如何解决液相的“堵”和“漏”

1、Word文档 【实验干货】如何解决液相的“堵”和“漏”？ 液相色谱对于许多人来说都是很好上手的仪器了，是属于“易学难用”的仪器，有些阅历丰富，用了好几年的分析员们也会习惯于一些错误操作，引发出一些仪器的故障。液相色谱最常见的故障就是“堵”和“漏”，那么接下来远慕就以这两点来分别说明。 堵 “堵”的表现现象就是柱压特别上升，直接缘由就是流路不畅。堵塞的主要位置就是在色谱柱的前端，最主要缘由就是流淌相里有杂质，杂质的主要来源就是细菌。“堵”的缘由1、配制流淌相时细菌污染首先，我们要熟悉到，一般的国产甲醇其实不需要额外过滤处理，直接使用没有问题。即使是有些固态微粒杂质，也能在液相流路系统最前端的过滤

2、头上排解，真正简单引起问题的，是水中的细菌。新制备的纯水在室内放置几天就会长菌，而这些细菌虽然肉眼不行见，却足以堵塞柱填料颗粒的空隙，造成柱子很快报废。这就是在配制流淌相时造成的细菌污染的缘由，解决它的方法很简洁，就是确保水的牢靠性。这里有两种方式推举：（1）最/抱负的方式当然是购买试验室专用纯水机，既便利又牢靠，质量也放心。唯1的缺点就是价格不菲。（2）成箱购买市售品牌纯洁水，如，500mL一支的怡宝或娃哈哈，这些水的质量足以应付液相色谱的要求。先随机抽取一支做一下细菌/平板试验，待菌落数合格方可使用。这样每次只要单独开一支即可，也很便利。每次成本2元左右。这里特殊指出一个细节：在绝大多数书

3、本上，凡谈到配制流淌相都会谈到最终有一个过滤的步骤。但是从我们长期使用的实际效果来说，只要能保证水的质量，这一步完全可以也应当去除。缘由有以下三点：（1）流淌相过滤在理论上有好处，但是，实际操作时由于不行能做到专瓶专用，反而简单造成的交叉污染，对于配比简单的流淌相影响更大。（2）流淌相过滤在经济成本上不划算。买一套过滤装置要6000多元，且过滤器公认是比较简单损坏的设备。最主要是过滤片的成本太高，一片就要几十元。按一般液相柱的正常使用寿命计算，过滤片的成本会远远高于色谱柱的成本。（3）流淌相过滤对于工作效率成本不划算。使用溶剂过滤器有一个预清洗、装备、使用、用后清洗，晾干的过程，至少也有一个小

4、时的时间。这个成本也不能忽视。（4）在实际工作未发觉流淌相不过滤会对柱寿命有任何影响。我们起码有6年时间没有做过流淌相过滤的工作，但是和国内同行相比较，在同等使用强度下我们的柱寿命是比较长的。2、使用流淌相时的细菌污染流淌相刚开头没有长菌，在使用时却产生了细菌污染。这主要是在使用多元液相色谱仪时的一种不良使用习惯造成的。让我们举个例子：50的甲醇水流淌相，有两种使用方式。一种方式是在上机前就配好混合在一起，另一种方式是在流路A放纯甲醇，流路B放纯水。从单纯试验效果来说，后一种有明显的优点：首先是简洁，不需要试验者另个计算配比混合，其次就是比例精确，能得到保留时间重复性极/好的试验效果。但是，它

5、有一个致命的缺陷，就是纯水在流淌相瓶中几天时间就会长细菌（许多状况下不仅仅用纯水作流淌相，而是用缓冲盐溶液，本身就是优质肥料，细菌长得更快速），一旦有细菌柱子就坏得很快。所以这种方式要求操作人员每次试验都要用新制备的纯水，更要求在每次试验后把水相换掉，换成甲醇冲洗洁净，这一点在实际工作中许多人意识不强，就是意识到了但多次使用中总有一两次会遗漏，但是往往这一两次就足以产生致命的影响。由于液相色谱柱的堵塞是不行逆的。所以，宁可牺牲小小的保留时间的重复性，也不要用纯水溶液作为流淌相的一组。从实际试验效果来说，我建议用10的甲醇水代替纯水溶液（以前我做过不同比例甲醇水的细菌总数试验，在5就基本可以抑菌

6、，在10及以上就可以完全杀菌了），这样可以有效排解长细菌的隐患，既可作流淌相，也可冲柱。就算是在配制流淌相时会计算得麻烦一些，但是一次麻烦，终身受益。3、不适当操作：（1）在更换零件时选择的型号有误，接口不是很匹配，在拧紧的时候产生变形而使得管路堵塞。（2）样品处理液净化得不洁净，长期会在六通阀和柱之间形成堵塞不畅。（3）在使用手动六通阀时，有些人可能由于手劲小的缘由，转动的不到位，于是造成流路形成了死堵，压力快速上升超过警戒值。（4）在使用金属管路作出废液管时，应当留意最好废液瓶中先放一些水，并把废液管的出口端放在液面下。假如位于在液相上且试验使用较高浓度的缓冲盐溶液，在停机时可能在出口端结

7、晶成块并造成堵塞。这种状况不常见，但却的确发生过。漏液相色谱仪从流淌相瓶到废液瓶之间的流路是一个全封闭体系，内部压力很高，但外部却能保证一滴不漏。假如某个部件发生了漏液，那就是故障所在。漏液的缘由分两种：（1）接触硬件不当在更换零件如流路管或换柱时，换的接头接口不匹配，造成漏液。要留意不同公司的柱子接头许多是不同的，甚至同一家公司在不同时期生产的液相柱接头也有很大区分。当然选用PEEK接头是一个较好的解决方法，不仅通用性好，而且靠手拧就能保证不漏液。即使是接口本身是匹配的，但是假如操作不当也会漏液，一种不当就是力度把握不好，拧得太紧或太松；另一种不当就是致命的错误：滑丝，这是往往是动手力量不太强，螺丝钉很少拧的工犯的错误，滑丝的后果不仅是漏液那么简洁，常造成重要部件的报废。解决这个问题只能靠恶补基本功来试验，那就是拧螺丝。（2）使用仪器不当假如是输送泵漏液，最常见的缘由就是在活塞位置缓冲盐析出造成。析出的缘由有两个，一是使用缓冲盐溶液时突然加入了纯甲醇而析出，这种错误很简单避开，这是尽量不要用纯的甲醇和纯水。只要相互有10的比例就不会消失这个问题。另一缘由是在用缓冲盐溶液（不论甲醇含量有多少）作流淌相时，试验结束后没有换甲醇水冲洗，使得微渗的