动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测高效液相色谱法

1、动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测高效液相色谱法范围本标准适用于猪的肌肉、脂肪、肝脏和肾脏，鸡的肌肉、肝脏和肾脏组织中达氟沙星、 恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星药物残留量检测。2测定方法方法提要或原理用磷酸盐缓冲溶液提取试料中的药物，C 18柱净化，流动相洗脱。以磷酸一乙腈为流动相。用高效液相色谱一荧光检测法测定，外标法定量。试剂和材料5mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠饱和液14mL，加水稀释至50mL。0.03mol/L氢氧化钠溶液：取5mol/L氢氧化钠溶液0.6 mL，加水稀释至100 mL。0.05mol/L磷酸一三乙胺溶液：取浓磷酸3.4 mL，用水稀释至1000 mL。用三乙胺调节

2、 pH值至2.4 （以配4L溶液为例，取浓磷酸3.4 mLX4=13.6 mL，加水使成4000 mL，用三 乙胺调pH值至2.4）。磷酸盐缓冲溶液（用于肌肉、脂肪组织）：取磷酸二氢钾6.8g,加水使溶解并稀释至500 mL，用5mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.00磷酸盐溶液（用于肝脏、肾脏组织）：取磷酸二氢钾6.8g,加水使溶解并稀释至500 mL， pH值为4.05.0。标准储备液：分别取达氟沙星对照品约10mg，恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星对照品各 约50mg，精密称定，用0.03mol/L氢氧化钠溶液溶解并稀释成浓度为0.2mg/mL（达氟沙星）和 1 mg/mL （恩诺沙星、环

3、丙沙星和沙拉沙星）的标准工作液。置2C8C冰箱中保存，有效 期为1周。对照品溶液稀释步骤（1）对照品储备液浓度：1 mg/mL（2）最大残留限量（100p g/kgf 100ng/g）上机浓度为0.05p g/kg：1 mg/mL X 1mL5020p g/mL20p g/mL X0.5mL200f0.05|J g/kg （此浓度对应最大残留限量浓度，因为20mL提取液只有5mL上柱）（3）阳性添加（100p g/kgf 100ng/g 样品/2gf200ng/2g）20u g/mLX0.5mL10mLf 川 g/mL1p g/mLX0.2mLf200ng注：甲磺酸达氟沙星（C19H20FN3

4、O3CH4O3S）：C19H20FN3O3= 357.39 =78.81%C H FNO -CHOS453.4919 203 34 3盐酸环丙沙星(C17H18FN3O3-Hcl) C17H18FN3O3.C17H18FN3O3HC1331.35367.8190.09%测定步骤试料的制备绞碎后的供试样品、空白样品、空白添加试料样品提取取（20.05g）试料，置50mL离心管中，加磷酸盐缓冲溶液10.0mL，10000r/min 匀浆1min。匀浆液转入离心管中，中速振荡5min，离心（肌肉、脂肪10000r/min5min； 肝、肾15000r/min10min），取上清液，待用。用磷酸盐缓冲

5、溶液10.0mL洗刀头及匀 浆杯，转入离心管，洗残渣，混匀，中速振荡5min，离心（肌肉、脂肪10000r/min5min； 肝、肾15000r/min10min）。合并两次上清液，混匀，备用。净化固相萃取柱先依次用甲醇、磷酸盐缓冲溶液各2mL预洗。取上清液5.0mL过柱，用 水1mL淋洗，挤干。用流动相1.0mL洗脱，挤干，收集洗脱液。经滤膜过滤后作为 试样溶液，供高效液相色谱法测定。色谱条件流动相：0.05mol/L磷酸/三乙胺溶液一乙月青（82+18, v/v），使用前经微孔滤膜过滤;流速：0.8mL/min；检测波长：激发波长280nm；发射波长450nm；进样量:20p L3测定方法灵敏度、准确度、精密度3.1灵敏度达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星在鸡和猪的肌肉、脂肪、肝脏及肾脏组织 中的检测限为20p g/kg，最大残留限量为1