动物检疫实验室生物安全常见问题分析

1、动物检疫实验室生物安全常见问题分析 2010年10月22日内容：国家相关法律法规以及标准简要回顾动物检疫实验室生物安全常见问题第一国家相关法律法规以及标准对动物检疫实验室生物安全提出了明确的要求我国有关实验室生物安全方面的法律法规1、中华人民共和国传染病防治法2、中华人民共和国环境影响评价法3、中华人民共和国固体废物污染环境防治法4、中华人民共和国进出境动植物检疫法及其实施条例5、突发公共卫生事件应急条例6、重大动物疫情应急条例7、病原微生物实验室生物安全管理条例我国有关实验室生物安全方面的法律法规8、实验动物管理条例9、实验室生物安全通用要求（国家标准）10、生物安全实验室建筑技术规范11、

2、基因工程安全管理办法12、中国医学微生物菌种保藏管理办法13、国务院办公厅关于加强生物物种资源保护和管理的通知我国有关实验室生物安全方面的法律法规14、传染性非典型肺炎病毒研究实验室暂行管理办法15、微生物和生物医学实验室生物安全通用准则16、人间传染的病原微生物名录17、人间传染的高致病性病原微生物实验室和实验活动生物安全审批管理办法18、可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定19、人胚胎干细胞研究伦理指导原则20、不同生物安全级别微生物菌种操作规程我国有关实验室生物安全方面的法律法规21、动物病原微生物分类名录22、高致病性动物病原微生物实验室生物安全管理审批办法23、

3、高致病性动物病原微生物菌（毒）种或者样本运输包装 规范24、兽医实验室生物安全管理规范25、兽医微生物菌种保藏管理办法26、农业生物基因工程安全管理实施办法（修正）27、农业转基因生物安全管理条例28、农业转基因生物安全评价管理办法29、农业转基因生物标识管理办法我国有关实验室生物安全方面的法律法规30、农业转基因生物进口安全管理办法31、农业转基因生物加工审批办法32、转基因农产品安全管理临时措施33、开展林木转基因工程活动审批管理办法34、突发林业有害生物事件处置办法35、转基因食品卫生管理办法36、病原微生物实验室生物安全环境管理办法总局的相关要求1、关于进一步加强动物检疫实验室生物安全

4、管理的通知（国质检动函2009112号）2、关于成立出入境动物检验检疫生物安全管理专家组的通知（国质检动函2009352号）病原微生物实验室生物安全管理条例总则 （1-6条）病原微生物的分类和管理（ 7-17条）实验室的设立与管理 （18-41条）实验室感染控制 （42-48条） 监督管理 （49-55条） 法律责任（56-69条）附则（70-72条）实验室生物安全通用要求（国家标准）实验室生物安全通用要求实验室生物安全通用要求出入境动物检疫实验室生物安全常见问题第 二一、做好实验室生物安全工作必须清楚的一些概念生物安全：BIOSAFETY and BIOSECURITY 病原微生物分类以及病

5、原微生物对人和动物健康风险分级动物检疫实验室生物安全防护水平分级风险评估在动物检疫实验室生物安全工作中的重要性：评估风险大小以及是否可接受的全过程 消毒、灭菌、清洁的概念几种生物安全操作台 生物安全BIOSAFETY and BIOSECURITY“实验室生物安全” （laboratory biosafety）一词用来描述用以防止发生病原体或毒素无意中暴露及意外释放的防护原则、技术以及实践。“实验室生物安全保障” （laboratory biosecurity）是指单位和个人为防止病原体或毒素丢失、被窃、滥用、转移或有意释放而采取的安全措施。实验室生物安全的含义什么是生物危害？广义上的生物危害

6、：指有害或有潜在危害的生物因子对人、环境、生态和社会造成的危害或潜在危害。实验室生物危害：指在微生物和动物检疫实验室研究过程中对人、动物、环境、生态和社会造成的危害和对环境造成的污染。实验室生物危害的类型例如：病毒、细菌、真菌、毒素和寄生虫等。 来自感染的人和动物的血液、体液和各种组织等。组织细胞的培养和某些类型的核酸的转染。实验室相关感染暴露途径： 气溶胶吸入感染：吸入悬浮空气中的病原体或带有病原体的飞沫粘膜接触感染：手部先接触病原体而其后再接触自己的眼、口或鼻，病原体可透过这些器官的黏膜而进入体内经皮接种感染：病原体经皮肤的伤口或针刺进入体内食入感染：进食遭病原体污染的食物或饮料遭动物虫鼠

7、咬伤或抓伤遭蚊叮而染上登革热或日本脑炎等病实验室相关感染感染源培养物和储存物实验动物标本（样品）被上述内容污染的物品实验室相关感染敏感宿主免疫系统疫苗接种状况年龄实验室相关感染80% 是不明原因的感染。20% 感染的原因是明确的。80% 是由工作人员操作失误引起的；20% 是由设备故障引起的。导致感染最多的4种实验室事故溢出和泼洒针头和注射器锐器、碎玻璃动物咬伤或抓伤或动物体外寄生虫生物安全是：为了避免微生物和医学实验室中进行各种有危害或有潜在危害的生物因子活动过程中,可能对人、环境和社会造成的危害或潜在危害，而采取的防护措施（简称硬件:包括实验室设施和安全设备）和管理措施（简称软件:是指管理

8、体系,包括生物手册、程序性文件、管理制度、操作细则以及相应记录表格），达到对人、环境和社会的安全防护目的。实验室生物安全防护的内容包括安全设备、个体防护装置和措施（一级防护），实验室的特殊设计和建设要求（二级防护），严格的管理制度和标准化的操作程序和规程。病原微生物分类以及病原微生物对人和动物健康风险分级病原微生物的分类 （病原微生物实验室生物安全管理条例） 第一类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。第一类、第二类

9、病原微生物统称为高致病性病原微生物。 病原微生物的分类 （病原微生物实验室生物安全管理条例）第三类病原微生物，是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。第四类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。 微生物的危害等级（Risk Group）危害等级分类的依据：微生物的致病性；传播方式和宿主范围；具有的有效预防措施；具有的有效治疗措施。微生物的危害等级（Risk Group）微生物的危害等级（分为四个等级）：危害等级I：是指低个体和低社会危害；不可能引起健康成人

10、或动物致病的微生物；要求I级生物安全防护水平（BSLI）(MOH) 不可能引起人或动物发病的微生物，或可引起不受官方控制的动物病的微生物(OIE)。危害等级II：是指中等个体危害，有限的社会危害；很少引起严重的人或动物疾病；要求二级生物防护水平（BSL2）。(MOH) 可以引起人或动物发病，但不能在人群中或动物群中传播的微生物，所致疾病可以被有效的预防和治疗 。(OIE) 微生物的危害等级（Risk Group）危害等级III：是指高个体危险，低社会危险；可以引起严重的疾病（Bacillus anthracis, Mycobacterium tuberculosis Hantaan virus

11、es, Yellow fever virus Creutzfeldt-Jakob HIV），要求三级生物安全防护水平（BSL3）(MOH) 能够引起严重的人或动物疫病，可以在人群和/或动物群中传播，但可以有效的预防和治疗。 (OIE)危害等级VI：是指高个体危险和高社会危险；可能要求非常严重的疾病（拉萨热病毒、埃波拉 病毒, 马尔堡病毒），要求四级生物安全防护水平（BSL4）。(MOH) 可引起严重的人或动物疫病，在人群或动物群中传播的风险很高，通常没有有效的预防或治疗措施。 (OIE)BSL-1实验室BSL-实验室BSL-实验室BSL-实验室（physical protection labo

12、ratory，通常用P1、P2、P3、P4表示实验室的相应生物安全防护水平，P是英文physical（物理防护）的缩写。另一种是containment laboratory，通常用C1、C2、C3、C4或CL1、CL2、CL3、CL4表示实验室的相应生物安全防护水平，如加拿大卫生部实验室生物安全指南（第3版，2004），其中C是英文Containment（防护屏障）的缩写，L是Level（水平）的缩写。）BSL-1实验室BSL-实验室BSL-实验室BSL-实验室动物检疫实验室生物安全防护水平分级风险评估就是评估风险大小以及是否可接受的全过程。风险评估工作是动物检疫实验室做好生物安全工作的基础和

13、前提。 通过开展实验室生物安全风险评估，可以分析实验室工作场所内危险源的来源、程度，从而制定相应标准操作程序与管理规程，确定实验活动所需实验室级别、个人防护程度、应急预案等安全防范措施，为减少或避免实验室感染事件的发生提供依据和可能。 实验室生物安全工作涉及病原微生物、建筑设计工程、防护材料、空气动力等多个学科和领域的知识，是管理与研究并重的综合性工作。实验室内涉及生物、化学、物理等多方面来源的安全问题。因此相对复杂，涉及多方面知识和经验，因此，需要有经验、有资历的专业人员进行评估工作。风险评估在动物检疫实验室生物安全工作中的重要性消毒(disinfection) 利用理化因素杀死物体或环境中

14、病原微生物的措施。并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物灭菌(sterilization) 利用理化因素杀死物体上所有微生物的过程，包括芽胞。消毒、灭菌的概念防腐、清洁的概念防腐(antisepsis)：体外防止或抑制细菌生长繁殖的方法清洁（cleaning）：是指通过除去尘埃和一切污秽以减少微生物数量的过程。无菌(asepsis)： 不存在任何活菌无菌操作（aseptic technique)：防止细菌进入人体或其他物品的操作技术生物安全操作台分类超净台 抽风橱CLASS I 一级生物安全柜 CLASS II 二级生物安全柜 CALSS III三级生物安全柜（又称手套柜）1、超净台正压柜气

15、流从顶部或底部经过过滤器后从操作区正面流向工作台面，被样品污染的气流排出柜外，没有循环气流。超净台保护样品不受污染，适用于普通实验室或1级生物安全水平中对人员和环境无保护要求的实验。 2、CLASS I一级生物安全柜负压柜气流经操作人员向内进入工作台面，被污染的气流通过HEPA过滤器外排出柜外，没有循环气流。CLASS I级BSC保护操作人员和环境不受污染，适用于生物安全水平中对实验样品无保护要求的实验。 3、CLASS II 二级生物安全柜层流负压柜 它们可以安全的保护样品、人员和环境。II 级生物安全柜分为A型（30%排在室内 ）和 B型；B型中又分为B1 （70%接管道外排） 、 B2

16、（100%接管道外排） 、 B3 （30% 接管道外排） 。 CLASS II A生物安全柜（1）进入气流最低流速平均为0.38米/秒)；（2）30%气流经HEPA过滤后外排在室内；（3）被污染的管道和气流通道为正压状态生物安全柜空气流向 CLASS II B1生物安全柜（1）进入的气流最低流速平均为0.5米/秒；（2）70%气流通过专用的管道经HEPA过滤后接管道外排至室外；（3）所有受生物污染的管道和气流通道均在负压状态下或被负压的管道或气流通道包围。CLASS II B2生物安全柜（1）进入气流最低流速平均为0.5米/秒；（2）所有向内进入的气流和向下的气流均通过HEPA过滤后排到室外而

17、不在柜内循环，也不能排入实验室；100%接管道外排。（3）所有的被污染的管道和气流通道都在负压状态下或被直接外排的负 压管道或气流管道所包围。CLASS II B3生物安全柜（1）进入的气流最低流速为0.5米/秒；（2）外排到室外的气流（30%）经过HEPA高效过滤；（3）所有经生物污染的管道和气流通道均为负压状态；（4）与CLASS II A型气流方向相同，但与CLASS A型不同的是，它30%外排气是接管道排到室外的。 II级生物安全柜Airflow 4. CLASS III生物安全柜（手套柜）全封闭的、气密结构的通风柜；通过橡胶手套进行操作；柜内保持至少120Pa的负压；供气通过HEPA

18、抽入内；外排的气流经过双层HEPA过滤或经 HEPA后再经燃烧处理。 CLASS III 型BSC适用于BSL3、BSL4的生物实验。 二、个人防护容易出现的问题穿防护服容易出现的问题： 长袖、短袖、连体衣服：何种情况下穿？ 护目镜：何种情况下戴、有什么类型的？ 手套：戴什么种类的、戴几付、什么时候更换？能否重复使用？ 帽子：带什么类型的？ 口罩：口罩的种类 鞋 ：穿什么种类的鞋（拖鞋/平底/靴）？这些个人防护用品穿戴得地方/去除的地方？ 三、使用生物安全柜容易出现的问题用前要检查工作状态是否正常？生物安全柜内能否使用酒精灯？柜内废弃物单独收集？柜内外物品如何出入?手出入生物安全柜时，是否需要

19、更换手套？柜内物品如何拿出来?柜内加样器及吸头应专用。每次使用后要消毒。 四、洗手什么时候/地方洗手？戴着手套工作后还需要洗手吗？ 实验室工作人员在实际或可能接触了血液、体液或者其他污染材料后，即使戴了手套也应立即洗手。摘除手套后、使用卫生间前后、离开实验室前、进食或吸烟前应洗手。洗手池不得用于其它目的。五、移液辅助器、加样枪的正确使用不许用嘴吸 ！六、常用消毒液、第一急救用品是否放置在专门的、容易取到的位置七、高压灭菌锅的正确使用使用高压锅应：学习如何使用!能识别可以高压灭菌的物品！ 适当地放入盒取出被灭菌物品！所有使用者，必须接受培训！高压锅使用前每次使用前先将蒸馏水加到超过不锈钢支架板约

20、1-2cm 即可（从加热器盖板中心的圆孔中能看到水），不要加水过多。检查冷凝水罐中的水位，必要时进行调整，使水位刚好高出下限。将装有灭菌物品的金属篮放入灭菌锅内装载的灭菌物品要松散，以便蒸汽可以均匀作用于装载物。拧紧锅盖，以不漏气为合适应该使用灭菌指示条之类的方法来确认灭菌效果。灭菌结束后在打开顶盖前一定要确认压力腔内的压力是零。压力腔内很热，要注意不要烫伤。八、注射器的使用九、新来的工作人员必须预先阅读有关风险分析报告，并签署已知声明声 明 我知道，在BSE检测实验室工作期间，我的责任之一就是遵守该实验室的安全防护规定。我确认，我已读过并理解“BSE检测实验室风险评估”和“BSE检测实验室操

21、作守则”所述内容。 姓名（印刷体） 签名 日期 十、疯牛病动物取样防护十一、适用某些消毒药时注意药效次氯酸纳一般购买的5.25%的次氯酸纳溶液，含有25000pp的氯。次氯酸纳溶液应该放在密封、避光的容器中。操作时,要注意其中的氯对人员呼吸道的刺激损害。 次氯酸纳溶液不腐蚀玻璃器皿和铝制品，但可以腐蚀不锈钢器械和高压锅，所以，经过次氯酸纳溶液浸泡后的器械，如果要高压消毒，必须用水冲洗去表面存留的次氯酸纳。NaOH的NaOH可以和空气中的CO反应，形成碳酸盐，这样就降低了NaOH的消毒能力。所用的的NaOH的工作液应现用现配（用固体NaOH或10N NaOH配置）。NaOH有腐蚀性，但在室温下反

22、应比较慢。 NaOH煮沸的时间限制为分钟。NaOH不腐蚀不锈钢器械，但在实际工作中，有一些不锈钢器械还是受到损害，所以在使用前，最好试一下或向生产厂家咨询。NaOH对玻璃器皿和铝制品有腐蚀作用。十二、哪些操作应该在生物安全柜中进行所有可能使致病微生物及其毒素溅出或产生气溶胶的操作，除实际上不可实施外，都必须在生物安全柜内进行。不得用超净工作台代替生物安全柜。 如制备匀浆、振荡混匀时。十三、能否正确使用标识危害标识实验室内部分区标识仪器设备标识样品标识实验室在不同状态时（例如停用、在用、消毒、维护等不同状态）入口处应具有不同危险程度的警示表示和限制进入措施。 十四、记录方面常见问题病原微生物保存

23、、使用、销毁的记录不全记录不完整、不可追溯意外事故处置记录十五、病原微生物保存、运输包装病原体在保存、使用、运输过程中防止失窃、抢劫、丢失等人为破坏和地震、洪水等自然灾害以及意外事故造成的破坏。保存条件要求：主要是物理性的屏障、与警方联动和双人双锁等管理措施运输前的包装和送达后的开启要求运输方式的要求微生物材料运输包装实验室发货人应确保样品得到了很好的包装，能够以良好的状态运送到实验室，运输途中不发生渗漏。危险货物规则（The Dangerous Goods Regulations ，DGR）对诊断样品通过商业航空运输的包装和运输有明确的要求。DGR对传染性物质的定义是：已知或推测其含有病原的

24、物质。病原即微生物（包括细菌、病毒、立克次氏体、寄生虫和真菌）或重组的已知或推测其能引起人或动物致病的微生物（杂交或变异）。微生物材料运输包装国际航空运输协会列出下述名单不受危险货物规则的限制： 不含有感染性物质或不可能引起任何动物发病的物质，不受这些规定的限制，除非他们满足其它类型物质的要求；含有对任何动物非致病性微生物的物质； 已经被中和或灭活的病原，它们对健康不再具有危险性；为不具有明显的传染性的环境样品（包括食品和水样）； 干燥的血液斑点（一滴血样点在可吸附的材料上），或采集用于输血用的血液或用于输血的血液制品，或用于移植的任何组织或器官；几乎不可能存在病原的病人的标本，如果运输过程中

25、不会发生渗漏，并表明“被免除的人的标本”（ “Exempt human specimen”）或“被免除的动物标本”（“Exempt animal specimen”）字样，即不受限制。微生物材料运输包装包装应该满足下列条件：(a) 包装应该由三部分组成：(1) 最里层不渗漏的的容器；(2) 不渗漏的第二层包装；(3) 一个耐受力符合其容积、重量和用途的外部包装箱，其一个面的最小尺寸为100 mm 100 mm；(b) 对于液态样品，在初级包装和第二层包装间要填充有充足的吸水物质，即使在运输途中液态样品生渗漏，也不会渗漏到外部容器，不会危及缓冲物质的安全；(c) 当多个易碎的初级容器放置在单一的

26、第二级包装容器中时，要单独包裹或分开，不要让它们互相接触。微生物材料运输包装DGR有关生物制品的定义：“生物制品就是那些来自于活的生物体、并根据相关国家许可人为改造和重新制备了的物质，它们可以有特殊的许可要求，这些产品用来预防、治疗和诊断人或动物的疾病，或用于与上述目的相关的研发、试验或研究。这些物质包括（但不限于）完成的或未完成的产品如疫苗”。微生物材料运输包装DGR将传染性物质（包括很可能含有动物或人的病原的诊断样品）分为类和类，见UN 2814、UN 2900 或 UN 3373。类：运输过程中，人或动物如果接触到这种传染性物质，可引起永久性残疾、生命威胁或致死性疾病的传染性物质。满足这

27、些条件且影响人的传染性物质是UN 2814，只影响动物的传染性物质是UN 2900。 用于诊断目的、但不满足UN 2814 或UN 2900 的传染性物质划归类，即UN 3373，称做 “诊断样品或临床样品或生物学类样品”新发传染性病原也分配到UN 2814 or UN 2900中 图片引自WHO实验室生物安全手册（第三版） 十六、离心时需要注意的问题离心管材质要求：超速、高速、低速防止气溶胶产生平衡时的注意事项十七、实验室内的垃圾收集容器生物垃圾非生物垃圾是否分别收集运出实验室前是否初步灭菌不同性质（液体、固体）的生物垃圾是否有专门的收集容器有无处理生物垃圾的操作指南十八、人员要求实验室人员

28、须清楚自己的职责是否知晓生物安全知识有些风险高的工作须双人进行十九、实验室意外事故的常见种类及处理方法手套损坏、污染及衣物污染感染性物质溅洒污染皮肤及粘膜刺伤、切割伤或擦伤潜在危害性气溶胶的释放容器破碎及感染性物质溢出在台面、地面和其他表面未装可封闭离心桶的离心机内盛有潜在感染性物质的离心管发生破裂在可封闭的离心桶（安全杯）内离心管发生破裂操作人员突然晕倒火灾和自然灾害手套损坏、污染1.手套被污染时应立即用消毒剂喷洒手套2.脱下手套，放入黄色垃圾袋内，待消毒3.更换新手套继续实验【注意】在操作高致病性病原微生物时应该佩戴双层手套或防切割手套正确的取下手套方式注意：避免手套“触摸污染” !1)戴

29、手套的手避免触摸鼻子、面部和避免触摸或调整其他个人防护装备（如眼镜等）2)避免触摸不必要的物体表面如灯开关、门 电话等3) 注意尽量不去触摸工作台面和其他物品4) 如果在生物安全柜内发生手套污染, 应在生物安全柜内脱去外层手套，丢入生物安全柜内的高压灭菌袋中。5）留意办公污染!, 不可直接带接触过病原的手套直接接触键盘，鼠标、传真等办公设备.最常见的办公室污染源实验服-前面应该能完全扣住隔离衣和连体衣-比实验服将更适合于在微生物实验室以及生物安全柜中的操作工作。禁止在实验室中穿短袖衬衫、短裤或短裙 实验室防护服的基本要求轻缓，往里折6 必要时，进行医学追踪（定期检测）（结合生物危害评估， 特殊

30、情况特殊处理）其它容易产生气溶胶的操作：（孵育）震荡，吹打，移液枪移液（轻缓极为重要）气溶胶的污染什么是气溶胶？ 气溶胶由固体或液体小质点分散并悬浮在气体介质中形成的胶体分散体系。典型大小为0.001-100微米，能在空气中滞留至少几个小时。一类是飞沫核气溶胶，另一类是粉尘气溶胶。 微生物吸附在液体或固体颗粒上或单独都可以形成微生物气溶胶。 SARS的传播是典型的气溶胶传播，病人的喷嚏形成大量气溶胶，可以携带104-106 个病毒粒子 洗板机移液器吸取样本洗板机 吸排样本/ 拍干反应板 震荡酶标仪 震荡/水浴加热震荡孵育器离心机 最常用的实验室设备最易导致 实验室感染发生的设备！建议最好使用密

31、闭转子离心机可置于生物安全柜内气溶胶污染的预防尽量减少气溶胶产生的机会洗液，吹打等操作要尽量轻柔。高致病性病原微生物，尽量使用带生物安全罩的离心机离心，如无，则尽量密闭离心，离心后在生物安全柜内开盖。高致病性病原微生物操作尽量在生物安全柜内进行。 开窗通风一旦发生气溶胶污染的处理人员尽快离开现场（建立在生物危害评估基础上），待一定时间后气溶胶沉降再进行下一步处理封闭气溶胶空间，防止扩散。气溶胶污染空间可采用紫外消毒或熏蒸消毒处理（甲醛）感染性物质的溢出（溅出）的处理（少量溢出）大量感染性物质溢出的紧急处理一 大量感染性物质溢出的紧急处理二大量感染性物质溢出的紧急处理三 离开实验室时防护设备的脱卸顺序一般情况下的脱卸顺序：外层手套面罩/或护目镜隔离衣口罩、防护面具、防护帽鞋套内层手套所有个人防护装备不得带离实验室！二十、实验室生物安全认可没有获得认可，如果使用，违法；如果不用，无法完成检疫任务，渎职。建议尽快按照要求做好准备，申请认可。二十一、实验室消防安全知识 生物安全实验室应参照机关、团体、企业、事业单位消防安全管理规定（公安部61号令，2001.11.14）和消防监督检查规定（公安部73号令,2004.6.9）等规定，制定相应的消防安全管理程序，通过培训和演习，使实验室