医学专题药敏试验简介

1、药敏试验简介卢先雷12021/7/20 星期二本节课程需要掌握的内容什么是药敏试验，什么时候需要做药敏试验即药敏试验的临床指征是什么？药敏试验方法学怎么做药敏试验结果的正确判读与解释怎么观察药敏结果的正确报告药敏试验的室内质量控制22021/7/20 星期二药敏试验的概念与适应征通过模拟体内环境条件，测试分离自病人体内感染部位的病原菌对常用抗生素的敏感性，即抗生素对目标细菌的抑制能力，从而预测抗生素治疗效果的一种体外试验方法。药敏试验适应征：分离菌是感染菌而不是定植菌或污染菌；常规经验治疗效果不佳或有较高失败风险时；对感染菌的耐药性无法估计时；需要了解微生物耐药性变迁时32021/7/20 星

2、期二药敏试验方法学纸片扩散法稀释法（MIC法）肉汤稀释法常量稀释法微量稀释法琼脂稀释法E-test法42021/7/20 星期二药敏试验方法学指南美国CLSIM2-A10 Disk Diffusion (2009)*M7-A8 MIC (2009)*M11-A7 Anaerobes (2007)M24-A Mycobacteria, Nocardiae, and Other Aerobic ActinomycetesM27-A2 Fungal MIC(2002)M44-A Funga Disk Diffusion(2004)M45-A Infrequently Isolated/Fastidi

3、ous Bacteria (2006) * M2, M7 updated every 3 years52021/7/20 星期二其他标准：法国CASFM标准； 梅里埃产品习惯采用的CLSI以外的标准英国BSAC标准； 欧洲应用比较广泛的标准德国DIN标准 .62021/7/20 星期二纸片扩散法原理一定药物含量的碟形抗生素纸片贴在涂布一定浓度菌液的琼脂上，过夜培养后抗生素扩散到纸片周围的琼脂中，形成一定浓度区域，越靠近纸片的浓度越高，反之越低；当低到一定程度（MIC以下）时药物无法抑制细菌的生长，从而形成界限分明的抑菌环通过抑菌环大小与MIC值高低之间的统计学分布关系，经过回归处理可以求出细菌

4、对某种抗生素的MIC折点范围对应的抑菌环大小值。由此可知，MIC与抑菌环大小之间存在负相关，。72021/7/20 星期二试验方法与条件CLSI推荐培养基：普通营养要求细菌使用水解酪蛋白琼脂（MHA）平板肺链使用含5%绵羊血的含血MHA嗜血杆菌使用HTM培养基淋球菌使用含1%生长因子（不含L-半胱氨酸）补充剂的GC培养基平皿大小：最小90mm，通常使用150mm平板琼脂厚度41mm菌液浓度0.5 McF（约1.5108CFU/ml）82021/7/20 星期二涂布方法：无菌棉签浸透菌液后稍微挤干，棉签与平板呈30左右的倾角密集左右来回涂布，完成一遍后旋转120后再涂，如此三次，最后绕边缘一次纸

5、片之间最佳间距30mm，不得低于25mm培养温度；35；重叠时不超过3个碟子气体环境：普通细菌大气环境；嗜血杆菌、淋球菌、肺链置CO2环境培养时间：18小时92021/7/20 星期二测量方法透射光葡萄球菌利奈唑胺苯唑西林万古霉素肠球菌万古霉素102021/7/20 星期二反射光测量其他细菌与药物时112021/7/20 星期二变形杆菌忽略环内的迁徙生长122021/7/20 星期二测量肉眼可见的明显抑菌区忽略环边缘的微弱生长132021/7/20 星期二环内生长现象大肠药敏，被肠球菌污染铜绿假单胞菌耐药亚群142021/7/20 星期二特殊处理方法当受测抑菌环与旁边的融合时，选择完整部分测量

6、当受测抑菌环部分变形时，选择正常部分测量152021/7/20 星期二扩散法药敏影响因素培养基pH值7.2-7.4营养程度（肠球菌能生长）厚度抗生素拮抗剂含量（用29212监控）钙镁离子含量、锌离子含量（用27853氨基糖苷类和亚胺配能结果监控）菌悬液浓度高抑菌环缩小浓度低则扩大细菌纯度气体环境普通细菌放CO2时由于碳酸的影响，药物活性受到影响，形成假敏感或假耐药苛养菌放普通环境生长不良，导致假敏感培养时间粘液性铜绿需48小时测量方法162021/7/20 星期二稀释法（MIC法）MIC法：分为常量法和微量法常量法：肉汤稀释法、琼脂稀释法微量法：微量肉汤稀释法简化双浓度折点法 ATB药敏简化常

7、规浓度分布MIC法 BD、德灵药敏动力学计算MIC法 VITEK32、VITEK2药敏172021/7/20 星期二试验方法与条件CLSI推荐培养基：普通营养要求细菌使用补充阳离子MH肉汤肺链使用含2%冻融马血的MH肉汤嗜血杆菌使用HTM肉汤厌氧菌和微需氧菌使用布氏肉汤淋病奈瑟菌推荐强化GC作琼脂稀释法菌液浓度（5104CFU/ml）：初始菌液0.5 McF（约1.5108CFU/ml）盐水稀释200倍，加入0.1ml菌液到含有0.1ml 双倍浓缩的MH肉汤的微孔板中（或预先用标准浓度的MH肉汤稀释后再加到微孔中）182021/7/20 星期二接种后应充分混匀，但不能有气泡产生静置培养培养温度

8、；35气体环境：所有细菌（包括苛养菌）均置大气环境；厌氧菌置厌氧环境；微需氧菌置微需氧环境；淋菌琼脂稀释法置CO2培养时间：18小时结果读取：见后面的幻灯：192021/7/20 星期二常量稀释法药敏试验的参考方法： 将标准接种物加入含対倍稀释抗生素的MH肉汤管中. 过夜培养. MIC 即是能抑制细菌生长的含最低抗生素的浓度的那一管所标示的浓度值(琼脂稀释法是将対倍稀释后的抗生素加入融化后平衡到50的MHA中再倾制平皿，接种物为一定大小的斑点，浓度也为104CFU/ml). 解释标准(S or R) 是建立在体内可达到的抗生素浓度水平上104 cfu/ml4210.50.250.120mg/m

9、l202021/7/20 星期二微量肉汤稀释法212021/7/20 星期二商品化药敏系统MicroScanSensititrePhoenixVitek 2 compact 222021/7/20 星期二微量肉汤稀释法结果读取技巧磺胺类药物容易出现弱生长，只要满足70%以上抑菌率即可视为未生长真菌药敏三唑类药物容易出现拖尾现象（即低浓度孔易出现弱生长），判读时以对照孔为参照，80%的抑菌率即可视为未生长大于三孔不同梯度浓度的抗生素测试中，出现的高浓度生长，而低浓度不生长现象叫跳孔。造成跳孔的主要原因，菌悬液乳化不充分，细菌分散不足，以及药敏卡某些孔被污染跳孔的解决方法：根据其他药理学特征类似的

10、抗生素的敏感性以及分析其他同类不同种抗生素的敏感性进行推断性修正修正低浓度耐药修正高浓度敏感232021/7/20 星期二肉汤稀释法注意事项生长缓慢微生物（形成肉眼可见生长1周）不适合用MIC法在肉汤中发育不良的微生物不适合用MIC粘液性铜绿假单胞菌只能用扩散法，48小时观察结果淋病奈瑟菌CLSI无肉汤稀释法药敏指南注意微弱生长导致的假敏感（结果需要修正）例如铜绿对磺胺、四环素、头孢噻肟/曲松鲍曼不动杆菌对氨曲南肺克、阴沟、变形杆菌对呋喃妥因242021/7/20 星期二稀释法药敏影响因素培养基pH值 7.2-7.4营养程度抗生素拮抗剂含量钙镁离子含量（钙10-25；镁10-12.5g/ml）

11、菌悬液（5104CFU/ml）接种效应浓度高MIC抬高浓度低MIC压低细菌纯度气体环境所有需氧细菌均放普通大气环境。如果放CO2，由于碳酸的影响，药物活性受到影响，形成假敏感或假耐药培养时间真菌需48小时奴卡菌需5天252021/7/20 星期二MIC 值标注于试条的光面Etest 试条毛面贴于MHA上262021/7/20 星期二Etest 操作程序按照扩散法标准操作涂布接种贴上试条并培养15-18小时读取抑菌浓度并按标准解释272021/7/20 星期二肺炎链球菌青霉素 MIC = 3 g/ml 结果读取282021/7/20 星期二292021/7/20 星期二药敏解释标准CLSI标准；

12、全球性每年更新非强制性学术机构FDA标准（全球标准）建立在CLSI基础上68年更新一次官方机构，标准带有强制性法国CASFM标准； 梅里埃产品习惯采用的CLSI以外的标准英国BSAC标准； 欧洲应用比较广泛的标准德国DIN标准 .302021/7/20 星期二CLSI药敏解释标准CLSI (Clinical Laboratory standard institution)药敏指南CLSI312021/7/20 星期二CLSI 药敏文件M100-S22 常见菌 (2012)*M11-A7 厌氧菌 (2007)M39-A3 积累抗菌谱(2009)M24-A 分枝杆菌, 奴卡菌, 以及其他需氧放线菌

13、M27-A2 酵母样真菌MIC法(2002)M44-A 真菌纸片扩散法(2004)M45-A 低频分离菌与苛养菌(2006) *M100 updated yearly322021/7/20 星期二M2 (纸片法操作方法)M7 (MIC法操作方法)M100（解释标准）作为共识标准即“参考方法”临床实验室通常这样使用使用CLSI 方法记录采用其他方法时使用CLSI做参照方法进行比对332021/7/20 星期二更新信息M2 表格 扩散法M7 表格MIC法附录词汇表I & II & IIICLSI M100 “表格” 内容抗生素的测试与报告S I R 折点质控M100 抗生素的测试与报告S I R

14、折点质控342021/7/20 星期二CLSI M100-S22 更新信息 352021/7/20 星期二CLSI M100-S22 Glossary I (Part 1)362021/7/20 星期二CLSI M100-S22 词汇表 I Part 1, 例如 抗生素类别抗生素亚类含盖的抗生素; 通用名青霉素类青霉素亚类青霉素青霉素酶稳定青霉素氯唑西林双氯西林甲氧西林萘夫西林苯唑西林372021/7/20 星期二CLSI M100-S22 词汇表 II 例如 抗生素类别抗生素缩写给药途径药物类别口服静脉滴注肌肉注射阿米卡星AN, AK, Ak, AMI, AMKXX氨基糖苷类氨苄西林AM,

15、Am, AMPXXX青霉素类382021/7/20 星期二我们应该如何测试和报告?CLSI M100-S22. Table 1A点击放大392021/7/20 星期二分组测试与选择性报告在做药敏时每组中不同类药物只选用一种抗生素用于测试，药理作用特殊者单独测试，这些抗生素称为代表药物。按CLSI规定，由FDA根据抗生素在临床实践中表现出来的安全性、有效性、和医学经济学原则将抗生素分为A,B,C三组。报告时按照ABC的次序进行报告。402021/7/20 星期二关于抗生素分组A组药物是首选药物，属于最经济有效，最安全的抗生素类别B组是在A组药物无效时，或者感染不单纯需要扩展微生物覆盖范围时选用的

16、药物，耐药性一般较A组药物低，但可能价格较贵或者安全性处于考察期内C组药物是A组和B组药物都耐药时需要选用的备用抗生素，通常用于治疗高耐药菌株和严重的复杂性感染。耐药性最低，但价格昂贵或者安全性差412021/7/20 星期二适合于治疗尿路感染的抗生素被归入U组可考虑选择性应用但其适应症或适用范围不属于常规报告范畴的抗生素归入O组处于考察过程中的某些新药和某些老药在扩展应用范围时归入Inv组422021/7/20 星期二关于代表药物微生物室选取用于测试和报告的抗生素是可以代表一类抗菌原理相同，抗菌效能相仿，抗菌谱基本一致，并且耐药机制相同的药物。即只需测试一种药物就可以推测出该类药物中其他几种

17、药物的敏感性。在根据药敏结果选用抗生素时只需选用效果相同的即可。432021/7/20 星期二关于代表药物需要注意：代表药物的代表作用只能针对同一类别的微生物，即位于表1A中同一框内的几个药物选取其中一个即可代表该类(或亚类)药物如果一类中有几个药物分别位于不同框中，则说明这几个药物抗菌活性或耐药谱有所不同，需要分别测试442021/7/20 星期二我们如何理解“选择性报告”?首先报告窄谱, 低毒性, 最便宜的药物如果有下列情况，则报告其他药物:对一线药物耐药时(A组药物)分离菌来自特殊部位病人对一线药物过敏或不耐受多种微生物感染混合感染 不同微生物导致的多部位感染 452021/7/20 星

18、期二铜绿假单胞菌头孢他啶 8 S 环丙沙星 1 S庆大霉素 2 S哌拉西林/他唑巴坦 16 S MIC (g/ml) 选择性报告例如选择性报告GroupBGroupB462021/7/20 星期二阿米卡星 8 S头孢他啶32 R 环丙沙星 1 S庆大霉素16 R亚胺配能 4 S哌拉西林/他唑巴坦 128 R妥布霉素16 R MIC (g/ml) 选择性报告选择性报告例如铜绿假单胞菌GroupBGroupBGroupB472021/7/20 星期二我们应该使用分级报告规则吗?是, 这个规则是经过国际医疗组织众多医务工作者一致通过的是, 这将有助于临床医生在开处方时，将范围集中于:窄谱抗生素低毒抗

19、生素廉价抗生素也许不是如果在我们所在的医疗机构中我们能有更好的办法激励临床医生“谨慎处方” 的话482021/7/20 星期二粘质沙雷菌氨苄西林R头孢唑林R头孢曲松S庆大霉素S亚胺配能R哌拉西林/他唑巴坦S复方新诺明S报告偶然发现的亚胺配能耐药现象(通常情况下，一般实验室在哌拉西林和头孢曲松测定敏感时，不会报告亚胺配能的结果（多数情况下该药是敏感的），但需要注意如果测定出耐药时，就必须报告) 例如：金属酶？修正为R修正为R492021/7/20 星期二CLSI M100 表 1的解读注意：“方框”的含义“或”字的含义 “警告” 评述的含义“Rx” 评述的含义认真阅读脚注叙述的内容502021/

20、7/20 星期二例如这张幻灯CLSI M100-S22. Table 1A512021/7/20 星期二No “or”“or”CLSI M100-S22. Table 1A522021/7/20 星期二表1对于分组测试与报告推荐药物表格的注释说明532021/7/20 星期二同一框中无“或”字相连, 例如: 铜绿假单胞菌亚胺配能美罗培能每个框中包含的多个药物 测试结果解释(S, I, R) 时类似临床疗效类似并且, 只需选择其中一种药物用于测试即可(当然所选的药物在你所在的机构应是恰当的)不能从一个药推导到另一个药CLSI M100-S22. Table 1A542021/7/20 星期二框中

21、有“或”字相连的，例如: 葡萄球菌阿奇霉素 “或”克拉霉素“ 或” 红霉素在一个框中各个药之间有“或”字相连 几乎具有完全相同的交叉耐药和交叉敏感临床疗效也是相同的可以从一个药推衍到另一个药CLSI M100-S22. Table 1A552021/7/20 星期二“或”字相连的应用实例例如: 葡萄球菌阿奇霉素 “或” 克拉霉素“或”红霉素CLSI M100-S22. Table 1A562021/7/20 星期二金黄色葡萄球菌 克林霉素S 红霉素R 苯唑西林S 青霉素R 万古霉素S “MLSb(+) 金黄色葡萄球菌克林霉素应修正为耐药耐药结果推衍实例推衍出阿奇霉素及克拉霉素耐药572021/

22、7/20 星期二金黄色葡萄球菌 克林霉素S 红霉素S 苯唑西林S 青霉素R 万古霉素S敏感结果推衍实例推衍出阿奇霉素及克拉霉素敏感582021/7/20 星期二CLSI “警告” 评述 有些药物或复合药物制剂测试结果为 “S” 但临床治疗无效 禁止根据测试结果就报告“敏感”592021/7/20 星期二体外测试敏感但体内无效的药物或药物复合制剂微生物沙门菌、志贺菌李斯特菌ESBL 阳性的肠杆菌禁止报告“S”一二代头孢头霉菌素氨基糖苷类所有头孢类氨曲南一二代头孢菌素三四代头孢修改折点的除外青霉素类CLSI M100-S22. Table 1A602021/7/20 星期二体外测试敏感但体内无效的

23、药物或药物复合制剂微生物 MRSA, MRCNS 肠球菌禁止报告“S”所有内酰胺类 头孢类 克林霉素 复方新诺明 氨基糖苷类 (高浓度除外)CLSI M100-S22. Table 1A612021/7/20 星期二“警告” 评述 举例“Warning: For oxacillin-resistant staphylococci (MRS), all penicillins, cephems, carbapenems, and other -lactams such as amoxicillin-clavulanic acid, ampicillin-sulbactam, ticarcilli

24、n-clavulanic acid, piperacillin-tazobactam, and imipenem may appear active in vitro but are not effective clinically. Results for these drugs should be reported as resistant or should not be reported. This is because most cases of documented MRS infections have responded poorly to -lactam therapy, o

25、r because convincing clinical data have yet to be presented that document clinical efficacy for these agents.警告：对于MRS而言，无论你在实验中测得的结果如何，所有内酰胺类在临床治疗中均是无活性的；应该报告所有的-内酰胺类药物耐药。因为在临床治疗观察中对MRS测试“敏感”的这类抗生素不是反应差就是无令人信服的数据证明其有效性。CLSI M100-S18622021/7/20 星期二观点的历史沿革与发展Oxacillin-resistant staphylococci are resis

26、tant to all currently available -lactam antimicrobial agents, with the exception of the newer cephalosporins with anti-MRSA activity. Thus, susceptibility or resistance to a wide array of -lactam antimicrobial agents may be deduced from testing only penicillin and either cefoxitin or oxacillin. Rout

27、ine testing of other penicillins, -lactam/-lactamase inhibitor combinations, cephems, or carbapenems is not advised. 苯唑西林耐药葡萄球菌（MRS）对除开新型的具有抗MRSA活性的头孢菌素之外的所有-内酰胺类均耐药；对众多内酰胺类抗生素而言，只需要通过检测青霉素，与苯唑西林或头孢西丁中的任意一个即可预测其他抗生素的敏感与耐药。无须常规测试其他青霉素类、头孢类、复合制剂、碳青霉烯类。CLSI M100-S22632021/7/20 星期二金黄色葡萄球菌头孢唑林 S R*克林霉素 R

28、 红霉素 R 苯唑西林 R 青霉素 R 万古霉素 S“警告” 举例642021/7/20 星期二分离自脑脊液中的菌株不要报告这里所例举的任意一种药物仅仅用于口服的药物一二代头孢菌素(头孢呋辛钠除外)头霉菌素类克林霉素大环内酯类四环素类氟喹诺酮类CLSI M100-S22. Table 1A652021/7/20 星期二尿液中的分离菌不要报告下列抗生素阿奇霉素氯霉素克拉霉素克林霉素红霉素报告CLSI M100-S22 Table 1A中位于U组的抗生素：例如， 呋喃妥因，等。CLSI M100-S22 这些药物不通过肾脏排泄，因而在尿液中达不到应有浓度，对感染的治疗无贡献662021/7/20

29、星期二CLSI “Rx” 评述 该处评述（或者修订评述）的建议是针对临床医生在处方过程中应该理解并注意的，微生物室应附在报告中提示医生672021/7/20 星期二Rx: 评述举例Rx: 利福平在抗菌治疗中不能单独应用CLSI M100-S22682021/7/20 星期二金黄色葡萄球菌克林霉素 R 红霉素 R 苯唑西林 R 青霉素 R利福平 S 万古霉素 S“Rx: 利福平在抗菌治疗中不能单独应用”“Rx” 举例692021/7/20 星期二CLSI M100-S22 Table 2A 解释标准(折点)例如：肠杆菌科细菌702021/7/20 星期二CLSI M100-S22 解释标准覆盖的

30、细菌类别肠杆菌科铜绿假单胞菌不动杆菌属洋葱伯克霍尔德菌嗜麦芽窄食单胞菌其他非肠道杆菌葡萄球菌属肠球菌属流感嗜血杆菌与副流感杆菌淋病奈瑟菌肺炎链球菌-溶血链球菌草绿色链球菌脑膜炎奈瑟菌厌氧菌712021/7/20 星期二不同细菌适用的药敏方法部分细菌同时具有扩散法标准和MIC标准，但具有扩散法标准的药物相对较少部分细菌（某些药物）只有MIC标准其他非肠道细菌所有药物葡萄球菌万古霉素、托达霉素肠球菌托达霉素肺链除苯唑西林以外的其他内酰胺类溶血链球菌除青霉素、氨苄青霉素、头孢吡肟、噻肟、曲松外的其他内酰胺类草绿色链球菌除头孢吡肟、噻肟、曲松外的其他内酰胺类厌氧菌所有药物淋菌只有扩散法和琼脂稀释法，无

31、肉汤稀释法标准722021/7/20 星期二表2中没有列举的抗生素或者目前为止尚无解释标准的抗生素. 毫无疑问这些都是不用测试的例如: 铜绿假单胞菌对头孢西丁，因为该药对铜绿是没有活性的732021/7/20 星期二只有“S” 无“I”或“R”药物的定义罕见CLSI M100-S22. 表2E，综合评述（7）.For some organism/antimicrobial agent combinations, the absence or rare occurrence of resistant strains precludes defining any results categorie

32、s other than “susceptible.” For strains yielding results suggestive of a “nonsusceptible” category, organism identification and antimicrobial susceptibility test results should be confirmed.对于某些细菌而言，某些抗生素敏感以外的结果是不存在或罕见的；当产生不敏感结果时，其鉴定或药敏结果应该经过其他途径确认742021/7/20 星期二 肺炎链球菌- 万古霉素 MIC (g/ml) 敏感 中介 耐药万古霉素

33、1.0 - - CLSI M100-S22. Table 2G*研究任何产生不敏感结果的菌株.重复鉴定药敏.保留菌株.送往参考实验室(用CLSI 标准MIC 法复核)752021/7/20 星期二CLSI M100 S22包含的其他信息特殊耐药机制检测方法推荐给药方案质控方案天然耐药谱不常见耐药表型介绍以及确认方法脆弱拟杆菌抗生素积累敏感性（统计）其他厌氧菌抗生素积累敏感性（统计）质量管理系统简介762021/7/20 星期二少见菌和苛养菌的特殊药敏参考方法：M45-A乏养菌与颗粒链菌稀释法嗜水气单胞菌复合群稀释法与扩散法弧菌属细菌（霍乱除外）稀释法与扩散法芽孢杆菌属（炭疽除外）稀释法空肠/大

34、肠弯曲菌稀释法与扩散法棒状杆菌稀释法（可用的药物标准比BSAC标准提供的多）Methods for Antimicrobial Dilution and Disk Susceptibility Testing of Infrequently Isolated or Fastidious Bacteria；Approved guideline772021/7/20 星期二猪红斑丹毒似菌稀释法HACEK组苛养性G-杆菌稀释法卡他莫拉菌稀释法产单核细胞李斯特菌稀释法巴斯德菌稀释法其他，如乳杆菌、片球菌、无色藻菌稀释法782021/7/20 星期二分枝杆菌, 奴卡菌, 以及其他需氧放线菌药敏参考方法：

35、M24-A结核分枝杆菌复合群比例法缓慢生长非结核分枝杆菌稀释法快速生长分枝杆菌稀释法奴卡菌等需氧放线菌稀释法Susceptibility Testing of Mycobacteria, Nocardiae, and Other Aerobic Actinomycetes; Approved Standard792021/7/20 星期二真菌药敏M27-A2用于酵母样真菌的稀释法药敏只有氟康唑、伊曲康唑和氟胞嘧啶有解释标准，其他药物的测试结果报告MIC M44-A用于酵母样真菌的扩散法药敏只有氟康唑有解释标准M38-P用于丝状真菌的稀释法药敏只有操作方法，报告MIC值，但无解释标准802021

36、/7/20 星期二药敏试验质量控制意义：保障药敏结果的可靠性准确性和精密度控制环节（重要的五大环节）：*质控1：人员操作能力质控2：菌液浓度（比浊）质控3：培养基质量质控4：药敏试剂（纸片或MIC试卡/板）、读取药敏结果的仪器设备*质控5：异常结果的发现与修正参照指南：CLSI文件812021/7/20 星期二*质控1：人员标准操作指南：扩散法参照CLSI-M2文件；MIC法参照M7文件考核内容：基本操作步骤的熟练程度结果的正确读取822021/7/20 星期二人员：操作步骤的熟练程度按照标准程序操作，能在15分钟内完成单个分离菌的药敏试验操作操作过程：菌落的挑取手法菌液的配制操作与菌液混匀操

37、作扩散法中菌液涂布操作MIC法中菌液的稀释操作仪器法中仪器的标准操作手法菌悬液纯度和浊度的验证性操作；832021/7/20 星期二人员：结果的正确读取抑菌环的正确测量忽略边缘的微弱生长环内生长的检测污染菌的发现或耐药亚群的分离确认MIC值的正确读取包括跳孔现象的发现与纠正微弱生长孔的发现与结果修正（磺胺、四环、氯霉素、氨曲南）拖尾现象的正确忽略（磺胺、真菌）生长不良的确认与补救措施（重做、延长）842021/7/20 星期二质控2：菌液浊度控制目测法控制内容：主要是0.5McF浊度的感知能力参照物：0.5 McF硫酸钡比浊管，对应1.5108 CFU/ml 参考方法：菌液稀释后菌落计数法允许

38、误差：1.5107 1.5109 CFU/ml 仪器法控制内容：同上校准品：0.54 McF硫酸钡比浊管参考方法：同上允许误差：同上852021/7/20 星期二质控3：MH培养基质量控制pH值 7.2-7.4营养程度：不加血的情况下就能支持ATCC 29212的生长 抗生素拮抗剂含量：使用ATCC 29212监测，扩散法有抑菌环出现，并且环内只允许微量小菌落出现；MIC法抑菌率80%钙镁离子含量：钙10-25、镁10-12.5g/ml锌离子含量：ATCC27853亚胺配能结果在允许范围内862021/7/20 星期二质控4：药敏试剂质控CLSI提供扩散法和稀释法的质控标准扩散法标准适合于纸片扩散法稀释法标准适合于微量肉汤稀释法、琼脂稀释法，以及E-test法内容标准菌株质控频率各种药物的控制范围872021/7/20 星期二扩散法质控菌株非苛养菌：肠杆菌科ATCC 25922 大肠；非发酵菌27853 铜绿；葡萄球菌25923 金葡；加酶抑制剂抗生素质控35218 产ESBL大肠苛养菌：嗜血杆菌49247 流感，49766 流感用于补充，弥补49247某些不能检测的药物；淋菌用49226；肺链用49619882021/7