从环境中分离酵母菌-试验设计案

1、实验设计方案从环境中分离酵母菌班级：10级生科（2）班组员：刘楠楠：2潘婷：2李炜昊：2马森：2实验：从环境中分离由醉母菌实验设计方案一、采样采样的理由：酵母菌与人类的关系密切酵母菌是一类单细胞真菌的俗称，分类学上分属于子囊菌纲半知菌类特征：.个体一般以单细胞状态存在；.多数营出芽生殖，有的裂殖；.能发酵糖类产能；.细胞壁常含有甘露聚糖；.喜在含糖量较高、酸度较大的水生环境中生长。酵母菌分布：主要生长在偏酸的含糖环境中，在水果、蜜饯的表 面和果园土壤中最为常见。种类：据1982年的资料，已知的酵母有56属，500多种。酵 母 菌与人类的关系极其密切。千百年来.人类几乎天天离不开酵母菌， 例如酒

2、类的生产，面包的制作，乙醇和甘油发酵，石油及油品的脱蜡， 饲用、药用等的生产。酵母菌细胞的形态和构造期跑壁细尼摩液泡粒伫藏粒电子显微镜下的酿酒酵母细胞结构示意图细胞直径比细菌粗10倍左右，如 Saccharomycescerevisiae细胞 的宽度为2.5-10 m,长度为4.521 pm。因此在光学显微镜下可以 模糊地看到它们细胞内的各种结构分化。酵母菌细胞的形态通常有球 状、卵圆状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。细胞壁：酵母细胞壁呈三明治”结构卜层：甘露聚糖（约占30%,以e糖昔键联结（并非所有酵母菌都 有） 内层：葡聚糖（约占30-40%,由D-葡萄糖以（3 -糖昔键联结）中间层：蛋白质

3、（含6-8%,多为酶类）细胞膜： 酵母菌的细胞膜与原核生物的基本相同。 但有的酵母菌如酿酒酵母中含有固醇类（苗醇）、VitD的前体-麦角固醇，这在原核 生物是罕见的。细胞核：核膜：核孔4070nm ,透性比任何生物膜都大。?染色体：由DNA和组蛋白牢固结合而成，呈线状，数目因种而 异。?核仁：核内有一或几个区域rRNA含量很高，这一区域为核仁， 是合成核糖体的场所。?中心体：在核膜外，由蛋白质亚基组成的细丝 状结构，在细胞繁殖分裂中起作用细胞核的功能：携带遗传信息，控制细胞的增殖和代谢酵母菌的繁殖方式酵母菌的菌落大而厚，圆形，光滑湿润，粘性，颜色单调。常见白色、土黄色、红 色。采样的方法：原理

4、：大多数酵母菌为腐生，其牛活最适 pH为4.5 6,常见 于含糖分较高的环境中、例如果园十、菜地十及果皮等植物表面。故 可以从甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮上取样。利用酵母菌喜欢酸性环 境的特点，常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液 （这样做的好处 是酸性培养条件则可抑制细菌的生长）实验材料和用具1、苹果果皮、0.1%美蓝染液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等。2、豆芽汁葡萄糖培养基原料：黄豆芽（100克）、葡萄糖（50克）、蒸储水（1000ml）, 自然PH配制方法： 陈新鲜豆芽100克，放入烧杯中，加水 1000ml, 煮沸约30min,用纱布过滤，用水补足原量，再加入葡萄糖 50克， 煮沸融化

5、，121c灭菌20min.实验步骤1、接种：取一小块果皮，不需冲洗，直接接入到豆芽汁葡萄糖培 养液试管中，置28 30 C ,培养24小时,可见培养液变混浊。2、培养，用无菌吸管取上述培养后培养液 0.1ml,注入另一管乳 酸马铃薯葡萄糖培养液中，置28 30 C再培养24小时或稍长（过长 贝U霉菌长出）。3、观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的 0.1%美蓝 染色液中，混匀后加盖玻片制成水浸片，先用低倍镜后换高倍镜观察 酵母菌的形态和出芽生殖情况。4、活酯母菌可使美蓝还原、从而使菌体不着色、用此方法可判断 酵母菌的死活。芽殖过程：?母细胞形成小突起（AD）?核裂（E-G）?原生质分配

6、（H-I）?新膜形成（J-K）?形成新细胞壁（L）二、分离原理：马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板。用划线法分离酵母菌培养液，从而得到单个菌落。挑取单个菌落反复再次划线分离纯化，最终可获得纯培养。培养基的设计： 马铃薯葡萄糖琼脂培养基：原料：马铃薯（200克）、葡萄糖（20克）、琼脂（15-20克）、蒸储水（1000ml）,自然PH配制方法：将马铃薯去皮后、切片、加水煮烂（煮沸2030分钟、能被玻璃棒戳破即可），用4层纱布过滤，再加入糖和琼脂，加热融化后 再补足水分至1000ml,并在121摄氏度条件下高压灭菌 20分种。 方法:平板划线法图用4平板则线操作雷图Vflg创线分离图三、鉴定原理

7、：大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似，但比细菌菌落大而厚, 菌落表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边 缘、中央部位的颜色都很均一，菌落多为乳白色，少数为红色，个别 为黑色。啤酒酵母的菌落红酵母的菌落各种酵母菌的菌落。方法:制玻片并在显微镜下观察其形态四、实验的过程记录及其结果、结果分析（期2012/5/272012/5/282012/5/302012/5/312012/6/1记录配制豆芽 汁葡萄糖 培养液， 并接种， 用的材料 是成熟的 苹果皮。在28 C的环境卜培养了 24小 时，观察现 象，培养液 变浑浊。配制豆芽 汁培养基， 进一步进 行培养。.取菌液制 片并滴加少 许

8、的美蓝染 液，用显微镜 观察，醉母菌 大部分为活 的，且处于母 细胞形成小 突起阶段。.配制马铃 署葡萄糖琼 脂培养基，用 划线法分离 醉母菌.观察培养基上 的菌落，菌落表 面光滑、湿润， 容易挑起，苗落 的质地很均匀， 为乳白色。初步 断定分离纯化由 来的是醉母菌。.镜检，在显微 镜卜观察大部分 醉母菌处于核裂 阶段，少数处于 新膜形成阶段。可断定为醉母菌五、结果及结果分析：在本实验中，我们的最根本目的是从环 境中分离由醉母菌，依据醉母菌的特性，我们选择从成熟的 苹果皮中提取,依据醉母菌的形态、菌落特征我们进行了鉴 定，最终在经过六天的实验后从环境中提取由了解母菌，但 在实验的过程中所提取由来的醉母菌的量不多，分析原因大 概有如下两点：1.苹果皮在接种前洗过，把一些菌洗掉了。2.接种时，接种的量不足，导致后续的培养由来的量也不足。六、实验感想：此次实验是由四人的一个小组合作完成，在