同济医院检验科ISO15189体系文件13.自溶试验

1、第 PAGE 3 页 共 NUMPAGES 3 页第 PAGE 3 页 共 NUMPAGES 3 页同济大学附属同济医院检验科血液组项目操作指导书TJYYJYKMY/XMZ113第2版标题: 自溶试验第1章 第13节第 PAGE 3 页 共 NUMPAGES 3 页 目的：保证自溶试验结果的准确、可靠。 适用范围：自溶试验检测 项目名称：自溶试验 检测方法：红细胞自身溶血法 原理：本试验是测定患者血液在37度孵育48h后，自发产生的溶血程度。遗传性非球形细胞溶血性贫血患者由于细胞内酶缺陷，糖酵解发生障碍能量供应不足，不能维持红细胞内钠的平衡，使患者红细胞在自身血清中经温育后逐渐发生溶血。若属I

2、型（包括磷酸戊糖旁路中多种酶缺陷），其自身溶血能被葡萄糖和ATP纠正；若属II型缺乏丙酮酸激酶或ATP则自身溶血不能被葡萄糖纠正，只能被ATP纠正。因此，本试验有助于遗传性球形细胞溶血性贫血的鉴别诊断。6. 试剂：6.1 品牌：葡萄糖 上海试剂二厂等渗盐水 上海同济医院ATP 上海试剂三厂Tris 上海试剂三厂6.2 货号：葡萄糖 13-2010279156II等渗盐水 B91ATP 13-2010268135IITris 13-2010354265II6.3 包装规格：葡萄糖 500g/瓶等渗盐水 500mL/瓶ATP 50g/瓶Tris 500mL/瓶6.4 内含物：自配100g/L葡萄糖

3、（无菌）；HiCN稀释液；0.4mol/L ATP生理盐水无菌液：称取ATP2.5g溶于10ml无菌生理盐水中用30g/L Tris溶液或0.1mol/L NaOH溶液调节至pH6.8，加热消毒后备用。7 仪器：37水浴箱8 操作步骤：8.1 取静脉血4ML放入肝素抗凝管内混合抗凝，然后按下表操作：自身溶血试验操作表管号123 3 全溶血对照肝素抗凝血（ml）1.01.0 1.0100g/L葡萄糖（ml）0.050.4mol/L ATP(ml)0.059g/L NaCl(ml)0.0537孵育48h后作压积测定 4冷藏孵育后血浆（ml）0.20.20.20.1(全血)HiCN稀释液（ml）4.

4、84.84.89.98.2 4号管全血抽取后即放冰箱内保存，用来制备“全溶血对照管。8.3 以冷藏血离心后的血浆0.2ML加HiCN稀释液4.8ML为空白对照管。波长540nm处，用空白对照管调零,读取上述各管吸光度值。8.4 计算各测定管的溶血率：测定管的溶血率（%）=测定管A值*（1-红细胞比积）/全溶血对照管A*4 X100%9 线性范围：无10 参考范围：正常人血液孵育48h后，溶血率很低，一般4.0%，加葡萄糖或ATP后溶血率更低0.6%。11 临床意义：遗传性球形细胞增多症自身溶血加快，能被葡萄糖纠正。遗传性非球形细胞溶血性贫血自身溶血增加，其中I型由于6磷酸葡萄糖脱氢酶活性减低，能被葡萄糖和ATP纠正；II型因缺乏丙酮酸激酶，溶血不被葡萄糖纠正，但能被ATP纠正。PNH、自身免疫性溶血性贫血和药物性溶血不能被葡萄糖纠正。12 病人准备标本要求：肝素抗凝血4mL，避免溶血。13 注意事项：13.1 严格按照无菌操作。13.2