pUDKH基因治疗犬下肢缺血后对血管、肌肉组织的影响

1、UDKH基因治疗犬下肢缺血后对血管、肌肉构造的影响哈小琴，赵治华，吕同德，李元敏，任建平，吴祖泽【关键词】pUDKH基因；血管；肌肉；构造病理【Keyrds】pUDKH；artery；usle；histpathlgy【摘要】目的:不雅察pUDKH(携带肝细胞生长因子基因的质粒)基因治疗犬下肢缺血后对其血管和肌肉构造病理学的影响.要领:杂种犬在静脉内注射苯巴比妥钠麻醉下，于左后侧腹股沟在股动脉由髂外动脉分支处的起始端举行全结扎，造成肢体缺血模子.模子犬被随机分为比拟组和pUDKH处置惩罚组，并在结扎后马上别离注射pUDK空缺质粒或pUDKH.于手术后3，行左髂外动脉造影术，测定股动脉血流量和下肢

2、远端局部温度，并从被结扎的后肢股动脉及表里侧肌肉取构造标本，经通例构造病理切片染色，光学显微镜下不雅察.效果:3时血管造影pUDKH组可见显着血管网的形成，而转移空质粒的比拟组仅见少量新生血管；此时转移pUDKH组犬股动脉血流量已规复到结扎前的程度，而比拟组股动脉血流量仅为结扎前的1/51/3；转移pUDKH组结扎侧肌肉温度与健侧比拟无显着差异，而比拟组两肢体肌肉温度却相差12.构造学不雅察比拟犬可见结扎点远端股动脉塌陷，肌束间动脉管壁变厚，管腔变小乃至消散，少见新生的小血管；pUDKH处置惩罚组犬结扎点远端股动脉管腔开放，肌束间小动脉壁均普及未见增厚，管腔亦未缩小；比拟犬结扎侧肌纤维变性、断

3、裂、肌束内水肿、脂肪性变，pUDKH处置惩罚组结扎侧的肌肉构造中上述病变不显着.结论：pUDKH的局部注射对犬下肢缺血后血管和肌肉具有庇护作用.【关键词】pUDKH基因；血管；肌肉；构造病理0弁言下肢缺血重要是血栓闭塞性脉管炎或糖尿病性下肢中小血管病变、四周精神病变等所造成的下肢慢性缺血，涉及血管、神经、肌肉等构造的病变，当病变希望而淘汰了动脉的横截面积至80%或更多时，患者表示间歇性跛行、成效停滞,乃至肢体坏死坏疽.如今对此尚无抱负的药物治疗要领，终极需行截肢手术而致残，预后较差1-4.比年来基因治疗为其开发了一条新的途径，通过符合的载体介导，转移促血管生长因子的基因于缺血构造，可促进新血管

4、在局部的产生，形成血管“网和血管“桥，创立“分子搭桥机制.人肝细胞生长因子hepatytegrthfatr,HGF是一多成效生长因子，除促进血管新生外4，对器官/构造的损伤有必然的修复作用5，包罗肌肉、神经等.本文使用犬后肢结扎股动脉造成血管闭塞性疾病的动物模子，接纳股动脉四周骨骼肌肉内多点注射携带HGF基因的裸质粒pUDKH要领，探究其治疗犬肢体缺血时对其血管和肌肉构造病理学的影响，为局部pUDKH基因治疗的现实应用提供实行根据.1质料和要领1.1质料动物：河北地域草狗18只，雄性，年事为1.53岁，体质量1215kg，由军事医学科学院动物实行中央提供.pUDKH:携带人肝细胞生长因子基因的

5、重组裸质粒,pUDK:未携带人肝细胞生长因子基因的空质粒,军事医学科学院放射医学研究所三室提供.1.2要领2效果2.1血管(pUDK)的比拟组,90d的新生血管数明显少于转移pUDKH基因组，股动脉结扎点以下的动脉全部消散(图1B).转移pUDKH0.15，0.30，0.60g/kg三个剂量组之间差异不显着，0.60g/kg组比其他2个给药组更轻易使髂外动脉结扎点到股动脉接点收缩.转染pUDKH的三个剂量组在/1002骨骼肌内、外侧和皮肤中血管数显着比模子比拟组多，差异非常显着.与未手术的右下肢骨骼肌内、外侧和皮肤比力，无显着的差异.转pUDKH基因大、中、小剂量组犬骨骼肌构造之间的血管数与康

6、健肢骨骼肌构造血管数相差不显着(表1).表1左下肢内、外侧骨骼肌和皮肤血管数的变革(略)转染pUDKH后90d犬左侧下肢肌肉温度与健侧肌肉温度无显着差异，而模子比拟组摆布后肢肌肉温度相差12(表3).表3转染pUDKH后左侧肢体温度的变革(略)2.2肌肉形态比拟犬不雅察到结扎侧肌纤维变性、横纹不清楚；肌纤维及细胞核变细、断裂、染色淡，肌束内水肿，以及出现脂肪图4A.pUDKH处置惩罚犬经各剂量处置惩罚的结扎侧的肌肉构造中上述病变均已不很显着图4B.3讨论在实行中，经活体股动脉血管造影已清楚地不雅察到,pUDKH处置惩罚组犬使结扎侧肢体比用不携带HGFA：比拟组，转移空质粒pUDK后第90日,示

7、肌束内及肌束间中小动脉管壁变厚，管腔变小,乃至几尽消散;B：pUDKH组，转移pUDKH0.30g/kg后第90日，示肌束间中小动脉管壁未见增厚，管壁无缩小，管腔内布满奇怪的红细胞.本文不雅察的效果资料未列出还表白，因股动脉被结扎而使血运严峻受到滋扰的患肢中从股神经直到肌束间的微小神经都产生了明显的退行变，累及轴突、髓鞘和施旺氏细胞核，而经pUDKH处置惩罚犬的各级神经均已得到了显着的规复，有的乃至已经到达了正常犬的图像.这些外周神经的规复，预计得利于HGF的双重作用：缺血造成的神经纤维损伤，由于HGF促进了供血体系的重修而得以修复；据文献报道HGF自己也有促进神经规复的作用6.这两种因素在本

8、实行模子中究系各起到多大比重，如今尚无法加以预计.本实行只是一个探究性的事情，因此没有在结扎并用空缺的或携带HGF基因的裸露质粒处置惩罚后的差异时间段，举行体系性的动态取样不雅察.推测在血管新生和形成血管网的早期节段，可以或许在剂量效应干系方面，或全或半结扎模子的疗效差异方面作出必然的评价.如有大概以后可以做这方面的探究，还要做一些特别染色比方肌肉和髓鞘等特别染色要领的不雅察.除此之外，如有条件，还可做一些生理学指标的不雅察，比方在供血体系重修历程中对肌力和神经传导速率的动态不雅丈量等.【参考文献】1elillG,SerinF,irielli,etal.Genetherapyinperiphe

9、ralarterydiseaseJ.urrDrugTargetsardivasHaeatlDisrd,2022,4(3):295-300.2KiHJ,JangSY,ParkJI,etal.VasularendtherialgrthfatrinduedangigenigenetherapyinpatientsithperipheralarterydiseaseJ.Expled,2022,36(4):336-344.3IsnerJ,alshK,SyesJ,etal.linialprtl:Arterialgenetransferfrtherapeutiangigenesisinpatientsith

10、peripheralarterydiseaseJ.HuGeneTher,1996,7:959-988.4HaXQ,RenJP,BiJJ,etal.TherapeutiangigenesisinduedbyhuanhepatytegrthfatrgeneindghindlibisheiadelsJ.hinSiBulletin,2022,48(7):676-680.5illerKJ,ThalrD,attesnS,etal.HepatytegrthfatraffetssatelliteellativatinanddifferentiatininregeneratingskeletalusleJ.AJellPhysil,2000，278(1):174-181.6KatN,NetK,NakanishiK,etal.NnviralHVJ(heagglutinati