无菌工艺验证-培养基灌封试验

1、无菌工艺验证 培育基灌封实验主讲人：崔强2021年3月: cui.qiangsspc-1-为什么需求 进展培育基灌封实验？2来自消费工艺的要求对产品进展最终灭菌，是降低微生物污染风险的常用方法。但有大量药品不适用于最终灭菌而只能采用无菌消费工艺方法。无菌消费工艺是制药领域中最难的工艺之一，确保产品无菌是该工艺最大的难点。减少无菌工艺药品污染风险的两项重要措施人员培训无菌工艺验证3最终灭菌工艺与无菌消费工艺的差别最终灭菌工艺在高干净净环境下进展灌装和密封通常，产品、容器和密封件的微生物污染程度很低在密封容器中进展最终灭菌无菌消费工艺产品、容器和密封件分别进展灭菌，然后进展灌封在极高干净环境下进展

2、灌装和密封产品在最终容器中不再做进一步的灭菌处置对各个组成部分的灭菌工艺需求进展严厉验证和监控在灌封前和灌封过程中的操作会带来污染风险空瓶灭菌隧道密封件蒸汽灭菌釜除菌过滤人员半压塞瓶冻干机全压塞瓶4来自FDA和USP的要求FDA CGMP 无菌工艺药品指南2004年版 An aseptic processing operation should be validated using a microbiological growth medium in place of the product. This process simulation, also known as a media fil

3、l. USP 31 干净室和其它控制环境的微生物学评价 To assure that minimal bioburden is achieved, additional information on the evaluation of the microbiological status of the controlled environment can be obtained by the use of media fills. An acceptable media fill shows that a successful simulated product run can be cond

4、ucted on the manufacturing line at that point in time.5来自EU GMP和国内的要求EU GMP 附件1 无菌药品的消费2021年2月新版 Validation of aseptic processing should include a process simulation test using a nutrient medium (media fill).中国药品消费质量管理规范附录1998年修订SFDA 化学药品注射剂根本技术要求试行 培育基灌装验证是对设备、环境以及人员操作的一种系统验证,是判别无菌保证程度的关键手段 采用无菌消费工

5、艺的粉针剂，应能保证SAL不大于10-3 6无菌工艺产品的无菌保证 无菌工艺产品PersonnelEnvironment工艺验证人员原料环境无菌检验7作业环节与风险作业环节验证难易度人员依赖程度相关风险灭菌易低低房间设计N/AN/A中等环境监测中等可变高消毒难高高更衣难很高很高物品转移难高高无菌技术（灌封）难很高很高无菌装配难很高很高8培育基灌封实验的 常规要求9定义与目的 目的证明消费线采用无菌工艺消费无菌产品的才干对人员进展资历确认符合cGMP的要求运用培育基模拟药品进展无菌灌封，对无菌工艺进展验证。又称为“工艺模拟实验.10工艺模拟实验的通常流程将培育基暴露于设备、容器胶塞密封系统的外表

6、和关键环境条件中，并模拟实践消费完成工艺操作。对装有培育基的密闭容器进展培育以检查微生物的生长。评价结果，确定实践消费中如灌装前的调试、参与无菌原辅资料、无菌衔接、灌装和密封产品污染的能够性。 11培育基灌封实验的时机 初始验证与再验证初始验证需求反复多次，以确保结果的一致性和有效性。有差别的多次实验结果工艺过程失控的意味定期再验证定期进展，评价无菌工艺的受控情况。应综合思索每一班次及班次变化过程中有代表性的活动及干涉。对人员的资历再确认应纳入到定期再验证中。12培育基灌封实验的时机 增补性培育基灌封实验变卦及其评价对产品或消费线的每一种变卦，均应根据书面的变卦控制系统进展评价 。假设经过评价

7、以为此项变卦会影响到无菌消费工艺产品的无菌保证程度，那么需求进展增补性培育基灌封实验。比如，设备或设备的变化、消费线配置的变动、人员重要变动、环境监控结果异常、容器-胶塞系统变卦、停车时间延伸、无菌检查结果阳性等。13实验用培育基和培育温度的选择选择时的本卷须知顺应广谱微生物生长，包括细菌和真菌较好的澄明度，较小的粘度易于除菌过滤常用培育基：3大豆胰蛋白肉汤TSB厌氧培育基仅在特殊情况下运用培育温度FDA - 20-35，目的值2.5，不少于14天；如选择两个温度，那么每一温度下至少培育7天，从低温开场。PIC - 20-25下至少14天，或，先20-25下7天， 然后30-35下7天。14灌

8、装体积与数量灌装体积每只容器的灌装体积不少于总容积的1/3同样，灌装体积也不宜过大既要思索到瓶倒转或旋转时，培育基能充分接触到容器和密封件的内外表，又要保证容器内有足够的氧气支持微生物生长。灌封数量综合思索统计学要求和实践消费批量。FDA (5000瓶)：假设正常消费的批次量低于5000瓶，那么培育基灌封至少应为实践消费线的最大批次量。PIC (3000瓶)：假设正常消费的批次量低于3000瓶，那么培育基灌封至少应为实践消费线的最大批次量。15灌封时间与批次量控制灌装时间对于初始性验证，培育基灌封实验应安排在一周内的不同时间进展。对于再验证，可选择在一周终了或其它最差条件下进展。灌封时间要涵盖

9、实践消费班次。批次量控制初次验证，至少要延续胜利灌封3个批次。再验证至少需求胜利灌封1个批次。16培育基灌封实验的合格规范FDA指南2004版与EU GMP 附件1规范一致灌封量10000瓶时，假设有1瓶污染，需彻底调查；假设有两瓶污染，必需进展彻底调查，并重新验证3批。注：欧盟规范将自2021年3月起执行。17培育基灌封实验的合格规范2021年3月以前欧盟通用规范：污染率低于0.1%计算公式：实践污染率 = (95%置信限值)/(灌封容器数) 100%污染瓶数与95%置信限值间的关系污染瓶数01234567891095%置信限值34.746.37.759.1510.5111.8413.151

10、4.4315.7116.9618培育基灌封实验的合格规范SFDA 化学药品注射剂根本技术要求试行培育基灌装实验的批量与判别合格的规范批量（瓶）3000475063007760允许污染的数量（瓶）0 1 2 319不同剂型的特殊要求20冻干制剂对培育基灌封的要求冻干制剂的典型消费流程配制灌装冻干加塞轧盖第一种方式，模拟装载/卸载过程，缩短放置时间首选容器内灌封好培育基，以半压塞形状装入冻干机冻干机内部分抽真空500mbar，在室温放置一定的时间，不得冷冻。用无菌空气破真空不运用惰性气体，全压塞轧盖留意，假设所运用的容器透明度不高，应将内容物倒出进展检查。冻干制剂培育基灌封实验的特殊性对产品在冻干

11、机内放置步骤的模拟21冻干制剂对培育基灌封的要求第二种方式，模拟冻干时间半压塞产品在冻干机腔室内的放置时间同于正常工艺。缺陷：耗时长第三种方式，以经稀释的培育基模拟冻干过程容器内灌封好经稀释的培育基diluted medium，以半压塞形状装入冻干机模拟冻干过程，直到容器内的培育基大致到达正常浓度full strength为止。缺陷：耗时长，需开发特殊的冻干程序，营养支持性不均一，影响微生物的存活力。22粉针剂对培育基灌封的要求第一种方法在灌装线上直接灌装液体培育基，灌装后压塞-轧盖或熔封。第二种方法先灌装干粉培育基，再参与注射用水第三种方法先灌装惰性剂，再参与液体培育基要点采用第二、三种方法

12、时，所用惰性剂或干粉培育基需事先经过辐射灭菌。常用惰性剂有聚乙二醇8000、羧甲基纤维素、乳糖。23混悬剂/半固体制剂对培育基灌封的要求悬浮剂需求模拟搅拌或循环流动的过程。假设有无菌添加过程，也应进展模拟。半固体制剂需求将液体培育基增稠到适当粘度。可选用琼脂或羧甲基纤维素作为增稠剂，也可选用其它试剂，但要证明其没有抑制细菌或真菌的作用。在培育终了后，需将培育基从塑料或金属管中挤出检查其混浊度和真菌菌落，也可进展无菌检查实验。假设选择显色培育基遇到污染物变色的方法，那么需求对其进展验证。24方案与报告25制定培育基灌封实验方案的思索要素一消费线最长运转时间及其呵斥的相关风险干涉的次数、类型和复杂

13、程度能否有冻干工序设备的无菌装配总人数和所从事的操作无菌参与和无菌转移的次数班次改换、暂停和必要的更衣无菌设备的装配与衔接环境监测26制定培育基灌封实验方案的思索要素二消费线的配置和运转速度产品分量检查容器/密封系统与无菌操作相关的各种特殊规定总人数和所从事的操作总的原那么综合思索消费线能够呵斥污染的各种要素 尽能够模拟实践消费的无菌操作 能够时，应包括最差条件的模拟测试27验证开场前的预备任务设备确认通风系统HVAC确实认设备的在线清洗和灭菌CIP,SIP灭除菌工艺验证湿热、干热灭菌工艺除菌过滤空气过滤器的完好性检测容器/胶塞密封完好性测试人员培训干净室环境到达设计要求28培育基灌封实验方案

14、的内容举例定义被模拟的工艺定义运用的房间，灌封线和设备运用的容器和密封件的类型灌装线的速度灌封数量模拟过程中的干扰和中断的数目和类型参与的人员数目运用的培育基灌封到容器内培育基的体积选择的最差条件及其原理培育条件，培育温度，培育时间所进展的环境监测批记录复印件职责阐明一切任务的合格规范列举最终报告中需求的文件本次模拟的继续时间29方案的执行与记录一培育基灌封的日期和时间运用的房间和设备容器胶塞的型号和尺寸培育基种类和灭菌方式每容器中的灌装体积灌装速度灌封的瓶数，灯检丢弃的瓶数和缘由培育的瓶数，阳性的数量培育时间和温度30方案的执行与记录二环境监测的数据参与培育基灌封的人员培育基灵敏度检查的结果

15、有无阳性结果。如有，要给出微生物鉴定的结果。如发生异常情况，需给出调查报告。31培育基灌封实验中的环境监测环境监测按照相应的规程进展，包括：空气粒子数沉降碟浮游菌外表监测人员监测对无菌消费区环境的评价32培育基灌封实验中的灵敏度检查实验培育基灵敏度检查实验： 运用完成14天培育的灌封前期培育基样品用枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠球菌、铜绿假单胞菌、黑曲霉和环境菌作为阳性菌将每个菌种预备含100cfu/0.1ml的菌液，每个菌种接种2支培育基样品，同时并平板计数双份对真菌在20-25C下培育，对细菌在30-35 C下培育，每天检查，5天内需有生长迹象33再验证与增补性验证的要求再验证对每

16、条消费线，每年进展两次再验证，间隔时间为5-7个月 。人员至少每年参与一次再验证，以进展资历再确认。每条消费线轮番运用最大和最小规格的容器，变换消费线的速度。增补性验证根据风险程度决议培育基灌封实验的批数。通常为1-3批。34培育基灌封实验的总结报告最终报告中应包括以下内容模拟的最差条件事件清单环境监测结果微生物鉴别结果培育基的营养检查实验结果培育条件、结果读取日、结果读取人、每位参与者的灌装瓶数等信息。结论结果能否可以接受合格证书工艺验证/再验证合格证书人员资历确认证书35难点讨论36培育基灌封实验阳性结果的调查 (一)调查的范围应包括环境微生物监测数据，空气悬浮粒子监测数据CIP设备，清洁

17、、消毒程序的执行情况培育基、设备和零件的灭菌工艺，灭菌釜的校正情况高效过滤器检测 (空气悬浮粒子程度，过滤器检漏，风速丈量，密封系统检查，运用年限等)除菌过滤器完好性房间气流型式与压差人员操作技术培训情况37培育基灌封实验阳性结果的调查 (二)调查的范围还应包括以往产品无菌检查实验结果人员卫生情况监测数据培育基灌装实验中的干涉方式分析该区域近期能否有过维修活动，消费线的改造情况该消费线培育基灌封实验历史数据已灭菌物品的储存条件培育基灌封过程中的异常事件阳性污染菌与环境监测污染菌的鉴别38培育基灌封实验阳性结果的调查 (三)调查结论与风险评价培育基灌封实验结果有效暂停消费，直至确定污染来源并采取

18、有效的纠偏措施。再验证合格后，产品方可放行。对培育基灌封实验后和此前所消费的产品，进展风险评价培育基灌封实验结果无效重新进展培育基灌封实验条件1无菌灌装区的物理条件不满足要求条件2人员未按照正常消费程序操作39培育基灌封后的消费培育基灌封后可以进展消费，但要等培育基灌封合格后产品才干放行产品有报废的风险。无效的培育基灌封后可以进展消费，但所消费的批次要在胜利培育基灌封后方可放行。培育基灌封失败 消费线不能用来消费，根据调查结果断定培育基灌封的次数和数量，培育基灌封合格后，才干消费。40讨论：最差条件 Worst Case最差条件高于或低于正常范围的条件限制，与正常消费条件相比最有能够呵斥工艺或

19、消费失败的条件。留意假设某些做法会带来污染的风险，那么不允许用培育基灌封的结果为它的不合理的进展辩护 41最差条件的设计1储存时间Holding time灌封设备、灌封部件、储罐、无菌物料、药液在实践灌封前可以放置的最长时间1. 灌封设备、灌封部件、储罐、无菌物料需求再灭菌除菌的时间间隔Worst case: 用超出保管时间的灌封设备、灌封部件、储罐、无菌物料参与培育基灌封2. 产品从无菌过滤到灌封加塞完成所需求的时间Worst case：无菌过滤后存放在储罐内的培育基模拟实践消费时产品的最大储存时间后再灌封产品在灌装后的储存时间应在培育基灌封中验证42最差条件的设计2灌封的继续时间Duration of runs最保守的设计：在培育基灌封实验中，模拟用时最长的瓶子满批量消费所需求的时间，其中包括正常的干扰时间换班、设备维修。其他的设计：1.在消费完成后接着进展培育基灌封实验2.为了减少灌封瓶数，在每批实验刚开场及终了前