临床血液学检验第3讲细胞化学染色

1、 细胞化学染色概述一.铁染色（Fe）二.中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）三.过氧化物酶染色（POX）四.苏丹黑染色（SBB）五.过碘酸雪夫反应（PAS，糖原染色）六.酯酶染色概述 1.细胞化学染色定义： 根据细胞化学原理显示、观察、研究细胞内酶类及其他化学成份的方法。 2.显示内容： 酶类、脂类、糖类、蛋白质、核酸、铁元素 3.目的与作用：区分细胞（两种性质完全不同的原始细胞，形态极其相似）进行细胞化学染色后，差别出现3.目的与作用（1）鉴别细胞：POX、PAS、SB、酯酶染色（2）鉴别疾病：Fe，NAP，需定量（3）观察疗效4.染色步骤保持细胞结构及化学成分不变蒸汽固定：甲醛液体固定：甲醛

2、、甲醇、乙醇、丙酮形成稳定的有色沉淀，显示被检物质增加反差，便于观察一、铁染色原理：普鲁士蓝反应酸性环境下：Fe+ + K4Fe（CN）6Fe4Fe（CN）63 含铁物质 亚铁氰化钾 亚铁氰化铁（蓝绿色）观察幼红细胞内、髓小粒上和吞噬细胞内有无蓝绿色颗粒或小块。染色结果：1.细胞外铁：体内贮备铁的形式，实质是铁蛋白或其聚合体，髓小粒上的颗粒状、小珠状、团块状兰绿色物质，也可在吞噬细胞内。反映铁储存情况细胞外铁（左：髓小粒贮存铁，右：巨噬细胞吞噬）细胞外铁半定量：无（）弥散状（）颗粒状（ ）小珠状（ ）团块状（ ）2.铁粒幼红细胞（细胞内铁）：幼红细胞浆内有兰绿色颗粒反映铁利用情况3.环形铁粒幼

3、红细胞（1）幼红细胞内（2）6个以上铁颗粒（3）绕核排列半周以上4.铁粒红细胞含铁颗粒的成熟红细胞细胞内铁分级幼红细胞内的铁，计数100个幼红细胞，记录浆内有兰绿颗粒的阳性细胞百分率。型：12个铁颗粒型：35个铁颗粒型：610个铁颗粒型：含11个颗粒以上环形铁粒幼红细胞正常参考值：外铁：（+）（+）内铁：铁粒幼红细胞19%44%，型多见，少数型。无环铁和铁粒红细胞。临床意义1.IDA：外铁（），内铁明显减少或无2.铁粒贫：内铁增多，颗粒大，环铁增多3.MDS-RAS：类似于铁粒幼细胞性贫血4.感染、肝硬化、慢性肾炎等继发性贫血：内铁减少或无，外铁不减少二.中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）成熟

4、中性粒细胞特异性颗粒内的一种酶。1.偶氮耦联法原理：Ph9.29.8时，NAP水解 重氮盐 磷酸萘酚钠 萘酚 有色沉淀 偶氮耦联法阳性结果2.钙钴法原理： Ph9.6时， NAP水解 Ca+ CO+ -甘油磷酸钠 PO43 磷酸钙 磷酸钴+硫化铵 COS（棕黑色、灰黑色）正常反应细胞ALP仅存在于中性杆状核、分叶核粒细胞和巨噬细胞内，其余细胞（）。定量：只计算中性杆状核、分叶核粒细胞的ALP相应含量，称NAP定量。定量方法：油镜计数100个中性杆、分叶核粒细胞，分别记录分级情况，最后计算阳性率和积分。反应分级特征得分个数积分无灰黑色0100+1/4灰黑或浆浅灰12020+1/2灰黑或浆灰色24

5、080+充满灰黑色32060+充满黑块41040阳性率：90%总积分：200NAP阳性级别NAP积分参考值：资料1：男性成人： 阳性率：3%50%，积分：373分女性成人： 阳性率：15%70%，积分：17145分资料2：NAP积分参考范围：14113分各实验室应有自己的参考值。临床意义：1.鉴别感染类型 NAP活性与粒细胞的成熟程度、感染程度、感染类型有关，与肾上腺皮质激素水平有关。细菌感染：NAP，球菌杆菌，急性 慢性病毒感染：无变化或减低2.血液病鉴别：（1）急性白血病：ALL：急粒：，伴细菌感染可 急单：一般，也可正常 （2）慢性白血病： CLL： CML：0分 （3）白血病愈后： A

6、LL、CLL好转：，缓解后正常 CML好转：，缓解正常血液病鉴别：(4). 常见疾病鉴别(1)PNH，AA(2)真红，继发性红细胞增多：无变化(3)类白反应，CML降低(4)恶性组织细胞病，反应性组织细胞增多(5).存在生理性波动（1）年龄：婴儿、儿童高，老年人低（2）性别：成年女性高于男性，经期和妊娠期高（3）应激状态：增高三.过氧化物酶染色（POX）原理：细胞溶酶体颗粒中POX能使供氢体“无色联苯胺”脱氢氧化为联苯胺蓝，同时氢传递给H2O2生成水，联苯胺蓝与“亚硝基铁氰化钠”进一步结合生成更稳定的蓝绿色物质沉淀于酶活性部位。POX染色阳性效果正常细胞反应1.粒细胞：原粒早幼粒中性中幼粒中性

7、分叶核 嗜酸粒 嗜碱粒(-、+) （+） （+） （+） （+）颗粒多，粗 （-）2.单核细胞：原单 幼单 成熟单 （） （） （）颗粒稀疏，量少3.淋巴细胞、幼红、巨核细胞、血小板、浆细胞均（）原始粒细胞POX染色：阳性早幼粒细胞POX：强阳性单核细胞POX：阴性或弱阳性淋巴细胞POX阴性临床意义：急性白血病类型鉴别急粒白血病：原粒，小原粒（+），早幼粒(+)急淋白血病：原、幼淋（）急单白血病：原、幼单（）或（）组织细胞白血病、恶性组织细胞增多症：（）恶性组织细胞POX：阴性四.苏丹黑染色（Sudan Black B）原理：SBB是一种脂溶性染料，能溶解于细胞内含脂结构，而使脂类物质（中性脂

8、肪、磷脂、类固醇）显示出来，呈棕黑色或深黑色。正常反应细胞：同POX 个别淋巴细胞也可呈阳性反应。临床意义： 基本同POX 敏感度高于POX 适于陈旧涂片的补救SB染色效果五.过碘酸-雪夫反应（PAS）又称糖原染色原理：过碘酸是强氧化剂，能将胞浆内的多糖类物质的乙二醇基氧化形成双醛基，醛基与无色品红结合形成紫红色化合物定位在胞浆内。PAS染色效果正常反应细胞11粒细胞：原粒早幼粒中性中幼粒中性分叶核 （ +） （+） （+） （+） 特征：弥散状紫红色 嗜酸粒：颗粒（），浆红色嗜碱粒：颗粒（+），大小不一的紫红色，浆不着色2单核细胞：原单幼单成熟单 （） （+） （+） 特征：弥散状紫红色3淋

9、巴细胞：大多数（），少数呈（+） 特征：粗颗粒状或块状紫红色4.幼红细胞、成红细胞：（）5.巨核细胞：（+）颗粒状、块状紫红色 血小板：（+）细颗粒或小块状紫红色6.浆细胞： （），少数（+）颗粒状7.巨噬细胞：（+）细颗粒状粒细胞和淋巴细胞的PAS染色巨核、网状、成骨、破骨的PAS临床意义：1.白血病的鉴别 急淋：淋巴细胞：粗颗粒或块状阳性，机会较多 急粒：原、早粒细胞：红色弥散状阳性 急单：原、幼单细胞：红色弥散状阳性2.红系统的恶性疾病红血病、红白血病、MDS的幼红细胞内可见块状或大块状阳性。ALL淋巴细胞POX、PASALL淋巴细胞POX、PASM6的红细胞的PAS染色六.酯酶染色法血

10、细胞含有多种酯酶及其同功酶。根据反应时pH不同分为酸性、中性和碱性酯酶。根据鉴别细胞的特异性程度分为特异性酯酶和非特异性酯酶。1.特异性酯酶氯醋酸AS-D萘酚酯酶染色法(AS-D NCE) 2.非特异性酯酶中性-醋酸萘酚酯酶染色法(-NAE) 1.氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色法(AS-D NCE)原理：细胞浆内AS-D NCE水解氯乙酸AS-D萘酚，产生的AS-D萘酚与偶氮染料坚牢蓝紫酱GBC结合产生红色不溶性沉淀，定位于酶所在部位。2.-醋酸萘酚酯酶染色（-NAE）原理：细胞浆内-NAE水解-醋酸萘酚，产生的-萘酚与坚牢蓝B结合生成灰黑或棕黑沉淀，定位在酶部位。NaF抑制试验：-NAE属同工酶，单核细胞内的酶活性可被NaF抑制。NAE和NAENaF的染色效果正常反应细胞AS-D NCE-NAE粒细胞酯酶单核细胞酯酶 原粒 早幼粒中性分叶（、+） （+） （+）E:阴性、弱阳性B:阳性原单 幼单 成熟单（、+） （+） （+） NaF可抑制单核细胞：（）淋巴、浆、巨核、幼红、血小板均（）肥大细胞：阳性粒、淋：（、+） 巨核、血小板（+）幼红：大多(-)，少数(+)浆细胞：（）NaF不可抑制单核细胞的NAE一例单核细胞白血病的POX和NAE染色几种NAE阳性细胞酯酶