DB32-T 3762.5-2020新型冠状病毒检测技术规范 第5部分：血清IgM和IgG抗体酶联免疫吸附检测程序-（高清现行）

1、ICS 11.020C 62DB32江苏省地方标准DB 32/T 3762.52020 新型冠状病毒检测技术规范第 5 部分：血清 IgM 和 IgG 抗体酶联免疫吸附检测程序Technical specifications for SARS-CoV-2 detectionPart 5: Serum IgM and IgG antibodies test procedure by ELISA 2020 - 03 - 02 发布2020 - 03 - 03 实施江苏省市场监督管理局发 布DB32/T 3762.52020I 目 次 HYPERLINK l _bookmark0 前 言II HYP

2、ERLINK l _bookmark1 1 范围1 HYPERLINK l _bookmark2 2 规范性引用文件1 HYPERLINK l _bookmark3 3 术语和定义1 HYPERLINK l _bookmark4 4 环境与设施1 HYPERLINK l _bookmark5 5 设备与耗材1 HYPERLINK l _bookmark6 6 试剂与材料1 HYPERLINK l _bookmark7 7 样本采集2 HYPERLINK l _bookmark8 8 样本运输2 HYPERLINK l _bookmark9 9 酶联免疫吸附检测步骤2 DB32/T 3762.5

3、2020II 前 言DB32/T 3762新型冠状病毒检测技术规范目前分为以下部分：第1部分：生物样本采集、运输和保存；第2部分：病毒分离与鉴定；第3部分：核酸荧光PCR检测程序；第4部分：重组酶介导等温扩增程序；第5部分：血清IgM和IgG抗体酶联免疫吸附检测程序；第6部分：血清IgM和IgG抗体胶体金免疫层析检测程序；第7部分：空气样本检测与评估；第8部分：物体表面检测与评估；第9部分：医务人员职业暴露检测与评估。本部分为DB32/T 3762 的第5部分。本部分按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本部分由江苏省卫生健康委员会提出。本部分由江苏省卫生标准化技术委员会归口。本部分

4、主要起草单位：江苏省疾病预防控制中心、南京医科大学、苏州第五人民医院、苏州大学附二院、昆山市疾病预防控制中心。本部分主要起草人：曾晓燕、朱宝立、焦永军、郭喜玲、迟莹、吴斌、程军平、徐佳南、钱志远、罗晓明、沈欢喜。DB32/T 3762.52020 PAGE 2 新型冠状病毒检测技术规范第 5 部分：血清IgM 和IgG 抗体酶联免疫吸附检测程序范围本部分规定了新型冠状病毒者血清中 IgM 和 IgG 抗体酶联免疫吸附检测的环境与设施、设备与耗材、试剂与材料、血清样本采集、酶联免疫吸附实验操作。本部分适用于新型冠状病毒感染确诊病例、疑似病例以及确诊病例的密切接触者血清学检查。规范性引用文件下列文

5、件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。Doc9284-AN/905 危险品航空安全运输技术细则术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1IgM 和 IgG 抗体 IgM and IgG antibodiesSARS-CoV-2感染人体后，除了对靶器官产生致病过程外，病毒基因组编码的结构蛋白、非结构蛋白还刺激机体免疫系统，产生特异性免疫应答，分泌病原体特异性IgM和IgG抗体至血液循环中。环境与设施在BSL-2级实验室内进行实验。设备与耗材设备：生物安全柜、洗板机、酶标仪（含有 450

6、nm 波长滤光片）、高压锅、生物安全运输箱、水浴锅。耗材：个人防护装备：N95 及以上防护口罩、护目镜、一次性防护面罩、医用无纺布帽、连体防护服、一次性手术衣、乳胶手套、 防水靴套、真空釆血管、无菌螺旋口塑料管。试剂与材料新型冠状病毒人IgM抗体ELISA检测试剂盒、新型冠状病毒人IgG抗体ELISA检测试剂盒。样本采集用真空负压采血管采集血液样本5mL，室温静置30分钟，1500rpm2000rpm离心10分钟，收集血清于无菌螺口塑料管中。样本运输同本标准 第1部分6.1和6.2。酶联免疫吸附检测步骤酶联免疫吸附实验-IgM (间接法)根据样本数量取出一定量的预包被抗原的酶标板并平衡至室温，

7、每次实验设阴、阳和空白复孔对照；向板中加入 100L/管样本稀释液，然后向其中加入 1L 的待测血清（根据需要添加阳性、阴性参考对照），将酶标板用封板膜封闭，置 37孵箱中孵育 30 分钟；取出酶标板置于洗板机上用洗液洗涤（或者用洗瓶手工洗涤）5 次后，甩干孔内残留液或倒扣酶标反应板在吸水纸上拍去孔内残留液；于各孔中加入HRP 标记的抗人 IgM 工作液 100L/孔，置 37孵箱中孵育 30 分钟；9.1.5 重复 8.1.3 步骤；将显色液A、B 液按 1:1 混合后取混合显色液每孔加 100L，轻拍酶标反应板，混匀后置室温 5分钟；于各孔中加入终止液 50L/孔，轻拍混匀；将酶标板置于酶

8、标仪 450nm 波长下，测定各孔光吸收 OD 值；根据检测试剂设计者的要求判断结果。酶联免疫吸附实验-IgG (间接法)根据样本数量取出一定量的预包被抗原的酶标板并平衡至室温，每次实验设阴、阳和空白复孔对照；向板中加入 100L/管样本稀释液，然后向其中加入 1L 的待测血清（根据需要添加阳性、阴性参考对照），亦可把血清在 1:100 稀释的基础上再进行倍比稀释。将酶标板用封板膜封闭，置 37孵箱中孵育 30 分钟；取出酶标板置于洗板机上用洗液洗涤（或者用洗瓶手工洗涤）5 次后，甩干孔内残留液或倒扣酶标反应板在吸水纸上拍去孔内残留液；于各孔中加入HRP 标记的抗人 IgG 工作液 100L/孔，置 37孵箱中孵育 30 分钟；9.2.5 重复 8.2.3