同济医院检验科ISO15189体系文件20血清总胆固醇(TC)测定VIP

1、同济大学附属同济医院检验科生化组项目操作指导书TJYYJYKSH/XMZ120第2版标题：血清总胆固醇(TC)测定第章 第20节第 PAGE 3 页 共 NUMPAGES 3 页1. 目的：保证TC检测结果准确、可靠2. 适用范围：TC在全自动生化分析仪上的检测3. 项目名称：TC4. 检测方法：酶法(CHOD-PAP法)原理：血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离胆固醇(Chol),后者被胆固醇氧化酶(CHOD)氧化成4-胆烯酮并产生过氧化氢,再经过氧化酶(POD)催化4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP),生成红色醌亚胺色素(Trinder反应). 醌亚胺的最大吸收在

2、500nm左右, 吸收光与标本中TC含量成正比.反应式如下: CEH 胆固醇酯 + H2O 胆固醇 + 游离脂肪酸 CHOD 胆固醇 + O2 4-胆 烯酮+ H2O2 POD 2 H2O2 + 4-氨基安替比林 +酚 醌亚胺 +4 H2O6. 试剂：6.1 检测试剂：6.1.1 品牌：长征6.1.2 货号：13368506.1.3 包装规格：860 mL6.1.4 试剂组成： 胆固醇氧化酶 200U/L，胆固醇酯酶： 500U/L，过氧化物酶： 300U/L， 4-APP：0.25 mmol/L，对-羟基苯甲酸：10 mmol/L，缓冲液：50 mmol/L6.2 标准品：罗氏C.F.A.S

3、.混合定标液7. 仪器：HITACHI 7180 生化分析仪8. 操作：自动生化分析仪测定，具体参数见附录。 线性范围：0 20 mmol/L 参考范围：3.1 5.7 mmol/L11. 临床意义：11.1 血清胆固醇浓度增高见于：动脉粥样硬化、肾病综合征、家族性高胆固醇血症、家族性APOB缺陷症、甲状腺机能减退、糖尿病、胆总管阻塞等。11.2 浓度降低见于：家族性的无B或低B脂蛋白血症、在恶性贫血，溶血性贫血以及甲状腺机能亢进时，血清胆固醇降低。其他如感染和营养不良等情况下，胆固醇总量常见降低。12. 标本要求：12.1 受检者应在禁食至少12小时后抽血，24小时内不饮酒。抽血前应有2周时

4、间保持平时饮食习惯，近期内体重稳定，无急性病，外伤，手术等意外情况，妊娠后期各项血脂都会增高， 应在产后或终止哺乳后3个月，查血才能反映其基本血脂水平，注意有无应用影响血脂药物，还应注意采血季节，血脂水平与季节性变动，在抽血前24h内不作剧烈运动。12.2 静脉采血除非是卧床的患者，一般在采血时取坐位，体位影响水分在血管的分布，应此影响血脂水平。12.3 抗凝剂：多用血清作血脂分析，如用血浆，多选EDTANa2抗凝（1mg/ml血）。12.4 标本处理：放置时间不得超过3小时，血清必须吸出，暂存4冰箱至少可稳定4天。13. 注意事项：13.1 酶法测血清TC时，由于血清中大部分Chol是酯化的，而且血清基质对这项酶促反应有明显影响，故不宜采用纯胆固醇结晶配制的溶液作为TC酶法分析的标准液，而应以准确定值的血清作为SRM。13.2 血清Chol SRM及定标物有冻干的与冰冻保存的液态血清等两种，用前必须彻底混匀。血清保存日久可能出现混浊，冻干血清复溶后也会有混浊，一般不影响Chol标定值。