pseudomonas gladioli/cepacia. The health hazard evaluation commented that the riskof pulmonary infection is especially serious and potentially life-th atening to patients with chronic obstructiveairway disease, cystic fiis, and immuno-compromised patients. Additionally, these organisms would not

59、havebeen identified by testing ocedures delineated n t e general Microbial Limits section of the Compendia. 间羟异丙肾上腺素硫酸盐吸入剂的召回就是这方面的个例子。美国药典第X版各论部分没有要求对该药品进行微生物检验。当局将其列为一级召回，因为此药受到了洋葱假单孢菌的污染。健康危害评估表明，这种微生物对肺部感染的风险很大，特别是对某些患有慢性气管阻塞、囊性纤维变性和免疫缺陷等疾病的患者具有潜在的生命危险。此外，药典的微生物限度部分所描述的检验程度不能鉴别这些微生物。二、非无菌药品中不可接受

60、微生物的评估评估二、非无菌药品中不可接受微生物的评估二、非无菌药品中不可接受微生物的评估FDA的观点和考虑Absence ofobjectionablemicroorganisms不可接受微生物USP 的控制措施Absence of pecifiedmicroorganisms控制菌检查二、非无菌药品中不可接受微生物的评估微生物限度检查出现微生物生长YES是否在OOE或OOS范围内？NO鉴定及风险评估鉴定及OOE/OOS调查，以确认污染原因。若排除实验室操作或取样错误，产品不放行未通过风险评估不可接受微生物通过风险评估产品放行OOE= out of Exation; OOS= out of S