仪器分析实验指导

1、仪器分析实验指导仪器分析教研室2019年12月 TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark4 o Current Document 实验一原子吸收分光光度法测定水中钙、镁的含量1 HYPERLINK l bookmark88 o Current Document 实验二可见分光光度法测定药片中芦丁的含量5 HYPERLINK l bookmark123 o Current Document 实验三荧光光度法测定维生素B1 8 HYPERLINK l bookmark163 o Current Document 实验四差示分光光度法法测定样品中高含量镍11 HYPERL

2、INK l bookmark199 o Current Document 实验五离子选择电极法测定牙膏中的氟14 HYPERLINK l bookmark244 o Current Document 实验六高效液相色谱法测定饮料中咖啡因的含量17 HYPERLINK l bookmark290 o Current Document 实验七气相色谱法测定药用油中薄荷醇含量20 HYPERLINK l bookmark348 o Current Document 实验八有机物红外光谱的测定及谱图解析23 HYPERLINK l bookmark407 o Current Document 实验九原

3、子吸收分光光度法测定人发微量元素26 HYPERLINK l bookmark464 o Current Document 实验十气相色谱法测定牙膏中的薄荷醇含量29 HYPERLINK l bookmark485 o Current Document 实验十一核磁共振波谱法测定有机物结构 30 HYPERLINK l bookmark534 o Current Document 实验十二 气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）分析药用油成分32实验一原子吸收分光光度法测定水中钙、镁的含量一、实验目的了解原子吸收分光光度计的工作原理和结构；学习原子吸收分光光度计的使用；掌握应用标准对照法测定水中

4、元素的含量。二、实验原理原子吸收分光光度法是基于待测物质所产生的原子蒸气对特征谱线（即待 测元素的特征谱线）的吸收作用来进行定量分析的一种方法。当具有一定强度的 某波长光辐射通过原子蒸气时，由于原子蒸气对该波长的吸收，使其强度减弱， 减弱的强度与原子蒸气中待测元素原子浓度符合特定的函数关系，即遵循朗伯- 比尔定律：a _ lg %_ KCL式中，A为吸光度；I0为入射光强度；I为经原子蒸气吸收后的透射光强度; K为吸光系数；C为待测元素浓度；L为辐射光穿过原子蒸气的光程长度。如果 控制实验条件恒定，则L为定值，上式变为：A=KC本实验采用标准对照法进行定量分析：在相同条件下测定试样溶液和某一浓

5、度的标准溶液的吸光度Ax和As，由标 准溶液的浓度Cs可计算出试样中被测物的浓度Cx。由 As=KCs Ax=KCx求得 Cx=AxCs/As三、仪器与试剂仪器：360MC型或WFX-310原子吸收分光光度计 空心阴极灯 乙炔钢瓶 空气压缩机 针头过滤器 试管2个试剂：钙、镁标准溶液（实验室配）四、实验步骤待测水样供试液的制备用1ml移液管吸取待测水样于10mL刻度具塞试管中，用蒸馏水稀释至刻度。仪器测量参数的设置按所用型号原子吸收分光光度计使用说明，熟悉使用方法。待仪器充分预热 后，按表1所给测定条件，调好仪器参数。并用去离子水喷雾调仪器零点。吸取钙或镁标准溶液，测定其吸光值，记录吸光度。待

6、测水样测定在相同条件下，测量待测水样供试液的吸光度。表1：仪器测定参数一览表检测波长灯电流助燃比狭缝燃烧器高度二主兀素(nm)(mA)(mm)(mm)Ca422.754:10.29Mg285.244:10.29关机：样品测完后，用蒸馏水喷雾23min，然后先关乙炔，再关空气压缩机开 关，切断电源将各旋钮转至初始状态。五、数据处理1、记录测试参数与测试条件2、记录原始数据并绘制标准曲线3、计算待测水样中钙或镁的含量标准溶液浓度标准溶液吸光度 水样吸光度 钙（或镁）含量六、注意事项要准确配制标准系列溶液。按照所用仪器的使用方法操作仪器和设定测量条件。乙炔为易燃、易爆气体，必须严格按照操作规程进行操

7、作。开启乙炔气和点火前，要检查气路有无泄漏，废液管是否水封良好。在点燃乙炔火焰之前，应先开 空气阀，然后开乙炔气阀。结束或暂停实验时，应先关乙炔气，再关压缩空气。实验过程中，要打开抽风机，抽去废气。七、思考题原子吸收分光光度法中，光源的作用是什么？原子吸收分光光度计与紫外-可见分光光度计的主要区别是什么？附：360MC原子吸收分光光度计操作规程检查各开关置于关断位置，所有调节器逆时针转到头，连接雾化器塑料管构 成水封后插入废液桶内；通电，开启电源总开关，上方指示灯亮；打开光源室门，选取空心阴极灯，插入插座；开启灯电源供电开关，慢慢顺时针转动电器面板上相应灯电流调节器旋钮， 使电流表指针指示适当

8、值；仔细调节灯位置，使能量指示到最大值；调节燃烧器缝口与光轴方向平行且位于光轴正下方适当高度；开启右电器面板上光电倍增管高压开关，正常时指示灯点亮，将工作选择开 关置于能量档，慢慢顺时针旋转高压调节器旋钮，使能量表针移动；调狭缝适当宽度值；慢慢转动波长首轮，找准选定波长的位置，使能量指示最大值；接通空气压缩机、乙炔钢瓶，按规定条件调节其流量，并在燃烧器上方点火（注意：先开空气，后开乙炔，再点火）。用蒸馏水喷雾23min，将工作选择开关置于吸光度档，然后调节高压，使能 量在70-90范围内，空心阴极灯预热20min后可进入测定工作状态样品测完后，用蒸馏水喷雾23min，然后先关乙炔，再关空气源开

9、关，切断 电源将各旋钮转至零位。附：WFX-310原子吸收分光光度计操作步骤1、开机：开启主机电源“power”，一起开始自检。若自检未通过，发出“哗.” 报警声，可关闭电源，5min后重启。2、点燃HCL：装上所需测试元素的空心阴极灯，并置于工作光路，开启“HCL” 开关，点按“灯1”或“灯2”，输入电流值，按“ENTER”确定。3、选择合适的狭缝宽度。4、点按“.”输入高压值，如“200”，按“ENTER”确定。5、选择波长：转动“波长调节”旋钮外圈，快速调节到所测元素的波长数值，再 缓慢调节“波长调节”内圈，精确调节波长，使能量显示最大。如能量读数过低， 可重复操作步骤四，适当提高高压值

10、；如能量读书过高，可适当减低高压值。6、调整灯位置：打开光源室，调节“灯位置”调节旋钮，使能量读数显示最高。7、调节空气压力：开启空气压缩机“风机开关”，再开启“工作开关”，等待一段 时间，调节“压力调节”旋钮，使压力显示未0.2Mpa。8、调节乙炔流量：开启乙炔钢瓶主开关，调节输出压力为0.05Mpa。9、点火：在确定废液器水封良好的情况下，开启主机乙炔开关，根据火焰类型， 调节“C2H2流量”调节旋钮至合适流量，用点火器点燃火焰。10、待仪器稳定15min后，点按“高压平衡”，自动调节PMT负高压。11、吸入双蒸水，点按“调零”，使吸光度显示为零。12、测试：吸入样品，待读书稳定后读取样品

11、元素吸光度。13、测试时，可适当调节“延迟时间”，使显示数值稳定。14、调节完毕，吸入双蒸水清洗原子化器15min，关闭主机“乙炔”开关，熄灭火 焰。关闭乙炔钢瓶开关，关闭空压机“工作开关”、“风机开关”。关闭主机“HCL” 开关、“power”开关。15、倒弃废液瓶废水，清洁仪器及实验室。实验二可见分光光度法测定药片中芦丁的含量一、实验目的：了解显色反应基本原理熟悉朗伯-比尔定律掌握标准曲线法定量测定组分含量的方法二、实验原理：根据朗伯-比尔定律:当用一适当波长的单色光照射厚度一定的均匀溶液时， 吸光度与溶液浓度呈正比，即：A= kc（A为吸光度，k为比例系数，c为溶液浓度）在定量分析时，测

12、定一系列已知浓度的标准品溶液的吸光度A，以标准溶液 浓度c为横坐标，吸光度A为纵坐标，做出标准曲线。在分析待测溶液时，根 据测量的吸光度A，查标准曲线即可确定相应的浓度。本实验分析物质芦丁是一种黄酮甙类药物，其分子中含酚羟基和碱性氧原 子，能与A13+生成黄色配合物，在亚硝酸钠的碱性溶液中呈现红橙色，最大吸收 波长480nm。本实验利用可见分光光度计对系列浓度芦丁配合物的吸光度进行测 定，根据芦丁配合物浓度与吸光度之间的关系制作标准曲线法进行定量分析。三、仪器与试剂：1、仪器：721s可见分光光度计，分析天平，涡旋混合器，刻度试管（10mL）8 支，1mL吸量管2支、2mL吸量管2支、5mL吸

13、量管2支，研钵一个。2、试剂：芦丁标准溶液、NaNO2 溶液（0.05mo1/L）、A1（NO3）3 溶液（0.1mo1/L）、 NaOH溶液（0.1mol/L）、60%乙醇溶液，芦丁片，蒸馏水。四、实验步骤：芦丁标准液的配制（实验室）：0.45 g芦丁标准品用60%乙醇溶液稀释至1000mL, 浓度为0.45 mg/mL样品溶液的制备：1片芦丁片研磨，称重，用60%乙醇定容至10mL，旋涡震 荡2min，超声10min，上清液备用。3.标准曲线的制备及样品测定（7支试管编号，按下表操作）:1234567（样品管）标准溶液（mL）0.00.51.01.52.02.50.5 （样品）60% 乙醇

14、(mL)2.52.01.51.00.50.02.0NaNO2 溶液(mL)0.150.150.150.150.150.150.15摇匀，放置6minAl(NO3)3 溶液(mL)0.150.150.150.150.150.150.15摇匀，放置6minNaOH 溶液(mL)2.02.02.02.02.02.02.0蒸馏水定容至5mL，振摇，放置15min用第1管做参比溶液、721s可见分光光度计在480nm比色，读取吸光度值。以 各标准溶液浓度（mg/mL）为横坐标，各管吸光度值为纵坐标，做图既得标准曲 线。五、实验记录卢丁标准溶液 体积V（mL）0.51.01.52.02.5样品溶液0.5标

15、准溶液浓度c（mg/mL）吸光度A六、数据处理及计算结果根据样品溶液的吸光度查标准曲线得样品稀释后芦丁的浓度，计算芦丁片中 芦丁的百分含量。附：721s分光光度计操作步骤：预热为保证测定结果的准确，须开机预热30分钟后再测定样品。设定测试波长调节仪器面板波长选择旋钮，到指定测试波长。仪器调零在透光率档，打开样品室盖（关闭光门），按“0%”键，仪器自动调零。调透光率100%将盛有参比溶液的比色杯置入样品室光路，盖下盖子（即打开光门）按下 “100%”即自动调整透光率100%。注意：调整100%时整机自动增益系统可能影 响0%，故应检查0%，如有变化可重调0%一次。吸光度测定按面板模式键，选择吸光

16、度档，测定。依次将样品置入光路，读取吸光度值。实验三荧光分光光度法测定维生素B1一、实验目的学习荧光分光光度法分析的基本原理掌握荧光光度计的使用方法二、原理维生素B1 （又名硫胺素）在碱性高铁氤化钾溶液中氧化成硫色素，可用正 丁醇提取，硫色素在紫外线照射下，发出蓝色荧光，荧光的强弱与维生素B1含 量成正比，这是维生素B1荧光定量测定的根据。本实验采用标准对照法进行定量分析。三、仪器与试剂仪器：荧光分光光度计，5mL吸量管3支、1mL吸量移液管2支、10mL比色 管4只，漩涡混合器。试剂:碱性铁氤化钾溶液（避光保存）、50 ug/mL维生素B1标准液（0.1mol/L HCl 配置）、15%Na

17、OH溶液、正丁醇（AR）、去离子水。四、实验步骤按下表配制待测溶液激发光谱扫描：吸取标准溶液的正丁醇上清液于比色池中，固定测量波长，改变激发光波长， 测量荧光强度的变化。以激发光波长为横坐标，荧光强度为纵坐标作图，即得激 发光谱，记录最大激发波长。发射光谱扫描：固定最大激发光波长为其激发波长，测定不同发射波长处的荧光强度，以荧 光波长为横坐标，荧光强度为纵坐标作图，即得发射光谱。记录发射光波长。各待测溶液荧光强度的测定：设置荧光测定条件（激发光波长、激发光狭缝10nm、发射光波长、发射光狭 缝2nm）取各管上层正丁醇清液依次测定并记录下列荧光强度：标准溶液荧光强度Fs标准空白溶液荧光强度Fs0

18、样品溶液荧光强度Fx样品空白溶液荧光强度Fx0标准溶液标准空白 样品溶液样品空白VitB1标准溶液(mL)11VitB样品溶液（mL）1115%NaOH(mL)33碱性铁氤化钾（mL）33加入蒸馏水至5mL，摇匀止J醇（mL）5555摇匀50秒，静置分层五、数据处理:Vi叫样品溶液含量（pg/mL）=样品溶液F-样品空白 听 x50标准溶液Fs -标准空白Fs0附：WFY-28型荧光分光光度计操作规程开机开启光源电源，再开荧光分光光度计主机电源。开启计算机电源，打开荧光中文操作系统。点击“复位”进行荧光分光光度计 系统复位。激发光谱扫描点击“参数设置”，选择激发光谱扫描，固定发射单色器的波长位

19、置，激发单 色器波长扫描，完成对标准溶液激发光谱的采集，从激发光谱图中得出最适合的 激发光波长，需要设置的参数有激发单色器的波长扫描范围（如激发波长300-500nm，发射波长460nm），图谱纵坐标为0-100，光谱带宽（激发10nm， 发射2nm）。发射光谱扫描在最适合的激发波长下，对标准溶液的发射光谱进行采集，从而确定最适合 的发射波长。如本实验中从激发光谱图得到激发波长为375或376nm，然后发射 光波长扫描范围设置为300-500nm，图谱纵坐标为0-100，光谱带宽（激发10nm， 发射2nm）。时间扫描从固定激发波长和发射波长，在一段时间内进行光谱能量的扫描。关机先关闭荧光分光

20、光度计主机电源，然后在关闭光源电源，最后关闭计算机电源。实验四 差示分光光度法测定样品中高含量镍一、实验目的了解高吸光度差示法的基本原理及其优点掌握高吸光度差示法测定的基本操作二、仪器与试剂1、仪器：721s分光光度计（配1cm比色皿4只），涡旋混合器，刻度试管（10ml） 7支，1ml移液管5支。2、试剂：镣标准溶液（0.05g/l）、柠檬酸铵溶液（5%）、碘溶液（0.面。1/1）、丁二 酮肟溶液（0.2%）。三、基本原理普通分光光度法在测定高含量或高吸收溶液时，由于偏离比尔定律及吸光度 超出了准确测量的范围，因而高浓度样品的测定采用高吸光度差示法则比较适 宜。差示分光光度法和普通分光光度法

21、的区别在于所用参比溶液的不同。差示法 是采用一已知浓度的标准溶液代替普通分光光度法中的“空白溶液”作参比来测 定试样溶液的吸光度，而其测定过程则基本相同。应用高吸光度差示法，由于选择适宜的参比溶液浓度，通过调满度（即 T=100%或A=0），充分利用了仪器的灵敏度，扩展了读数标尺，使吸光度测量的 相对误差公/A大为减小，从而提高了测量结果的准确度。本实验利用Ni2+在氨性溶液中与丁二酮肟生成鲜红色配合物，在530nm波 长处进行高吸光度差示法测量样品试液中镣的含量。采用标准曲线法进行定量分 析。四、实验步骤1. 7支试管编号，按下表配制标准系列溶液及样品溶液123456测定管标准溶液(mL)0

22、.10.20.30.40.50.60.5(样品)柠檬酸铵(mL)0.50.50.50.50.50.50.5碘溶液(mL)0.250.250.250.250.250.250.25摇匀丁二酮肟溶液(mL：)1111111蒸馏水稀释至5ml，振摇2.吸光度的测定：在530nm波长处，用1cm比色皿，以第一份溶液为参比测定 其它标准溶液的吸光度及样品溶液的吸光度。五、实验记录镍标准溶液体积V/mL0.200.300.400.500.60试样溶液镍标准溶液浓度C/mg/mL镍标液与参比液浓度差/C吸光度A六、数据处理及计算结果作差示分光光度法标准曲线，求算试样溶液的浓度。附：721s分光光度计操作步骤：

23、预热为测定结果的准确，须开机预热30分钟后正式测定样品。设定测试波长调节仪器面板波长选择旋钮，使到指定测试波长。仪器调零打开试样盖（关闭光门），或用不透光材料在样品室中阻断光路，然后按“0%” 键，仪器自动调零。仪器调整100%T将放入待测溶液的比色杯置入样品室光路，盖下盖子（即打开光门）按下 “100% ”即自动调整100%，一次有误差时可加按一次。注意：调整100%时整机自动增益系统可能影响0%，故应检查0%，如有变化可重调0%一次。测定吸光度按面板模式键，选择吸光度测定，依次将样品置入光路，读取吸光度值。实验五 离子选择电极法测定牙膏中的氟一、目的掌握直接电位法的测定原理及实验方法。熟悉

24、氟离子选择电极和离子计的使用方法。二、原理目前，人们广泛使用各类含氟牙膏。本实验将通过离子选择电极法测量牙膏 样品中氟离子的含量。实验应用氟离子选择电极、甘汞电极和待测试液组成原电池。测量得到的电 动势与氟离子浓度的关系符合Nernst公式：E=K+（2.303RT/F）lgaF-若在试液中加入适量的惰性电解质（如硝酸钠等），使离子强度保持不变， 即使离子的活度系数为一常数，那么：E=K+（2.303RT/F）lgF-本实验采用标准加入法进行定量。该法操作简便，可排除基体干扰的影响。三、仪器及试剂仪器：PHS-3E型离子计、氟电极、甘汞电极、磁力搅拌器、电子天平、1mL 微量移液器1个、100

25、mL烧杯2个、100mL量筒1个、0.1mL吸量管1支，5mL 吸量管1支。试剂：0.001mol/L NaF标准溶液总离子强度调节缓冲液（TISAB）:取29克硝酸钠和0.2克二水合柠檬酸钠，溶 于50ml 1： 1 （体积）的醋酸与50ml 5M氢氧化钠的混合溶液中，测量该溶液的 pH，若不是5.05.5可用5M NaOH或6N HCl调节。四、实验步骤：离子计的调节：安装好测定装置，氟电极接离子计负极，甘汞电极接正极。按离子计使用方 法调节好仪器，用“一mV ”档进行测量。样品的测定：称取牙膏约1.00g于100mL烧杯中，加50mL H2O溶解。取上液0.1mL加 5mL TISAB

26、45mL去离子水混匀，测定其电极电位E 再加入0.5mL 0.001mol/L NaF标准溶液混匀，测定其电极电位E2。五、数据及处理用标准加入法计算牙膏中F-的含量CVC=C10ZE/S-1) -1XVCs一标准溶液浓度，VS一标准溶液体积，Vx一样品溶液体积X/E= | E2-E1 I （单位：V）S=0.05916附录：一、离子计使用方法安装好测定装置，氟电极接PH计负极，甘汞电极接正极。打开电源，选择模式使仪器进入mV测定状态。把氟电极和参比电极夹在电极架上。用蒸馏水清洗电极头部。把磁转子放入被测试液，将电极插入液面下，开启磁转子，待读数稳定后记 录。二、实验注意事项在进行测试之前，先

27、要检查一下使用的仪器和电极对是否处于使用状态，仪 器开机预热。测定时不需加热，请勿打开加热按钮。磁转子沿烧杯壁轻放至杯中，缓慢增加搅拌速度，且控制不宜过快，以防磁 转子跳动，打破玻璃电极。电极对置入试液的深度基本相同；电极高度不能过低；可在搅拌中读取数值。由于电极有“记忆”效应，每测完一个样品后一定要清洗氟电极。磁转子要回收。实验六 反相高效液相色谱法测定饮料中咖啡因的含量一、实验目的了解反相高效液相色谱分离系统的结构和原理。熟悉反相高效液相色谱仪的使用方法。掌握反相高效液相色谱测定咖啡因的方法。二、实验原理咖啡因又称咖啡碱，是一种生物碱，属黄嘌吟衍生物，其化学名称为1, 3, 7-三甲基黄嘌

28、吟，它能使人大脑兴奋。茶叶、咖啡、可乐饮料，APC药片等含有 咖啡因。传统测定咖啡因含量的方法是先进行萃取，再用分光光度法测定。由于有些 具有紫外吸收的杂质也同时存在，会产生一些误差，并且整个过程也比较繁琐。 用反相色谱法测定咖啡因是先分离，后检测，消除了杂质干扰，使得检测结果更 为准确。在高效液相色谱中，若采用非极性固定相（如十八烷基键合相）和极性流动 相，即构成反相色谱分离系统。与正相色谱系统相比，反相色谱系统的应用更为 广泛。饮料中咖啡因含量的测定，采用反相高效液相色谱法可以将饮料中的咖啡 因与其他组分（如单宁酸、咖啡酸、蔗糖等）进行分离。通过设置适宜的色谱条件，将浓度不同的咖啡因标准溶

29、液及待测溶液依次注 入液相色谱仪，通过测定色谱图上的保留时间定性，确定咖啡因的色谱峰。然后 用峰面积作为定量测定的参数，采用标准曲线法测定饮料中的咖啡因含量。三、仪器与试剂仪器：高效液相色谱仪（配紫外检测器）、ODS柱（4.6mmx150mm,5m）、微 量注射器（平头）、超声波发生器、10mL 一次性注射器、针头过滤器（滤膜 0.45pm）、试管 2 只。试剂：2.1 1mg/mL咖啡因标准储备溶液：准确称取0.1000g咖啡因，用少量甲醇加热 溶解，并用甲醇定容至100 mL。2.2咖啡因标准工作溶液：用移液管准确移取0.25mL、0.50mL、1.00mL、1.25 mL、1.50 mL

30、咖啡因标准储备溶液，分别置于10mL容量瓶（或比色管中）中，用 甲醇稀释至刻度，其浓度分别为25pg/mL、50pg/mL、100pg/mL、125pg/mL、 150pg/mL。然后，将这些溶液脱气过滤。2.3甲醇（色谱纯）、去离子水。四、实验步骤：开机：依次打开高压泵、检测器、工作站。色谱条件如下：色谱柱：ODS 柱（4.6mmx150mm,5m）柱温： 室温流动相：甲醇：水=40:60流动相流速：1mL/min检测器：UV（270nm）待基线稳定后，开始进样。样品的准备：用一次性注射器移取1mL已超声脱气的饮料，经滤膜（0.45pm） 过滤后取20pL，待液相色谱仪准备好后进行分析。标准

31、工作曲线的绘制：取各浓度标准溶液20pL，按浓度从低到高依次进样， 记录峰面积和保留时间的数据。样品测定：取待测样品20pL进样，记录峰面积和保留时间的数据实验完毕，清洗色谱系统后，关机。五、结果处理根据实验数据，绘制咖啡因浓度和峰面积的标准工作曲线。根据保留时间，从样品色谱图上找出咖啡因的峰。根据样品色谱图咖啡因的 峰面积及标准工作曲线，计算样品中咖啡因的含量。六、思考题试分析咖啡因标准工作溶液和样品的制备过程中的注意事项。如何由标准曲线法定量，求得样品中咖啡因的含量。附：岛津HPLC （LC-15C）操作程序1打开LC-15C各单元电源，待各单元自检通过。2排气操作：打开输液泵排空阀（逆时

32、针90度以上），按Purge键，泵开始排空 运行。检查泵流动相入口的Teflon管路没有气泡后，再按Purge键停止排空，然 后关紧排空阀（顺时针旋紧）3设定仪器参数：LC泵参数只设定流速（ml/min），按Func键设定参数。SPD检测器只设定波长久（nm），按Func键设定参数。4按Pump键启动泵，泵运行后可以检查泵压力（柱前压）上升直至稳定。5等待系统平衡，可以查看紫外检测器吸收值变化，平衡后一般该值稳定不变。 然后按ZERO键基线调零。平衡时间与交换的流动相性质有关，一般从20分钟 几小时不定。（也可以从工作站中查看基线，判定是否平衡）6进样分析：6.1将进样阀搬至LOAD位置。6.

33、2注入样品。6.3迅速将进样阀搬至INJECT位置，自动同步触发工作站采集数据。7重复进样操作返回到步骤6，即可。8清洗流路系统：（可以关紫外检测器电源，只开泵清洗）8.1如果流动相中没有添加改性剂，可直接更换甲醇清洗40分钟，再关闭其他 LC各单元电源。8.2如果使用缓冲液，先用甲醇-水溶液（v/v,10: 90）更换缓冲液，清洗1小时， 然后更换纯甲醇清洗40分钟，再关闭其他LC各单元电源。9.注意事项开机之前，根据所做样品方法要求，准备所用流动相，标样及样品。流动相需要 抽滤，超声脱气。标样和样品需要过滤。实验七 气相色谱法测定药用油中薄荷醇含量一、实验目的：了解气相色谱仪的基本结构和操

34、作方法。掌握气相色谱法的定性及定量分析。掌握微量注射器进样技术。二、实验原理：气相色谱法（Gas Chromatography,GC）是以气体作为流动相，当它携带欲分 离的混合物流经固定相时，由于混合物中各组份的性质不同，与固定相作用的程 度也有所不同，因而组份在两相间具有不同的分配系数，经过反复的分配之后， 各组份在固定相中的滞留时间不同，从而使各组份依次流出色谱柱而得到分离。外标法是在一定的操作条件下，用纯组分或已知浓度的标准溶液配制一系列 不同含量的标准样品，准确进样后，用所得组分的色谱峰面积（或峰高）对组分 浓度作标准曲线。分析样品时，准确定量进样，根据所得峰面积（或峰高），从 标准工

35、作曲线上求得其含量。药用油中薄荷醇含量的测定，以毛细管气相色谱柱分离，氢火焰离子化检测 器进行检测，根据薄荷醇保留时间定性，色谱峰面积与标准工作曲线比较进行定 量。三、仪器与试剂：仪器：GC-2014C气相色谱仪，SE-54毛细管色谱柱（30mx0.30mm，0.5pm）， 高压气体：氢气，氮气，空气，10L微量注射器，2-20uL微量移液器，10mL比 色管1支。试剂：薄荷醇标准系列溶液，无水乙醇。四、实验步骤色谱操作条件色谱柱：SE-54毛细管气相色谱柱（30mx0.30mm，0.5pm）载气：氮气（99.999%）柱压：100KPa，气化室温度（SPL1）： 260C，进样量：2uL，分

36、流比：20检测器：氢火焰离子化检测器，检测器温度(SFID)： 280C(1)程序升温：此徊？ 2OQDC2min 2 mm薄荷醇标准系列溶液的配制(实验室配)精密称取薄荷脑0.1g，置入50mL容量瓶中，加入无水乙醇溶解并稀释至刻 度，制得2.0mg/mL标准储备液。精密称取薄荷脑储备液1、2、3、4、5mL于 10mL比色管中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得系列浓度溶液。样品溶液配制移取药用油10pL，置于10mL刻度试管中，加入无水乙醇溶解并稀释至5mL， 制得样品溶液。色谱测定用微量注射器分别吸取上述标准系列溶液2uL进样测定，按上述气相色谱 条件分析，得到薄荷醇峰面积与浓度标准工作

37、曲线。吸取2L样品溶液注入色谱仪，得到色谱图。以保留时间对照定性，根据 标准工作曲线得到样品中薄荷醇含量。五、数据处理：由样品溶液中薄荷醇含量计算药用油中薄荷醇的浓度六、思考题：简述气相色谱仪的主要结构。讨论柱温对色谱分离的影响(从分析时间、选择性及理论塔板数)附录：岛津GC-2010气相色谱仪操作规程一、开机准备：检查所有气路、电路是否正常。打开载气（N2）钢瓶主阀，然后用检漏液检漏，确保气密性良好，调节载气流 量为适当值（0.020.05MPa）。二、分析条件设定及测定：打开GC电源。打开计算机、打印机及显示器电源。双击GCsolution图标，进 入实时分析。按GC主机显示屏上MONT键

38、进入条件选择界面。在显示器实时进样界面，启动SPL1、COLUMN、SYSTEM于ON状态。在file下拉菜单中打开相应的方法文件后，启动SFID于ON状态。或者新建 方法，并设置适当的实验条件（进样器温度、进样方式、柱温、柱流量、分流比、 FID温度等）。打开空气、氢气，分别调节其流量为合适值，点击FLAME点火。基线平稳后采集样品。三、关机：先将氢气和空气关闭，放掉剩余气体，关闭火焰，然后降温，在柱箱温度降至50C以下才能关闭载气和电源。四、注意事项：检测器用氢气做燃气，如果氢气气路是打开的，而且色谱柱没有连接在检测器 上，这时氢气就会泄露在柱箱内，如果柱箱升温就有爆炸的危险。因此，在检测

39、 器与色谱柱没有连接时，氢气气路必须关掉。在检测器温度低于100C时点火，会造成检测器内积水而影响检测器的基线稳 定性。使用气相色谱仪时注意室内通风。实验八 有机物红外光谱的测定及谱图解析一、目的要求熟悉红外分光光度仪的工作原理及其使用方法；掌握用压片法制作固体试样晶片的方法；学习用红外吸收光谱进行化合物的定性分析。二、实验原理波长范围在0.781000 pm之间的红外光，不足以使样品产生分子电子能级 的跃迁，而只是振动能级与转动能级的跃迁。由于每个振动能级的变化都伴随许 多转动能级的变化，因此红外光谱也是带状光谱。分子在振动和转动过程中只有 伴随净的偶极矩变化的键才有红外活性。因为分子振动伴

40、随偶极矩改变时，分子 内电荷分布变化会产生交变电场，当其频率与入射辐射电磁波频率相等时才会产 生红外吸收。因此，除少数同核双原子分子如O2, N2, Cl2等无红外吸收外，大 多数分子都有红外活性。一般的红外光谱是指2.550 pm （对应波数4000200 cm-1）之间的中红外 光谱，这是研究有机化合物最常用的光谱区域。物质分子中的各种不同基团，有 选择性地吸收不同频率的红外辐射后，发生振动能级之间的跃迁，形成各自独特 的红外吸收光谱。因此根据红外吸收光谱的峰位、峰强、峰形和峰的数目，可以 判断物质中可能存在的某些官能团，进而推断未知物的结构。三、仪器与试剂仪器：傅利叶红外分光光度计IRA

41、ffinity-1、粉末压片机1台、玛瑙研钵、快速红外干燥灯。试剂:KBr （干燥），苯甲酸（干燥），水杨酸（干燥），二苯甲酮（干燥），阿司匹林（干燥），二苯乙炔（干燥），丙酮。四、实验步骤将所有的模具擦拭干净，在红外灯下烘烤；在红外灯下，向研钵中加入KBr，进行研磨（研细后，粒度小于2 pm）；将约200 mg研磨好的KBr装入模具，在压片机上压片，压力上升至80 KN, 稳定5 min；打开傅里叶红外光谱仪，将压好的KBr薄片装机，设置背景的各项参数之后， 进行测试，得到背景的扫描谱图；取一定量的样品及KBr （样品：KBr = 1： 100）放入研钵中研细，然后重复上 述步骤得到试样的薄

42、片；将苯甲酸样品的薄片固定好，装入红外光谱仪，设置样品测试的各项参数后进 行测试，得到苯甲酸的红外谱图；测定未知样品的红外光谱图；在红外光谱仪自带的谱图库中进行检索，检出相关度较大的已知物的标准谱 图。五、结果与分析对苯甲酸及未知样品的红外光谱图进行分析，参考标准谱图得出未知样品的 鉴定结果。六、注意事项样品应干燥，研磨时应在干燥灯下进行；在制样时应尽量避免引入杂质，研钵、药匙、模具等须洁净；固体样品压片时，试样量必须合适。试样量过多，制得的试样晶片太“厚”，透 光率差，导致收集到的谱图中强峰超出检测范围；试样量太少，制得的晶片太 “薄”，收集到的谱图信噪比差。七、思考题在测定固体红外谱图时，

43、如果没有把水分完全除去，对实验结果有什么影 响？附：岛津IRAffinity-1型傅里叶变换红外光谱仪操作规程开启主机电源开关，指示灯亮，表示电源已接通；打开计算机和打印机电源；启动IRsolution软件，进行初始化；设置扫描参数，对背景和样品进行测定；谱图处理：根据需要选择参数进行图谱相应的处理；打印谱图；关闭 IRsolution 软件；关闭计算机、打印机；关闭主机电源。实验九原子吸收分光光度法测定人发微量元素一、目的要求了解生物试样消化的基本方法学会原子吸收分光光度计的使用方法二、实验原理微量元素与人体健康有密切关系，人发中微量元素含量高，取样方便，是一 种很好的活体检查材料，测定人发

44、中微量元素的含量，可反映机体微量元素的营 养情况、环境污染及对机体的危害程度。在原子吸收测定中，在使用锐线光源和低浓度的情况下，基态原子蒸气对共 振线的吸收符合比尔定律：A=lg(I0/I)=KC因此可以用于微量元素的定量测定。本实验采用标准对照法进行定量分析。三、仪器与试剂仪器：原子吸收分光光度计、锌空心阴极灯、钙空心阴极灯、乙炔钢瓶、空气 压缩机、分析天平、水浴箱、烘箱、漩涡混合器、1mL微量移液器、100mL烧 杯1只、10mL刻度试管2支、针头过滤器1个。试剂：硝酸(AR)、30%过氧化氢(AR)、1.00ug/mL锌标准溶液、10.00ug/mL 钙标准溶液、中性洗涤剂、无水乙醇、去

45、离子水。四、实验步骤发样预处理：用剪刀取1-2g枕部距发根1-3cm处的发样，于烧杯中用中性洗涤剂浸泡2min， 然后用自来水冲洗至无泡，重复2-3次，以保证洗去头发样品上的污垢和油腻。 最后，发样用去离子水冲洗三次，无水乙醇洗两次。置于烘箱中于80C干燥至 恒重发样消化：将准确称取的约0.1g发样(记录头发准确质量)置于10mL刻度试管中，加 入1mL 65% HNO3，水浴加热消化，待溶液清亮，冷却， 口 0.5mL 30%过氧化氢 混匀，去离子水定容至10mL。过滤，同时制作3份空白。3.测定：接待测元素空心阴极灯，开机预热30min，按下表调节好仪器的工作参数， 点燃乙炔-空气火焰。将

46、测量档调到浓度档，用空气调零，测定标准溶液、空白 溶液及样品溶液的吸光度。元素的测试条件元素波长(nm)狭缝(mm)灯电流(mA)灯焰高 度(cm)空气流 量(L/h)乙炔流量(L/h)Zn213.90.22639060Ca423.850.22839090五、数据记录和处理钙标准溶液浓度Cs钙标准溶液吸光度As发样吸光度Ax空白试样吸光度A空白锌标准溶液浓度Cs锌标准溶液吸光度As发样吸光度Ax空白试样吸光度A空白Cx=(Ax-A 空白)Cs/As发样中锌含量(ug/g)=Cx*5/m头发六、注意事项由于样品元素含量较低，故整个操作过程特别要谨慎小心，以防引入污染。按照所用仪器的使用方法操作仪

47、器和设定测量条件。乙炔为易燃、易爆气体，必须严格按照操作规程进行操作。开启乙炔气和点火 前，要检查气路有无泄漏，废液管是否水封良好。在点燃乙炔火焰之前，应先开 空气阀，然后开乙炔气阀。结束或暂停实验时，应先关乙炔气，再关压缩空气。实验过程中，要打开抽风机，抽去废气。附：WFX-310原子吸收分光光度计操作步骤1、开机：开启主机电源“power”，一起开始自检。若自检未通过，发出“哗.” 报警声，可关闭电源，5min后重启。2、点燃HCL：装上所需测试元素的空心阴极灯，并置于工作光路，开启“HCL” 开关，点按“灯1”或“灯2”，输入电流值，按“ENTER”确定。3、选择合适的狭缝宽度。4、点按

48、“.”输入高压值，如“200”，按“ENTER”确定。5、选择波长：转动“波长调节”旋钮外圈，快速调节到所测元素的波长数值，再 缓慢调节“波长调节”内圈，精确调节波长，使能量显示最大。如能量读数过低， 可重复操作步骤四，适当提高高压值；如能量读书过高，可适当减低高压值。6、调整灯位置：打开光源室，调节“灯位置”调节旋钮，使能量读数显示最高。7、调节空气压力：开启空气压缩机“风机开关”，再开启“工作开关”，等待一段 时间，调节“压力调节”旋钮，使压力显示未0.2Mpa。8、调节乙炔流量：开启乙炔钢瓶主开关，调节输出压力为0.05Mpa。9、点火：在确定废液器水封良好的情况下，开启主机乙炔开关，根

49、据火焰类型， 调节“C2H2流量”调节旋钮至合适流量，用点火器点燃火焰。10、待仪器稳定15min后，点按“高压平衡”，自动调节PMT负高压。11、吸入双蒸水，点按“调零”，使吸光度显示为零。12、测试：吸入样品，待读书稳定后读取样品元素吸光度。13、测试时，可适当调节“延迟时间”，使显示数值稳定。14、调节完毕，吸入双蒸水清洗原子化器15min，关闭主机“乙炔”开关，熄灭火 焰。关闭乙炔钢瓶开关，关闭空压机“工作开关”、“风机开关”。关闭主机“HCL” 开关、“power”开关。15、倒弃废液瓶废水，清洁仪器及实验室。实验十 气相色谱法测定牙膏中的薄荷醇含量（设计性实验）一实验目的熟悉气相色

50、谱分析样品前处理技术掌握气相色谱仪的使用掌握内标定量分析方法4掌握样品分析方法的建立5掌握分析方法验证的要求二实验内容牙膏中薄荷醇的提取、纯化；2内标法标准曲线的制作（含标准品溶液配制）；3方法可靠性验证：精密度实验、重现性实验、稳定性实验、回收率实验；样品含量测定。三实验安排实验分为资料查阅、实验方案设计讨论和分组实施四个阶段。5个学生为一组，在实验前查阅有关资料，确定实验内容的各个项目如何进 行，需要哪些实验材料和试剂；每组写出详细实验方案，由老师审核后，与老师讨论确定具体实施方案；按照讨论方案，一个实验小班内分成6组，分别完成实验方案的内容（6个 小组分工完成整个实验方法的建立和样品测试

51、）；实验报告：每个同学独立完成实验报告。实验讨论部分重点讨论本组实验的 内容。实验十一核磁共振波谱法测定有机物结构一、目的要求掌握核磁共振波谱法测定有机化合物的结构；掌握核磁共振波谱仪的使用方法；掌握核磁共振波谱图的解析方法。二、实验原理核磁共振波谱法是研究具有磁性质的原子核在外磁场作用下，吸收射频辐 射，发生原子核自旋能级跃迁(即发生共振)的方法，主要应用于有机物的结构 分析。原则上凡自旋量子数不为零的原子核均能测得NMR信号，但目前为止仅 限于1H、13C、19F、31P等原子核，其中氢谱和碳谱应用最为广泛。理论上，原子核要发生核磁共振现象，磁旋比丫，外磁场强度B 0变，射频频 率V。需满

52、足：实际上，原子核受周围不断运动着的电子影响。在外磁场作用下，运动着的 电子产生相对于外磁场方向相反的感应磁场，使原子核实际感受到的外磁场作用 减小。这种对抗外磁场的作用称为屏蔽效应。处于不同化学环境的原子核，核外 电子云密度不同，屏蔽效应不同，引起核磁共振信号位置的变化，称为化学位移， 用8表示。虹试样7标准v w* 吓器乂侦(ppm)此外，磁性核之间的相互作用(自旋耦合)使共振峰分裂成多重线(自旋裂 分)。自旋裂分的峰数目符合(n+1)规律(n为相邻氢核数)，裂分峰的强度之比 恰好等于二项式(a+b)n的展开式中的各项的系数和。三、实验仪器及试剂仪器:Thermo Picospin 45核

53、磁共振波谱仪，注射器试剂：有机样品，去离子水，丙酮四、实验步骤打开仪器及电脑；在电脑上打开IP地址：192.168.42.21；用去离子水进行自动匀场；注入样品，进行谱图测试。两个样品进样之间，需要用丙酮清洗毛细管；分析谱图。五、结果与分析对样品谱图进行分析，找出各峰归属。六、注意事项样品为固体时应充分溶解，避免堵塞毛细管；测试过程中防止液体外泄，损坏仪器。七、思考题NMR中化学位移是否随外磁场强度改变而改变，为什么？附：picoSpin 45型核磁共振波谱仪操作规程查看磁体温度：点击Temperature进入温度控制页面，查看温度是否稳定；自动匀场：点击右上角Run页面，点击scripts，显示Factory Scripts，选择 autoShim程序，注入自来水，点击start run，仪器开始进行匀场；信噪比测试：点击scripts进入search程序，进行信噪比测试，信噪比要求大 于1000方可进