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文档简介
1、蜂产品中抗生素残留现状及检测方法概述 报告人:胡二坤 2009.4.24主要内容我国蜂产品市场现状蜂产品抗生素残留原因及现状抗生素的危害抗生素检测方法研究现状化学发光分析方法简介抗生素化学发光研究现状我国蜂产品行业现状 中国是世界第一养蜂大国,蜂群数约为600万群。蜂产品资源相当丰富,年产蜂蜜约20万吨;蜂王浆约2200吨;蜂花粉约1000吨;蜂腊约3000吨;蜂胶可达300吨;其他蜂毒、雄蜂蛹和蜂王幼虫等数量也极为可观。中国蜂产品除满足国内工业、医药、保健等方面应用外,大量向世界各国出口,特别是蜂蜜、蜂王浆、蜂蜡,是蜂产品中出口创汇的主要产品。直接经济效益约为20亿元。蜜蜂为农业授粉增加的经
2、济效益为1500亿元左右。 蜂蜜成分 1.水分 成熟的蜂蜜含水量在1822。 2.糖类 成熟蜂蜜总含糖量达75以上,占干物质的9599。蜂蜜中的糖分主要是葡萄糖和果糖,一般品种的蜂蜜中葡萄糖占总糖分的40以上,果糖占47以上,蔗糖占4左右。此外,还含有一定量的麦芽糖、松三糖、棉子糖等多种糖,作为多糖的糊精在优质蜂蜜中含量甚微,只有甘露蜜才含有一定量。 3.酸类 蜂蜜中含有多种酸,占总量的0.1左右,且绝大多数为有机酸,其中最主要的是葡萄糖酸和柠檬酸,此外还有醋酸、丁酸、苹果酸等。除有机酸外,还含有少量的无机酸,如磷酸等。蜂蜜的含酸量虽然较大,但由于糖类甜味的掩盖,使人食了以后感觉不到明显的酸味
3、。 4.矿物质 蜂蜜中的矿物质含量为0.030.9,种类多达18种,主要为铁、铜、钾、钠、镁、钙、锌、硒、锰、磷、碘、硅、硫、铅、铬、镍等。蜂蜜中的矿物质主要是植物从土壤中吸收来的,深色蜜比浅色蜜含的矿物质多。 5酶类 蜂蜜含有丰富的酶类,有转化酶(如蔗糖酶、淀粉酶、葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶等)、还原酶、脂肪酶等。这些酶是蜜蜂在酿蜜时所分泌的,也有少量是由植物所分泌的。 6维生素 蜂蜜中维生素的含量与蜂蜜来源和所含花粉量有关。所含维生素以B族为最多,每100克蜂蜜中含有300840微克;其次是维生素C。常见几种维生素含量(g100g):硫胺素(B1)2.29.1,核黄素(B2)35145,抗坏
4、血酸(C)0.56.5,毗哆醇(B6)227480,泛酸(B5)25190,叶酸(Bc)3,烟酸(PP)63590。还有生物素、维生素K、维生素E等。 7胶体物质 蜂蜜胶体物质主要由部分蛋白质和蜡类、戊聚糖类及无机物质组成,决定着蜂蜜的混浊度、起泡性和颜色。浅色蜜胶体物质含量在0.2左右,而深色蜜含量达1。 8蛋白质和氨基酸 蜂蜜中蛋白质通常为0.291.69,平均 0.57。氨基酸是构成蛋白质的基本单位,蜂蜜中游离的氨基酸达16种之多,人体必需的8种氨基酸在蜂蜜中全部存在。 9.芳香物质 蜂蜜的芳香味,是由蜂蜜中的芳香物质所形成的,现已发现,蜂蜜中的芳香物质是由几十种到上百种分子组成的复合物
5、,主要是苯乙酸,一般含量在10.6242.1毫克千克,还含有17种酚类、8种醛类、7种醇类和9种烃类物质。不同的蜂蜜由于所含芳香物质的品种和数量不同,就形成了蜂蜜味道的多样性。 10.其他成分 每100克蜂蜜中含有12001500微克乙酞胆碱,0.10.4的抑菌素,还含有松属素类黄酮物质、色素、激素等有效物质和一些不明成分的物质等。 在蜂产品行业,素有“北有颐寿园,南有汪氏”之说,这两个品牌基本占据了国内主要的市场,此外还有众多的区域性的品牌【2008,中国食品产业调查网】。随着健康观念的深入以及国人对绿色食品需求的增加,蜂产品的市场前景不可限量。在近期罕见的金融危机中,相当多的产业都受到极大
6、的冲击,但是蜂产品行业却逆势而涨,足以说明,蜂产品行业是个朝阳产业。 我国是蜂产品出口大国,在日益激烈的国际市场竞争中,面临着越来越大的压力。除了恶性竞争、进口国的反倾销诉讼外,以药物残留为主的绿色贸易壁垒已成为制约我国蜂产品出口的主要因素之一。 2002年8月28日,美国海关在从中国进口的近500吨散装蜂蜜中检测出低浓度氯霉素,并将这批蜂蜜全部扣留。 2002年初,欧盟以我国产蜂蜜含有氯霉素等抗生素超标为由,全面禁止我国动物源性食品进境。与此同时,世界各国先后抬高门槛,对我国的蜂蜜产品提出苛刻的要求,欧盟国家的许多商场还陆续将中国产蜂蜜撤下柜台,停止出售。 此外,加拿大对中国的蜂蜜产品也在农
7、、兽药残留(15项磺胺,4种抗生素和250多种杀虫剂残留)等方面提出了苛刻的要求。尽管2005 年7月解除了这一禁令,但欧盟关于进口蜂蜜中氯霉素残留的检测标准仍然十分苛刻:10万吨蜂蜜中氯霉素含量不得超过1克。若再检测出超标,生产企业将会被列入“黑名单”而被逐出欧盟市场。2006年日本实施“肯定列表制度”后,对出口到日本的食品中所含农业化学品标准的规定就变得十分苛刻,其中最为严苛的就是对蜂王浆中含氯霉素的限量标准提升了100倍。由于部分企业对抗生素残留存在侥幸心理,认为只有对日本直接出口的产品要做好检验和货源的监控工作,因为放松了对抗生素残留的警惕,导致2007年我国出口到韩国的蜂产品在日本查
8、出氯霉素超标,造成较坏的国际影响。国际市场技术性贸易措施虽然在一定程度上制约产品出口,但是也给我们规范行业、提高出口产品质量提供了契机。 日本厚生劳动省3月31日公布其“2009年度蜂产品监控检查项目”,宣布自4月1日起解除对我蜂蜜氯霉素命令检查,同时,在2008年监控检查项目基础上,增加喹诺酮类10项,监测项目增加至30项。日本是我蜂蜜主销市场,年进口我蜂蜜34万吨,我蜂蜜占其进口蜂蜜市场份额90%以上。 蜂蜜中抗生素残留现状(国内市场)2004年四川市场上蜂产品产品抽样结果(不合格率87%)生产企业商品名称不合格项目成都市健生堂100%枇杷花蜂蜜四环素族抗生素残留量、淀粉酶活性内江市杨氏蜂
9、蜜产品开发园女士蜂蜜四环素族抗生素残留量、淀粉酶活性杭州常青蜂业公司天然纯净蜂蜜四环素族抗生素残留量成都市永丰堂纯天然洋槐蜂蜜四环素族抗生素残留量、淀粉酶活性、武汉小蜜蜂食品有限公司100%纯蜂蜜淀粉酶活性甘肃武都县太泉蜂业总场纯天然美容蜜四环素族抗生素残留量甘肃武都县太泉蜂业总场黄氏蜂蜜四环素族抗生素残留量杭州百荷轩食品有限公司野山纯净蜂蜜还原糖(以转化糖计)北京优联格瑞食品公司槐花纯蜂蜜四环素族抗生素残留量、淀粉酶活性大邑县晋阳蜂产品有限公司宝山野花蜂蜜四环素族抗生素残留量、淀粉酶活性江苏2009年春节年货产品质量专项监督抽查,抽查结果显示蜂蜜产 品合格率仅为75%。蜂蜜产品质量存在的主要
10、问题: (一)个别产品药物残留超标。抽查的南京春天生物工程有限公司2008年11月20日生产的平康牌500g/瓶洋槐蜂蜜的四环素族抗生素残留量达到0.19 mg/kg,远远超过国家标准对定的0.05 mg/kg。 (二)有2种蜂蜜中淀粉酶值(淀粉酶活性)不达标。淀粉酶值(淀粉酶活性)是指1g蜂蜜所含的淀粉酶在40以下,1小时内转化1%淀粉溶液的毫升数。在加工时由于加热温度过高和时间过长,淀粉酶会遭受破坏。贮藏时间过长,酶的活性也会降低,蜂蜜被掺假掺杂也会导致淀粉酶值降低。所以蜂蜜中淀粉酶值高,表明这种蜂蜜是新鲜成熟纯正的天然蜂蜜。困扰我国蜂产品行业的几大问题问题一:蜂蜜检测方法国家标准无强制力
11、 我国已实施的蜂蜜行业标准与国家标准多是推荐性标准,现行蜂蜜国标只是对蜂蜜的感观、理化和卫生指标提出要求,而对于蜂蜜技术质量标准及相关抗生素残留的检测方法则多为推荐性方法,由生产企业自愿采用。目前,成以上的蜂蜜生产企业都采用自行制定的企业标准,而且多数企标低于国标与行标,一些企标的标准水平低下到连蜂蜜的基本理化指标都没有,但却大多在当地的质量技术监督部门备了案,造假企业披上了“合法”外衣。 问题二:蜂蜜食品标签企业随意标注 按国家蜂蜜标准规定,蜂蜜不允许添加任何添加剂和其他成分,即使是复合蜂蜜,也要由多种天然蜂蜜混合而成。但在一些地区,企业在产品标签上大做文章、玩文字游戏,生产的假蜂蜜以精美包
12、装、低廉价格充斥市场。 问题三:蜂蜜衍生产品市场混乱 蜂蜜与近来火爆的酸奶、奶片等各种奶制品一样,衍生出种种“蜂蜜”,但目前国家对这类产品缺乏准确定位。市场上不少名为“蜜”的类蜂蜜产品,虽打着蜂蜜旗号,添加的却是成本较低的糖或其他物质,严重扰乱了市场秩序。可执法监督部门因无法可依,无法对其实施有效约束。 问题四 : 滥用抗生素现象严重 (1) 蜂群致病是导致滥用抗生素现象出现的主要原因 养蜂人由于自身水平的限制在蜂品种选择上以及群峰饲养管理上的漏洞导致易发生大面积的群峰染病事件,一些抗病能力不强的蜂在发病初期没有得到有效的隔离或者蜂厂环境卫生工作做的不到位使养蜂人不得不大量使用抗生素。 (2)
13、用药上的不科学,导致蜂病反复使用抗生素,加重了抗生素滥用 我国蜂产品养殖业粗放型发展,大多数养蜂人对抗生素药物的使用一知半解,不分病因滥用抗生素,不按照剂量使用主观加大剂量或者更改配方,都导致抗生素大量使用。蜂产品中主要的抗生素残留氯霉素(Chloramphenicol) 氯霉素是一种广谱抗生素,具有良好的抗菌和药理特性,被广泛应用于蜜蜂的各种传染病的防治。但是氯霉素对人和动物的骨髓细胞、肝细胞产生毒性作用,可导致再生障碍性贫血;婴儿可出现致命的“灰婴综合症”。氯霉素在食品中的残留浓度高达1mg/kg以上时对食用者的有严重威胁,因此成为第一个被世界各国禁用于食品动物的抗生素。 磺胺类(Sulf
14、onamides,SAs) 磺胺类药物是一类具有广谱抗菌活性的人工合成药物,主要用于预防和治疗细菌感染性疾病。由于其易残留在动物体内,对人有严重的副作用,尤其是致癌性物质磺胺二甲基嘧啶(Sulfamethazine,SM2),严重的反应表现在血液系统的有粒细胞减少或缺乏、贫血、血小板减少,对体内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏者可致正铁血红蛋白血症和溶血性贫血。四环素类抗生素 四环素(Tetracycline,简写TC)、土霉素(Oxytetracycline,简写OTC)、金霉素 (Chlortetracycline,简写CTC)同属于四环素类抗生素,由于容易诱导耐药菌株和导致食品残留
15、,包括我国在内的许多国家对四环素类残留实施例行监控。氨基糖苷类(Aminoglycosideantibiotics,AGs) 链霉素(Streptomycin)和双氢链霉素(Dihydrostreptomycin)同属于氨基糖苷类抗生素,均具有耳毒性和肾脏毒性,能损害脑神经、耳蜗神经,对近端肾曲管有损害,造成血尿、肾功能衰退等。 喹诺酮类(Quinolones,QNs) 恩诺沙星(Enrofloxacin)和环丙沙星(Ciprofloxacin)属喹诺酮类药物,能引起中枢神经系统不良反应,而且有潜在的致癌性和遗传毒性,同时还容易使病菌产生耐药性。抗生素对人体的危害一般来说,抗生素残留对人类健康
16、的危害并不一定都表现在急性毒性作用,人体经常摄人小剂量的相同的残留物,经过一定时间后,会逐渐在体内蓄积而导致各种器官发生病变,甚至癌变。抗生素残留对人体的影响主要表现在变态反应、过敏反应、免疫抑制、致畸、致癌、致突变等作用。此外,抗生素在人体内的残留也会对胃肠道菌群产生影响,导致人体代谢紊乱。 抗生素的代谢人体蓄积的抗生素肝脏胆汁环境动植物生长或饲养过程中人为添加抗生素检测主要的方法(1)色谱法 (高效液相色谱法、气相色谱法)(2)联用技术: (液质联用、气质联用、毛细管区带电泳MS )(3)微生物法(四碟杯实验法)(4)酶联免疫法(5)Charm Charm检测原理及方法介绍 美国CHARM
17、公司以生产食品安全检测产品而享誉全球。该公司推出的CHARMII7600系统及其检测技术,在美国FDA、欧盟、韩国和香港等许多食品安全监督机构作为法定检测工具,更是食品加工行业首选的食品原料和成品质量检测仪器。在中国CHARMII方法即将上升为国标检测方法。CHARMII7600系统作为一种基于放射荧光免疫受体分析技术的定性和半定量抗生素及农药残留快速筛选仪器,特别适用于我国的出入境检验检疫局、兽药和饲料监察所、疾病预防控制中心、各级农产品检验中心、质监局等政府机构以及乳制品、水产、蜂蜜、畜禽制品等食品及饲料兽药生产行业进行样品快速筛选和质量控制用。 CharmII放射免疫检测法是随着免疫学在
18、食品质量快速检测中应用而发展起来的另一个分支,该方法为美国认可的官方方法。在我国主要应用于食品抗生素残留的初筛,检测样品涉及血液、尿液、组织、牛奶、蜂蜜等方面。牛奶样品前处理简单,干扰因素小,只需简单离心便可直接用于检测,从接收样品到出具结果,整个过程约0.5。一个阴性结果表明该样品中含种四环素浓度分别小于100ug/L,同时也可表示为种四环素浓度总和不超过100ug/L。因此,CharmII放射免疫法检测,提供了一种很好的牛奶中多种四环素类药物检测的快速筛选方法。 目前已有的检测方法大多具有灵敏度高、重复性好等特点,有些方法已成为国家标准,特别是色谱法更具有确证能力。但是,这些方法难以在普通
19、蜂农甚至中小型企业中普及应用,无法实现在实验室外实施快速检测。 归其原因主要有以下几种: s费用昂贵:首先是仪器,色谱、质谱法的仪器动辄十万,甚至百万。稍微便宜的如ELISA、Charm 也需要配套几万的设备。 s操作复杂:从样品处理到最后得到结果,需要几个小时甚至过夜,其间的操作过程需要几步到十几步,并且要求操作人员具有高度的专业知识及熟练的操作技能。 s检测环境苛刻:由于仪器的精贵、样品处理的复杂,因此对操作环境的温度、湿度、通风、光照以及有毒物质的排放都有严格要求,设施涉及无菌操作间、通风橱、排污管道、掩埋装置等,这就要求检测必须在符合规定的实验室中进行。 ELISA、Charm 和微生
20、物法等相对其它方法而言,仪器费用相对较低,在几万元左右;操作人员需要一定的专业培训;但对实验设施的要求仍然较高,必须在合规定的实验室中进行。化学发光法检测抗生素化学发光 (ChemiLuminescence ,简称为 CL) 分析法是分子发光光谱分析法中的一类,它主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理,利用仪器对体系化学发光强度的检测,而确定待测物含量的一种痕量分析方法。化学发光与其它发光分析的本质区别是体系产生发光 ( 光辐射 ) 所吸收的能量来源不同。 体系产生化学发光,必须具有一个产生可检信号的光辐射反应和一个可一次提供导致发光现象足够能量
21、的单独反应步骤的化学反应。化学发光体系用化学式表示为:依据供能反应的特点,可将化学发光分析法分为: 1)普通化学发光分析法 ( 供能反应为一般化学反应 ) ;2)生物化学发光分析法 ( 供能反应为生物化学反应;简称 BCL) ;3)电致化学发光分析法 ( 供能反应为电化学反应,简称 ECL) 等。根据测定方法该法又可分为: 1)直接测定 CL 分析法; 2)偶合反应 CL 分析法 ( 通过反应偶合,测定体系中某一组份; 3)时间分辨 CL 分析法 ( 即利用多组份对同一化学发光反应影响的时间差实现多组份测定 ) ; 4)固相、气相、液相 CL 分析法; 5)酶联免疫 CL 分析法等。 化学发光
22、仪器原理示意图PMT: photomultiplier tube 光电倍增管 在整个检测系统中其关键的部分为 PMT ,其直接影响到仪器的检测性能,不同型号的仪器其检测技术不一样,但基本原理都是利用待测组份与体系的化学发光强度呈线性定量关系,而化学发光强度随体系反应进行的速度增强或衰弱。记录仪记录峰形,以峰高定量,也可以峰面积定量。因化学发光多为闪烁式发光 (1-2s 左右 ) ,故进样与记录时差短,分析速度快。化学发光常用的发光物质鲁米诺及其衍生物(鲁米诺的衍生物主要有异鲁米诺、 4 氨基已基 N 一乙基异鲁诺及 AHEI 和 ABEI 等。鲁米诺在碱性条件下可被一些氧化剂氧化,发生化学发光
23、反应,辐射出最大发射波长为 425nm 的化学发光。 )光泽精(光泽精以硝酸盐的形式存在,在碱性介质中,过氧化氢将其氧化成四元环过氧化物中间体,而后裂解生成激发态的吡啶酮而发光。利用光泽精与还原剂作用,可用于测定临床医学上一些重要的还原性物质,如抗坏血酸、肌酸酐、谷胱甘肽、葡萄糖醛酸、乳糖、葡萄糖。 )洛酚碱(洛酚是文献上记载最早的化学发光试剂,但却迟迟未得到应用,直到 1979 年 Marino 等人将它应用于 Co 的测定后才得到重视。此试剂已被用于多种元素的分析测定) 吖啶酯类(吖啶酯类化合物是一类很有前途的非放射性核酸探针标记物,用作 DNA 的发光探针,发光量子产率高,稳定性好,标记物对杂交反应的动力学
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