花粉生活力测定

1、湖北生物科技职业学院课 时 教 案讲授人张薇课 时学时序 号课题内容实训一花粉生活力的测定教学时间设计思路先讲后做，了解花粉生活力贮藏及生活力的测定方法和原理。教学目标知识目标：掌握花粉生活力测定的意义和测定方法能力目标：会进行花粉生活力的测定素质目标：培养学生的团队精神和动手能力教学重、难点 及解决办法教学重点：花粉生活力测定的原理和意义。解决办法：通过多媒体结合案例讲解后学生动手操作，教师指导。教学方法及手段演示、学做教学准备多媒体课件、植物花粉、载玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、干燥器、TTC教学过程及内容讲解花粉生活力测定的原理和方法实际操作蔗糖琼脂培养法和染色法教学过程教师活动学生活动教

2、案设计说明时间分配教学内容讲解实训原理演示实训过程， 布置实训任务观看多媒体结合实训过程讲 解20min教学内容指导实训蔗糖琼脂培养法学生练习思考90min教学内容指导实训染色法学生练习思考45min教学内容检查实训内容的掌握记录实训结果完成 实训报告25min教学反思湖北生物科技职业学院教案附页一、花粉生活力测定的意义在园艺植物有性杂交工作中，常因杂交亲本间花期不遇，或父本植株栽在异处（地）而必须预先收集花粉。花粉贮藏在低温（04C）、干燥（相对湿度040%）、黑暗的环境下，代谢降低，可以较长时间地保持花粉生活力，但其贮藏期长短对花粉生活力的影响因品种而不同。在授粉之前，对贮藏的或外地采来的

3、花粉必须预先测定花粉的生活力，以确定哪些花粉不能用于杂交，这对取得杂交效果有直接影响。二、实训材料及仪器药品园艺植物的雄花、载玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、干燥器、 TTC三、花粉生活力的测定方法.是将待测花粉直接授粉，然后统计结实率和结子数。此法的缺点是需时间较长，且实 验结果易受气候条件的影响；.是将待测粉受到柱头上，隔一定时间切下柱头， 在显微镜下检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生命力；.是在培养基上进行花粉的人工萌发，检查待测花粉萌发率的高低。将花粉播种在特定的培养基上，并在一定的环境条件下来测定其发芽能力的方法。培养基常用蔗糖、琼脂（1%）和蒸储水配制而成。不同植物的花

4、粉，对蔗糖浓度要求不同，一般柑桔花粉要求25%左右，苹果和梨1015%,桃10%左右为宜。蔗糖浓度高低可调节培养基的渗透压，以防止花粉 在培养基上破裂。 培养基以微酸性为宜，一般在pH5.26之间。发芽温度在2025 c左右，并需要空气和湿度，为了促进花粉发芽，在培养基中还可加入少量的硼酸和维生素B1。利用花粉发芽试验测定花粉生活力是一种直接的测定方法，其结果也最可靠，但操作较麻烦，要有一定设备和一定时间。.是用染色方法来鉴定花粉的生命力。其原理是在活的花粉内有过氧化氢酶存在。它可以促进过氧化物（如HO放氧分解。这些刚被放出的活性氧很容易使还原剂氧化。在本实验 中所用的无色联苯胺:-蔡酚都是还

5、原剂，但他们被氧化后却都表现红色或玫瑰红色。如果花粉是活的，那么这个反应很快，则花粉被染成红色或玫瑰红色；如果花粉是死的，则这一反映迟迟不能进行，花粉也就保持原色。此色优点是比较快捷，但比较间接。利用化学药剂染色的方法测定花粉生活力，这是一种间接的测定方法，简便而快速，但比较粗略，有时不能真实反映出有发芽力花粉的数量。四、实训步骤1.蔗糖琼脂培养法（1）培养基的配制：在100ml的蒸储水中，加入琼脂 1g、蔗糖1025g（因植物花粉种 类而异），置于烧杯中加热煮沸，然后将该烧杯置水浴锅或盛热水的杯中备用，以防培养基冷却凝固，适于羽衣甘蓝花粉萌发的蔗糖浓度为150g/L,硼对促进羽衣甘蓝花粉萌发

6、的作用最大，适宜的浓度为 20mg/L。(2)发芽床的设置和播撒花粉：在盖玻片上滴一滴培养基，用棉耳棒蘸上花粉少许，均匀撒于培养基表面， 但应防止花粉埋入培养基中而影响花粉发芽。播撒花粉后，要在显微镣下检查花粉是否分布均匀，再将载玻片置入用湿纱布或湿滤纸垫底以保湿的大培养皿中，盖上皿盖。在各载玻片上贴上标签，注明花粉种类、采集时间、蔗糖浓度、播粉时间和操作者，然后置于2528c的温箱中。(3)播花粉后的检查：在播花粉后，根据不同植物，经不同时间，在显微镣下检查花粉发芽情况。34h后检查，每次检查 3-5个视野，统计花粉总粒数和发芽粒数填写下表。(花粉发芽以其花粉管伸长超过花粉直径为标准)本实验

7、6人一小组，每人每个浓度制作一个玻片，每片观察5个视野，每视野约有100粒花粉，统计每种测定方法中具有生活力花粉的百分率，将观察结果记入下表。蔗糖浓度视野1视野2视里? 3视里? 4视野5花粉粒花粉粒花粉粒花粉粒花粉粒萌发数萌发数萌发数萌发数萌发数萌发率萌发率萌发率萌发率萌发率花粉粒花粉粒花粉粒花粉粒花粉粒萌发数萌发数萌发数萌发数萌发数萌发率萌发率萌发率萌发率萌发率发芽数发芽数发芽数发芽数发芽数萌发数萌发数萌发数萌发数萌发数萌发率萌发率萌发率萌发率萌发率发芽数发芽数发芽数发芽数发芽数萌发数萌发数萌发数萌发数萌发数萌发率萌发率萌发率萌发率萌发率2.染色法TTC法原理：凡具有生活力的花粉，在其呼吸

8、作用过程中都有氧化还原反应， 而尢生活力的花粉则尢此反也。因此，当 TTC渗入有生活力的花粉时，花粉中 的脱氢酶在催化去氢过程中与 TTC结合，便无色的TTC变成三苯基甲(TTF)而 呈红色。试液的配制I .磷酸盐缓冲液。在100ml的蒸储水中，溶解0.832g的Na2HP04 2H2O和 0.273g 的 KH 2PO4,调整 pH 值为 7.17。II .TTC溶液。称取0.020.05g的TTC ,溶解在10ml的磷酸盐缓冲溶液中， 放入棕色滴瓶内，置于暗处。TTC为有毒性物质，操作时应注意安全。出.步骤和方法。取少量花粉放在载玻片上，在花粉上滴 12滴的配制液， 用银子使其混合后，盖上

9、盖玻片。将此载玻片置于人工气候箱中（3540 C ）约1520min。在显微镜（100倍）下观察，凡具有生活力的花粉粒呈红色，其次呈淡 红色，失去生活力的和小育的花粉粒表现无色。过氧化物酶测定法原理：具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶，它能使过氧化物放出 活性氧，氧是在花粉萌发，进行许多综合反应时必需的，使各种多酚及芳香族胺 发生氧化而产生特定颜色。因此，通过对过氧化物酶测定后的呈色反应来间接判 断化粉后无生活力。试液的配制I . 0.20g联苯胺溶于100ml的50%酒精溶液中。n. 0.15g -接酚?于100ml的50%酒精溶液中。m. 0.25g碳酸纳溶于100ml的蒸储水中。以上三

10、种溶液分别放入棕色瓶中备用，使用时将这三种溶液等量配成试剂 A,放入棕色滴瓶中备用。使用前配制0.3% H2O2液为试剂B,装入棕色滴瓶中备用。步骤和方法：取花粉少量撒于载玻片上，加上试剂A和试剂B各一滴，用银子使花粉散开，盖上盖玻片，3-5min后置于显微值T观察。 被染色后呈红 色的花粉粒，则表示有过氧化物酶存在，花粉有生活力；能发芽，如呈黄色或 无色，则表示无生活力。本实验6人一小组，每人制片 3片，每片观察5个视野，每视野约有 100粒花粉，统 计每种测定方法中具有生活力花粉的百分率，将观察结果记入下表。玻片视野1视野2视里? 3视里? 4视野5花粉粒花粉粒花粉粒花粉粒花粉粒发芽数发芽数发芽数发芽数发芽数发芽率发芽率发芽率发芽率发芽率花