消毒剂效力验证

1、消毒剂效力验证 能消除以细胞繁殖形态出现的微生 物污染的化学物质。消毒剂的定义：抗菌剂（Antiseptic)化学杀菌剂 (Chemical Disinfectant)清洁剂 (Cleaning Agent)消毒剂 (Disinfectant)卫生洗涤剂 (Sanitizing Agent)杀孢子剂 (Sporicidal Agent)灭菌剂 (Sterilant Agent)消毒剂的分类定义（USP29 ）能消除以细胞繁殖形态出现的微生 物污染的化学物质。消毒剂的定义： 消毒剂可以杀死孢子 化学消毒剂的消毒效果取决于其浓度 消毒剂是“无菌”的 把消毒剂泼洒在表面是一个有效的消毒方式 消毒剂的

2、实验室评估是不可靠的对消毒剂的部分误解：理想的消毒剂： - 抗菌谱广 - 低毒或无毒 - 无腐蚀性，无污染 - 有洗涤作用 - 稳定性好 - 作用迅速 - 作用持久 - 价格低廉影响消毒剂评估的因素： - 菌种 - 接种 - 培养基组分 - 培养时间/温度 - 接触时间 - pH值 - 中和剂的种类 - 渗透压 - 表面张力 - 回收率 - 样品量 - 培养基性质 - 测试/验证方法 消毒剂验证的目的： 通过特定的微生物与某消毒剂在规定的使用浓度下，接触规定的时间后，对微生物进行培养、计数，考察消毒剂的消毒/杀菌效果。消毒剂验证步骤：第一步：在实验室对代表细菌在规定的使用浓度和 规定的作用时间

3、进行确认。第二步：用于洁净区域不同材质的载体，进行模拟 试验，作环境验证。第三步：完成验证报告，形成SOP。 验证用菌种：金黄色葡萄球菌、铜绿色假单胞菌、枯草杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉。菌种选择的原则:代表性,普遍性,易存活、低或非致病性,标准菌种。(环境中常见的污染菌)。菌种的要求：不得超过5代。采用适宜的方法保存。验证菌种：挑战微生物(USP 29)AOAC挑战菌典型环境分离菌杀菌剂：大肠埃希菌ATCC 11229金黄色葡萄球菌ATCC 6538铜绿假单胞菌ATCC 15442杀菌剂：藤黄微球菌，表皮葡萄球菌，杰氏棒杆菌 ，泡囊假单胞菌 杀真菌剂：白色念珠菌ATCC 10231或2

4、091产黄青霉ATCC 11709黑曲霉菌 ATCC 16404杀真菌剂：产黄青霉，黑曲霉菌 杀孢子剂：枯草芽孢杆菌ATCC 19659杀孢子剂：球形芽孢杆菌 ，苏云金芽孢杆菌 消毒剂验证的准备试验合格中和剂的选择筛选常见干扰物的中和剂或灭活方法 2010年版中国药典 附录109页干扰物可选用的中和剂或灭活方法戊二醛亚硫酸氢纳酚类、乙醇、吸附物稀释剂醛类稀释剂、甘氨酸、硫代硫酸盐季铵类化合物（QACs）、对羟基苯甲酸酯、卵磷脂、聚山梨醇酯汞类制剂亚硫酸氢纳、巯基乙酸盐、硫代硫酸盐双胍类化合物卵磷脂碘酒、洗必泰类聚山梨醇酯卤化物硫代硫酸盐乙二胺四乙酸（EDTA）镁或钙离子磺胺类对氨基苯甲酸-内酰

5、胺类抗生素-内酰胺酶中和剂毒性试验：将10100 CFU的微生物加入到中和剂中薄膜过滤，冲洗，培养，计数与菌液对照组比较，回收率应70中和剂效力试验将消毒剂和中和剂混合（记录时间）加入10100 CFU微生物薄膜过滤，冲洗，培养，计数与菌液对照组比较，回收率应70 验证方法 - 薄膜过滤法 菌悬液和消毒剂直接混合，在不同的时间间隔条件下过滤，培养后评价。 验证准备： - 测试菌液准备 用于验证的菌悬液稀释至106108 CFU/ml左右 - 消毒剂稀释至规定浓度。 分装10ml于若干无菌试管中； 试管上标注消毒时间：“1分钟组” ，“5分钟组” ， “10分钟组”或其他要求的时间段。 - 稀释

6、剂：无菌纯水验证步骤（1）：- 接种 接种各验证菌种至盛有待验证消毒剂的试管（使接后浓度104 CFU/ml)，混合均匀，并立即开始计时。- 中和、过滤将消毒剂倾入100ml中和剂中，混合，稀释（如需要），过滤，然后用100ml中和剂清洗滤膜，过滤3次。- 阳性对照 用无菌水代替消毒剂，步骤同上。验证步骤（2）： -培养和计数 取下滤膜放入规定的培养基平板，在规定的 温度、时间培养后，记数。和阳性对照相比，微生物数量下降应至少3个 对数值（细菌芽孢至少2个对数值）。验证步骤（3）：表面挑战试验-根据设施的实际情况，选择不同材质的载体。玻璃，不锈钢，塑料薄膜，乳胶，墙面涂料，地面材质接种，并确认

7、实际数量接触杀菌、中和、过滤 薄膜过滤法-1薄膜过滤法应优先采用封闭式薄膜过滤器,也可使用一般薄膜过滤器。 薄膜过滤器的滤膜孔径应为不大0.45m，直径约为50mm根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质薄膜过滤法-2使用时应保证滤膜在过滤前后的完整性。 滤器及滤膜应采用适宜的方法进行灭菌。水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为100ml，冲洗液、冲洗量及冲洗方法同方法验证试验。每片滤膜的总过滤量不宜过大，以避免滤膜上的微生物受损伤。薄膜过滤法-3中国药典 附录109页，修订：薄膜过滤法采用薄膜过滤法，滤膜孔径应不大于0.45m，直径（约）一般为50mm，若采用其它直径的滤膜，冲洗量应进行相应的调整。总冲洗量不得超过1000ml(每片滤膜的总过滤量不宜过大)，以避免滤膜上的微生物受损伤。正确使用消毒剂（1）稀释消毒剂时只用无菌水设备使用后作彻底清洁；使用前作彻底消毒将环境常见菌列入验证范畴轮流使用不同的消毒剂消毒后，只能用可以消除污染的清洁工具正确使用消毒剂（2）使用消毒剂的人员要接受相关的培训严格遵守“人流”、“物流”