包头医学院微生物学与微生物检验实验指导之实验3 空气中细菌的检测与消毒剂消毒效果评价

1、实验3 空气中细菌的检测与消毒剂消毒效果评价目的要求1.掌握沉降平板法的原理。2.掌握消毒效果的评价方法，了解常用消毒剂的使用范围和适用浓度。器材和试剂1培养基及试剂 普通营养琼脂培养基、50液态灭菌普通营养琼脂培养基、1：500的84消毒液、无菌生理盐水2其他 灭菌100ML三角烧瓶（含玻璃珠）、灭菌平皿、无菌1ml、10ml吸管、灭菌试管、消毒棉签、灭菌55空心规格板、火柴、蜡笔、试管架、喷雾器、酒精灯、恒温水浴箱。步骤和方法一、空气中细菌的检测1.沉降平板法的原理：利用微生物气溶胶粒子受重力作用沉降到敞开的营养琼脂平板上，对空气中细菌进行采样计数。2.方法：1）于室内四角及中央各放营养琼

2、脂平板（或血琼脂平板）一个，于同一时间揭开皿盖，暴露20分钟。置370C孵育24h。2）计数5各平板菌落总数并算出每立方米空气中所含细菌数。参考表1作出评价。 50000N每立方米空气中的细菌数= AtA:所用平皿面积（cm2）。T：暴露于空气的时间（分钟）。N：培养后，平皿上菌落数。表1 居室内空气卫生细菌学评价参考标准 夏季标准（个/m3） 冬季标准（个/m3）空气评价 细菌总数 绿色和溶血性链球菌 细菌总数 绿色和溶血性链球菌清洁空气 1500 16 4500 24污染空气 1500 36 7000 36 二、物体表面消毒及效果评价：1.消毒前的采样：选择可能被污染的对象（如桌面、墙面）

3、放上灭菌55空心规格板，取一支无菌棉签用生理盐水浸湿，在规格板的空心处，有顺序的涂擦，然后将棉签放入盛有25ml生理盐水的三角烧瓶中，制成原液，充分混匀，备用。 2.消毒后的采样：选择与消毒前污染程度差不多的部位，用装有84消毒液的喷雾器喷雾消毒，待干（20分钟左右），用上述同样方法采样，并制成原液备用。3.将消毒前后的样品用无菌生理盐水做1：10、1：100、1：1000、1：10000的倍比稀释4用无菌操作的方法取不同稀释度液体1ml注于直径90mm的无菌平皿，每个稀释度做两个平行样，做一个空白对照，然后加入已融化并冷却至50的营养琼脂15ml ,立即在平面上向同一方向平稳转动，使之混匀，

4、待凝固后翻转平板。1ml标本中活菌数=全平板cfu稀释倍数5.菌落计数方法：1）平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。记下各平板上的菌落数后，应求出同一稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。2）在求同一稀释度的平均数时，若其中一个平板有较大片状菌落时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。3）若片状菌落不足平板一半，而其余中菌落数分布均匀，则计数后乘2代表全平板菌落数，然后再求该稀释度的平均菌落数。6.不同稀释度平均菌落数的确认：1）应选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之（见表例1）。2）若有两个稀释度其生长之菌落数均在

5、30-300，则应视二者之比如何来决定，若其比值小于2，应报告平均数。 若其比值大于2则报告其中较小的数字（见表例2和3）。3）若所有平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表例4）。4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表例5）。5） 若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌 落数乘以稀释倍数报告之 （见表例6）。6）若所有稀释度的菌落数均不可计数，则以最高稀释倍数无法计数报告之（例7）。表2 稀释度选择及细菌总数报告方法例子 稀释液及

6、菌落数 相邻稀释度菌落数在 菌落总数 报告方式 10-1 10-2 10-3 30-300间的比值 （cfu/ml） （cfu/ml）1 1,365 164 20 16，400 16，000或1.6*1042 2,760 295 46 1.6 37，750 38，000或3.8*1043 2,890 271 60 2.2 27，100 27，000或2.7*1044 不可计 4，650 513 513，000 510，000或5.1*1055 27 11 5 270 270或2.7*1026 不可计 305 12 30，500 31，000或3.1*1047 不可计 不可计 不可计 10-3无法计数7)所有稀释度均未见菌落：则报告小于10，而不报告0.6.菌落数报告方式： = 1 * GB3 菌落数100时按实数报告，未见菌落数者报告为小于10. = 2 * GB3 菌落数100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，以四舍五入法计算，也用10的指数表示。 = 3 * GB3 在报告菌落数为“无法计数”时，应注明待检标本的稀释倍数。具体报告方式见表。根据消毒前后的菌落数，求出消毒前后细菌减