纤维素分解菌的分离培养

1、纤维素分解菌的分离培养来源： 添加时间：2010-1-22 9:50:00纤维素是组成植物细胞壁的主要成分，是地球上存在量最为丰富的有机物。它性状比较稳定， 不易分解。因此，它是一类数量庞大的环境污染物，同时又是一项可开发利用的宝贵资源， 它的综合利用具有广阔前景。自然界有一部分细菌、放线菌和真菌能诱导产生纤维素酶，进 行纤维素的分解。能分解纤维素的好氧细菌主要有：噬纤维黏菌属(Cytophaga)、生饱噬纤维黏菌属(Sporocytophaga)、纤维弧菌属(Cellvibrio)，分解纤维素的厌氧细菌有：奥氏梭菌(Clostridium omelianski)、高温溶纤维梭菌(C. The

2、rmocelluloseum)等。真菌中主要有以下属的一些种：木霉(Trichoderma)、葡萄状穗霉(Stachybotrys)、葡萄饱霉(Botrytis)、曲霉(Aspergillus)、青霉(Penicillium)、毛壳霉、好热霉(Thermomyces)。放线菌的诺卡氏菌属(Nocardia)、链霉菌属(Streptomyces)、小单胞菌属(Micromono spora)中也都有一些能分解纤维素的种。(1)好气性纤维素分解菌的分离分离源草地表层土壤、堆腐烂植物体、湖水等可作为好气性纤维素分解菌的分离源培养基Dubos纤维素培养基:NaNO30.5gK2HPO41gFe2(SO

3、4)3 7H2O微量H2O1000mLMgSO47H 2O0.5gpH7.5KCl0.5g滤纸剪成小条，放入试管中，使略露出液面.Hutchison 培养基：KH2PO41gFeCl30.01gMgSO47H 2O0.3gNaNO32.5gCaCl20.1gH2O1000mLNaCl0.1gpH7.2 7.4若制平板，加琼脂1820g，121C，灭菌15分钟.操作方法将采取的待分离样品，用无菌水制成10-110-3不同稀释度的悬液。用无菌移液管吸取上述样品悬液，接种于装有10mL Dubos纤维素培养基的试管内置于2527C条件下培养。每天观察培养管内的变化，注意液面附近的滤纸变薄或出现斑点。

4、如果分解旺盛甚至可见滤 纸条被完全切断。将无菌的Hutchison培养基融化，注入灭菌培养皿内，制成平板。把上述试管内正在破 碎的滤纸适当稀释制成悬液，吸取0.5mL接入平板上，用玻璃推棒涂布均匀，再在琼脂表面覆盖 一张无菌滤纸，用玻璃棒（或玻璃刮刀）压平，使滤纸紧贴在琼脂表面。把上述平板置于底部盛水的干燥器隔板上，2830C，培养710天。纯化分离用接种环挑取滤纸上的菌落，在含0.1%葡萄糖（过滤除菌）的赫氏平板上划线分离。重复 数次，直至分纯。将滤纸剪成小片，灭菌后放到无碳源的赫氏培养基平板上。把在葡萄糖赫氏平板上生长 的菌落，移接到滤纸片上，并在皿底相对应地编号。经培养后确认分解滤纸的菌

5、种，从相应的葡 萄糖赫氏平板上移接到赫氏液体培养基（不加琼脂）的滤纸条上保存。厌气性纤维素分解菌的分离磷酸铵钠培养基配方如下：Na(NH )HPO442gCaCO35gKH2PO41gCaCl2 6H2O0.3gMgSO4 7H2O0.5g蛋白胨1gHO1000mL取1g 土壤（或稀释到10-2的菌悬液1mL ），接种到已灭菌的磷酸铵钠培养基中，2830C， 严格厌氧培养。培养2周左右，滤纸溶解后，再重复移殖34次，或取滤纸上生长的斑点，黄 色部分，经稀释后在平板上涂布分离。2分装试管，液层要较高，以利于深层培养。同时，插入滤纸条，一端露出液面。121C灭菌 20分钟。注意：滤纸使用前必须检查

6、是否有淀粉。可在滤纸上滴加稀碘液，如显兰色，示有淀粉存 在。则可用1%稀醋酸浸泡一昼夜，用碘液检查确认无淀粉后，再用2%苏打水冲洗至中性，干热 灭菌后备用。纤维素分解菌培养基培养基1 （ g/L）：KH2PO4 1.00 ； MgSO4 0.3 ； NaCl 0. 1； NaNO3 2.5 ； CaCl2 - 6H2O 0. 1 ； FeCl3 0. 01 ；稻草粉 20； pH 自然。培养基2 ( g/L)：尿素 5.00 ； KH2PO4 1.00 ； K2HPO4 1.00 ； FeSO4 - 7H2O 0.05 ； MnSO4 - H2O0.02 ； MgSO4 - 7H2O 0.5 ；酵母浸出液 0.2 ；稻草秆 20 ；pH=