《基因工程》专题复习总结

1、专题1基因工程知识体系构建限制性核酸内切酶DNA连接磨载体一基本工具目的基因的获取基因表达载体丽雨一将目的基因 导人受体细胞操作程序基本操作基因工程应 用基因诊断基因治疗土蛋白质工程馒白质工程的概念和原理一提高酶的热稳定性 一医药生产目的基因的构测与鉴定专题整合一、基因工程的基本工具限制酶DNA连接酶载体作用切割目的基因和载体连接DNA片段，形成重组DNA携带目的基因进入受体细胞作用部位两核甘酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二酯键作用特点（条件）（1）识别特定的核 甘酸序列；（2）在 特定位点上切割（1） E coli DNA 连接酶只连接黏性 末端；（2） T4DNA 连接酶连接黏性末端和平末

2、端（1）能在宿主细胞 内稳定存在并大量 复制；（2）有多个 限制酶切割位点； （3）具有特殊的标 记基因常用类型EcoR I限制酶SmaI限制酶E coliDNA连接酶T4DNA连接酶质粒、噬菌体、动 植物病毒【训练1下列有关基因工程技术的正确叙述是（）A.重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶、载体B.为育成抗除草剂的作物新品种，导入抗除草剂基因时只能以受精卵为受体细 胞C.选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快D.只要目的基因进入了受体细胞就能成功表达二、基因工程的操作程序.目的基因的获取(1)目的基因：指编码蛋白质的结构基因。(2)获取方法：从基因文库获取，原核基因也可直接分

3、离获得；真核基因主要 是人工合成，人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。.基因表达载体的构建(1)目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。(2)组成：启动子+目的基因+标记基因+终止子。启动子：是一段有特殊结构的 DNA片段，位于基因的首端，是 RNA聚合酶 识别和结合的部位，能驱动基因转录出 mRNA,最终获得所需要的蛋白质。终止子：也是一段有特殊结构的 DNA片段，位于基因的尾端。标记基因的作用：鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因 的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素抗性基因。.将目的基因导入受体细胞生物种类植

4、物细胞动物细胞微生物细胞常用方法农杆菌转化法显微注射技术Ca2+处理法受体细胞体细胞受精卵原核细胞转化过程将目的基因插入Ti质 粒TDNA上一农杆 菌一导入植物细胞一 整合到受体细胞的DNA表达将含有目的基因的表 达载体提纯一取卵 (受精卵)一显微注射一支相卵发目一犹 得具后新性状的动物Ca2+处理细胞一微生 物细胞壁的通透性增 加一重组质粒与感受 态细胞混合一感受态 细胞吸收DNA分子4.目的基因的检测和表达步骤检测内容方法结果DNA分子杂交(DNA是否分子检测第f目的基因是否进入受体细胞成功和DNA之间)第二步目的基因是否转录出信使分子杂交技术(DNA显示RNA和RNA之间） 出杂第三步目

5、的基因是否翻译出蛋白质一 抗原一抗体杂交方法交带个体水 包括抗虫、抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性的程度；基因平检测工程产品与天然产品的活性比较，以确定功能是否相同等【训练2 正确表示基因操作 四步曲”的是（）A.提取目的基因一目的基因导入受体细胞 一目的基因与载体结合 一目的基因的 检测与鉴定B.目的基因的检测与鉴定 一提取目的基因一目的基因与载体结合 一目的基因导 入受体细胞C.提取目的基因一目的基因与载体结合 一目的基因导入受体细胞 一目的基因的 检测与鉴定D.目的基因与载体结合 一提取目的基因一目的基因导入受体细胞 一目的基因的 检测与鉴定、蛋白质工程中心法则*生物功能预期功能

6、1.蛋白质工程流程2.蛋白质工程与基因工程的区别：蛋白质工程的本质是通过改造基因进而形成 自然界不存在的蛋白质，所以被形象地称为第二代基因工程；基因工程在原则 上只能生产自然界已存在的蛋白质。【训练3利用蛋白质工程改造天然蛋白质，进而改变其功能，可获得毒副作用 减小，专一性、药效和稳定性都增强的理想的药物。如胰岛素是治疗依赖型糖 尿病的特效药物，但是天然胰岛素在人体内寿命只有几小时，重症病人每天得 注射好几次药物，给病人增加了不便和痛苦。通过蛋白质工程改变胰岛素的空 间结构，以延长胰岛素的半衰期，得到长效胰岛素；还可以在不改变胰岛素活 性部位结构的前提下，增强其他部位结合强度，使之难以被酶破坏

7、，从而增强 其稳定性。（1）若要批量生产以上提到的长效胰岛素，根据所学知识，需要用到哪些生物 工程（）A.发酵工程B.基因工程C.蛋白质工程D.胚胎工程（2） 用蛋白质工程生产 的胰岛素， 与天然胰岛素比较， 显著的优点是.C A 项中的载体不是酶； B 项中的受体细胞常用受精卵，但有时也可用植物体细胞； D 项中，目的基因进入受体细胞并不一定能成功表达。 .C基因操作“四步曲 ”包括提取目的基因、目的基因与载体结合、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。提取目的基因和目的基因与载体结合，要用同一种限制酶切割 DNA 片段和质粒。目的基因导入受体细胞，要用CaCl2 （细菌）改变细胞膜通透性，用到显微注射等技术。目的基因的检测与鉴定，是检测载体标记基因的表达和目的基因的表达。 .（ 1） ABC