专题5课题1DNA的粗提取与鉴定

1、专题5课题1DNA的粗提取与鉴定一、根底知识一提取生物大分子的根本思路： 选用一定的物理或化学方法别离具有不同物理或化学性质的生物大分子。二DNA的粗提取1、根本思路： 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。一、根底知识二DNA的粗提取2、DNA的特点：1溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度NaCl溶液中的溶解度不同。DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质那么溶于酒精。DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？在什么浓度下，DNA的溶解度最小？ 如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 当氯化钠的物质的量浓度为 2

2、 molL时，DNA的溶解度最大，浓度为 0.14 molL时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。一、根底知识二DNA的粗提取2、DNA的特点：2耐受性蛋白酶能水解蛋白质,但不能水解DNA。大多数蛋白质不能忍受6080C的高温，而DNA在80C以上才会变性。洗涤剂可以瓦解细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响。一、根底知识三DNA的鉴定在沸水浴的条件下，DNA与二苯胺反响呈现蓝色。材料：菜花、鸡血、洋葱等。二、实验设计选择原那么：含有DNA且DNA含量相对较高的生物材料。一实验材料的选择1、 鸡是真核生物，真核生物的DNA主要在染色体上。 2、鸟类的血细

3、胞核大，DNA多。3、不需要破除细胞壁。选择鸡血的原因：问题1：有什么比较简便但是可行的方法可以破碎动物细胞如鸡血细胞的细胞膜？二破碎细胞，获取含DNA的滤液讨论：为什么参加蒸馏水能使鸡血细胞破裂？问题2：假设选择植物材料，还可以通过参加一定量的蒸馏水来涨破细胞呢？二破碎细胞，获取含DNA的滤液植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜。实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中参加一定的洗涤剂和食盐，进展充分的搅拌和研磨，过滤后搜集研磨液。洗涤剂的作用： 洗涤剂也分为亲水基团和亲脂基团，可以与细胞膜中的蛋白质结合，使之溶解，进而瓦解细胞膜。食盐的作用： 食盐中主要含有NaCl，有利于DNA的溶

4、解。 考虑：洗涤剂和食盐的作用是什么？问题3：这时的滤液可能含有哪些细胞成分？ 主要有DNA、RNA、核蛋白、多糖等我们应该如何将DNA单独别离出来？三去除滤液中的杂质方案一 在滤液中参加NaCl，使NaCl溶液浓度为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再参加蒸馏水，调节NaCl溶液浓度为，析出DNA，过滤除去溶液中的杂质，再用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。 为什么反复地溶解与析出DNA，可以去除杂质？用高浓度的盐溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质。用低浓度的盐溶液使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。三去除滤液中的杂质方案二：直接在滤液中参加嫩肉粉，反响1015min，

5、其中的木瓜蛋白酶可以分解蛋白质。方案三：将滤液放在6075C的恒温水浴箱中保温1015min 。原理：蛋白酶能分解杂质蛋白，但对DNA没有影响，从而使提取的DNA与蛋白质分开。原理：大多数蛋白质不能忍受6080C的高温而变性，而DNA在80C以上才会变性。 贴壁缓慢地向滤液中参加与滤液等体积的、冷却的酒精溶液体积分数为95%，静置23min，溶液中出现白色丝状物后，用玻璃棒沿一个方向缓慢、均匀地搅拌，用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸汲取上面的水分。考虑：白色丝状物是什么？DNA四DNA的析出与鉴定原理：DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质那么可以溶于酒精。从而将DNA与蛋白质进一步别离。1

6、、DNA的析出：2、DNA的鉴定四DNA的析出与鉴定试管一试管二2mol/L NaCl溶液5 mL2mol/L NaCl溶液5 mL丝状物玻璃棒搅拌加入加入再加入参加4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，沸水浴5min。观察溶液颜色是否变蓝不变蓝对照组溶液逐渐变蓝丝状物 (DNA)实验组图示结果参加物质比较自变量均参加：4 mL二苯胺试剂2mol/LNaCl溶液5 mL鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。2、DNA的鉴定用甲基绿溶液直接滴在有DNA丝状物的载玻片或玻璃棒上，呈绿色反响。除了可以使用二苯胺法，还有什么方法可以鉴定DNA？电泳法紫外灯照射法18制备鸡血细胞液 实验操作小结第一次

7、加蒸馏水，同一方向快速搅拌加柠檬酸钠抗凝，静置或离心，然后过滤。过滤，除去细胞膜、核膜等核外物质加2mol/L NaCl溶液，同一方向缓慢搅拌冷却酒精混合，析出白色丝状物 除去核蛋白、RNA、多糖等。析出DNA第二次加蒸馏水，稀释至，过滤，再溶解到2mol/L NaCl溶液。除掉除DNA外的其他核内物质如核蛋白DNA的纯化DNA鉴定二苯胺，沸水浴，呈现蓝色破碎细胞，释放DNA 溶解核内DNA1、以血液为实验材料时，需要参加柠檬酸钠，防止血液凝固，静置后上层是血清，下层为所需要的血细胞。2、参加洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否那么容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作。参加酒精和玻璃棒搅拌时，动

8、作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。3、二苯胺试剂要现配现用，否那么会影响鉴定的效果。操作提示1、整个实验中参加“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精两次加蒸馏水的目的不同，一是涨破细胞，二是稀释溶液。酒精最好用95%的冷酒精;操作提示课后练习1提取DNA的第一步是材料的选取，其目的是一定要选取DNA含量较高的生物材料，否那么会由于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困难；第二步是DNA的释放和溶解，这一步是实验成功与否的关键，要尽可能使细胞内的DNA全部溶解；第三步是DNA的纯化，即根据DNA的溶解特性、对酶及高温的耐受性的不同等特性，最大限度地将DNA与杂

9、质分开；最后一步是对DNA进展鉴定，这是对整个实验的结果的检测。2提取蛋白质比提取DNA的难度大。这是因为，与DNA相比，蛋白质对温度、盐浓度、pH等条件要敏感得多，很容易失活；并且蛋白质的空间构造多种多样，理化性质各不一样，使得蛋白质的提取没有一种统一的方法，只能根据特定蛋白质的特性探究提取的条件，设计特定的方法。课后练习C0.14DNA析出量0.140.140.14DNA析出量DNA析出量DNA析出量ABDNaCl浓度NaCl浓度NaCl浓度NaCl浓度1、下列图示中能反映DNA析出量与NaCl溶液浓度(mol/L)之间的关系的是 （ ）B溶解度与析出量的关系是相反242、在“DNA粗提取与鉴定实验中，将含有一定杂质的DNA丝状物分别放入体积为2mL的四种溶液中，经搅拌后过滤，获得4种滤液，含DNA较少的是A滤液E B滤液F C滤液G D滤液H 1蒸馏水中