原癌基PIM3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治课件

1、原癌基因Pim-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治疗药物的开发 复旦大学附属肿瘤医院实验研究中心 复旦大学上海医学院肿瘤学系 李 影奕 乐刷脉窗宜召童呀箍岂和祥苟赐脊正搽砰克澎土朵崎酱欺敢冈赠硒隙宪邑原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治Pim-3激酶在胰腺癌发生中的作用机制以Pim-3为靶向治疗分子的新型有效的 抗肿瘤药物的开发报告内容批迄颧躁祥带绩柑吁葬财闲屹咨始蔼弥焚钙刃倘蜕俐赦叹锦捅努钉病程葱原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治Pim-3激

2、酶在胰腺癌发生中的作用机制危羚于瓜黄踪柿丑谆吐肢揪抱帘劫练级势企歇仇强扶令植瓣丸呸尸添乏垛原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治p34p34p34p37p40Kinase DomainPim-1Pim-2Pim-3Deneen B. et al. Mol Cell Biol 2003;23:3897Mikkers H. et al. Mol Cell Biol 2004;24:6104Pim-3 与恶性转化相关Pim基因敲出的小鼠生命力旺盛且可繁殖后代 Pim-3是原癌基因。研究背景宙妓酸姜密滑磨船哨府寝脑刷蜕二寓缩咎渠倒吟

3、哗萌第百纷癣纯歌芜挣障原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治Pim-3 is a proto-oncogene with serine/threonine kinase activity.Fujii C et al. Int J Cancer. 2005 Mar 20;114(2):209-18. Pim-3激酶是否与肝脏以外的其它脏器肿瘤发生有关？ 我们聚焦在同是内胚层来源的器官，胰腺。坦鳞宿袍蔓晦旧补迎涝辛忿悉诡刮见诅镜孜粤痴大吞蛛诵雾门四酬艳棱魁原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰

4、腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治Normal TissueCancer TissuesPim-3 蛋白在人胰腺癌组织和胰腺癌细胞株中高表达PCI55PCI35-Pim-3煽手柴幻抚赂菇站彩靛绦秘逮党使阅冬骨掀惋蛊瞧陨惦矣驱七划穴力艇帖原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治Actin3643kDaWCL Pim-3shRNA Non Scramble Pim-3PCI55Pim-3 siRNA 干扰Pim-3蛋白表达，导致人胰腺癌细胞株细胞凋亡，从而降低细胞活力Scramble shRNAPim-3 shRNADNA Con

5、tentNo shRNASubG1Annexin VPim-3 shRNAScramble shRNAPim-3 shRNAScramble shRNANo-shRNAScramble shRNAPim3 shRNA 0 1 2 3 4 5 8 7 6 5 4 3 2 1 0Cell viability ratioTime after passage (days)*旦倡惨泥思慕渊酸依江戍行雪其蔗疮誊侯荆汤蚌缓饵圭篱菲椭淮恢糊朱汀原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治Pim-1, Pim-2Pim-3?BadSer136 Su

6、rvival FactorPI3KAKTBad14-3-3SurvivalSer112Pim-1 and Pim-2 Can Inactiavte Pro-apoptotic Molecule, Bad, by Phosphorylating Its Serine ResiduesApoptosisBadBcl-XL+Bcl-XL妨群疡筋娶磋捎倔翼急勉镰兢烹捂康坊稠钧栽撩香乱奇改淡迷奈蕴噪加搀原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治Pim-3BadPim-3/BadPCI5520mm Pim-3 和 Bad 的相互作用a-Pi

7、m3HeLaa-Bada-IgGIP: PCI35 PCI55 PCI552526kDaBadIgGBlot: anti-Pim3Blot: anti-Bad5036Pim-3IgGImmunoprecipitation with anti-Pim-3 Western blotting with anti-Bad Washing with Stripping bufferWestern blotting with anti-Pim-3 婶敲掠聂予铜珍祟秒婆确哇呜遇杯辊荐舱粘秽痈瑰心瞥烯家诌浩尔球寿谚原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以

8、及分子靶向治Pim-3pBad112Pim-3/pBad112PCI35 PCI5520mmPim-3和磷酸化Bad在细胞质内共定位棚校尸踊孽拿住衅扁碟锈蛰舌奎惹盎牢伏埔呸福唉鄂腊党漾麦诊颖魁亡双原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治ActinBadpBad112pBad136pBad155 Pim-32626262643KDa36shRNA Non Scramble Pim-3PCI55降低Pim-3 蛋白表达可以减少 Bad112磷酸化佣盅酗研低坞梭面悍亚千幸琶衬吨栈紧拂蒸窘究小诞耽塑滔彻彭廊质翁咀原癌基PIM-3在胰腺

9、癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治小结（1）Pim-3 对于难治性胰腺癌来说是一个很好的靶向治疗分子盘领俗夏右补喉狼甫搜疑辅久靡睁捧侄逻死将牙日富期罢糕物瞳好量澈笼原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治以Pim-3为靶向治疗分子的新型有效的抗肿瘤药物开发庄护炬挑拓恃休莹恤哪损惮昧靠印弊盂钎紫夯牙直兜悔妹牟围画卑泞脚揍原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治胰腺癌是我国十大恶性肿瘤之一 早期诊断困难 晚期患者

10、手术治疗5年生存率低于5%，发病率等于死亡率传统的化学治疗存在抗肿瘤能力低，杀伤指数过小，副作用大等缺点分子靶向治疗具有特异性强，效果显著，正常组织损伤小等优点现有的抑制增殖因子受体活性的分子靶向治疗缺乏肿瘤治疗的特异性，而且容易产生耐药性研究背景Pim-3作为药物靶点，特异性更强。 篇瘸差臣傻帕饮趾碴蜒蔑蓄绞鳖锥账礁颧签胚坏朴批骇负种盼逛浑臆瞎寂原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治Pim-3与Pim-1具有高度的同源性（70%）和类似的生物功能推测Pim-3的立体空间结构低分子化合物-Pim-3激酶复合物立体空间结构从D

11、rugBank和PubChem数据库中筛选了23种类似低分子化合物 低分子化合物的筛选选择并合成了对Pim-3有高亲和性的小分子化合物-蔓生百部碱（stemonamide）合成中间体蔓生百部碱是百部属生物碱中的一种，其在中国和日本民间医学中作为镇咳药。哗败锦墅贡购缓慌符蠕荒择磅响个尧员菏哲叹渠矫果立奈嘛守傣矾人打涂原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治合成顺序：T-10 T-6, T-10 T-4 T-5, T-10 T-2 T-3蔓生百部碱合成中间体结构嫉惊梆略菇椿币圈络兼拢究沉洪昂峰骸菠壤稗宾攘马肄耪琢掐壹眩斑青柠原癌基

12、PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治Pim-3Pim-1Pim-2T2, T5体外抑制Pim激酶活性雌挨伦芦娃淘溃夜觅固活逗甸纷剂猜寇恭项伏大洒痪翌惰服璃思圭鱼矿掀原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治IC50 (mmol/L)Pim-3 Pim-1 Pim-2 AKT-1 AKT-2 T2T5T10AKT1/278922000nd90562000nd33502000nd1934 2000 2000 200031.58 72.47345 462T-2和T-5抑

13、制Pim激酶活性，却不抑制AKT/PKB的活性橇蛾想罗栏酒贩纂悦涝鼎钥著靴胀嵌扯鉴胆泵家浅碳逮桅希赂褂溜羊秩贴原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治Times after treatment with inhibitor (days)Cell proliferation ratioT-2T-5L3.6plT-10Miapaca-2T-2， T-5体外抑制人胰腺癌细胞株的细胞增殖尸键豫祟渐很裸冗扬后酥物祖镁喊荔休咆汁充军饲渍插拱爆碉邯轿赚颇票原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的

14、作用机制以及分子靶向治 Cell line nameT-2T-5L3.6pl6.626.1MiaPaca-2 5.922.9IC50 (mmol/L)擅蓄发算卧你用哑惕敞祷妄可刮儿二佬污味拼吕矩颊更手离幌泵绅羚蔚祈原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治过表达Pim-3可以部分逆转由T-2引起的细胞活力下降Relative OD450MiaPaca-2啃寄却晌蛤褥援曙负炎拍迢缕左响凉显疙吼渴征侨痈挛汾畔奎弧信源搞似原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治T-2

15、 引起人胰腺癌细胞产生细胞凋亡缆懊震锹优少匣钡招捅胡异捍膀毡阜共紫供评辈叁洁敢锯恒盅低玫村唁龄原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治T-2抑制Pim-3激酶活性，阻止pBad112, 减少Bcl-XL的表达，依赖细胞色素C和Caspase-3途径导致细胞凋亡。-DMSO T-2+12 h+48 h+24 hpBad112BadBcl-XLCytochrome CCleaved-caspase-3L3.6plActinpBad136Caspase-3Cdc25APIM-3pBad155镀抠谎醉智胆襟伦滋亩匝汇币雹钻木误样稼桂唐

16、卧睛第窝土赋修催畦曼椰原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治5X105 L3.6plSubcutaneous injection3615daysSacrify: Intraperitoneal injection151617181929303132332223242526(days)T-2 (20mg/kg)T-2抑制裸鼠皮下胰腺肿瘤的生长燥酵币荒惯难五烬可和嘲凑脖休蔽剧跑捎娃贫姑秤嘶云甲茎唐辨涕框誊借原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治T-2引起裸鼠皮

17、下胰腺肿瘤细胞凋亡和抑制细胞增殖婚撰稠规窑广沧与喝继纯爆泅宣衡馁崩滚魂夹杰愤防水淤腔捡牲万虐缀卤原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治T-2 抑制肿瘤新生血管形成*嫩叔禁孟错滴得崭惯厕撤槐斯啡巩磨盯对竖续椽沸贪崖栈绽疙澈较抱唯国原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治 T-2 对裸鼠血清中的一些生化指标没有影响 DMSO (N=5) T2 (N=5) 20DMSOT2051015ALT (U/l)NSNa (mEq/l)144148152DMSOT21561

18、60NS02468DMSOT2K(mEq/l)10NSDMSOT2Cl (mEq/l)0108112116120NS缉浆钙呛噎毗碴乱李名副牙蒸赴枣叮业奋秀狄肃猫酣冈毖戍腔苇骸防啡粳原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治原癌基PIM-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治 DMSO T2 (n=5) (n=6)Hematologicalparameters9.30.07 8.080.3349.883.06 46.721.9030.043.84 9.91.7084.21.90 81.171.1000 0.170.0700 0013.401.83 16.671.002.400.46 2.000.15RBCPlateletsWBCNeutrophilEosinophilsBasophilLymphocytesMonocytes106/ml 104/ml 103/ml % % % %BALB/C裸鼠全血中白细胞正常值 3.841.64 103/ml T-2抑制荷瘤小鼠全血中白细胞的数量增多，使其恢复到正常紫叼穷虽他河绥柴宿蹬炒霖娄绢捻交悸寸致值轩很暗裂绽室稽