生物安全和实验室感染控制教学课件

1、生物安全与实验室感染控制 v05011最主要的职业是护士和实验室技术员；除三名实验室人员是暴露于艾滋病病毒培养以外，其余全部是由于污染血液或体液；外科医生和被缝合针刺伤的暴露者中没有发生肯定的艾滋病病毒感染。 到1997年7月为止，美国共发生52名职业暴露后艾滋病病毒感染者，发现其中：23起严重的实验室SARS病毒感染事件2003年9月新加坡国立大学研究生在环境卫生研究院实验室中感染SARS病毒2003年12月一名台湾的SARS研究人员在实验室感染SARS病毒2004年4月安徽、北京先后发现新的SARS 病例，经证实分别来自于在中国疾病预防控制所实验室受到SARS感染的两名工作人员3应对措施1

2、、严格执行国家和有关部门的实验室生物安全规范与标准，严格遵守实验室的安全操作规则和程序。凡从事高危险级别微生物研究的单位必须按程序申报，并经有关部门考察批准后方可进行有关研究。2、只有在具有相应级别的生物安全防护设施内才能从事高危险级别微生物的研究，生物安全防护设施要有标准的硬件条件（包括设施、设备、防护器具），也要有规范的实验室管理和操作程序。3、进一步加强实验室的管理，要切实做到使实验人员严格遵守实验室管理和操作规范，按照实验室的要求严格控制用于实验的微生物种类。另外，严格对菌/毒种的管理。4、一旦发生意外感染事件，当事人应尽快就医，通报疫情，关闭实验室，消毒场所，隔离相关人员，相关部门应

3、立即启动紧急预案。5、在从事微生物研究中必须牢固树立安全第一的观念。6、各级卫生行政部门，各疾病预防控制机构、医疗、卫生、教学科研单位要明确领导和专人负责管理，严格实行责任制和责任追究制。4实验室相关感染传播途径易感宿主感染源皮肤接触气溶胶吸入粘膜的接触 摄取培养基和培养物实验动物标本被上述污染的物品免疫系统疫苗接种年龄5仅有 20% 能够找出发病原因其中80%是源自人为因素 另外20%源自仪器故障4种最常见的感染原因泄漏针头和注射器利器和破碎的玻璃动物或寄生虫的咬伤和抓痕http:/www.weizmann.ac.il/safety/bio2.html实验室相关感染6实验室相关感染人物疾病地

4、点时间原因研究者SARS台湾2003年12月微生物学家西尼罗河病毒美国2002年8月割破实验室人员流感美国2000气溶胶?实验室人员牛痘病欧洲2002接触7生物安全通过管理工作人员在接触生物物质的过程来避免感染自己，他人或者环境通过如下措施工程控制行政控制规章制度个人防护措施8生物危害例如：病毒、细菌、真菌、寄生虫和他们的毒素和他们所产毒素 血、体液及人和动物的组织改变了的细胞排序和核酸特定序列生物或其他相关材料所导致的对人、动物或环境的潜在危害910感染性微生物的危险度等级分类11微生物分类目录的制订1、微生物的致病性2、微生物的传播方式和宿主范围。它们可能会受到当地人群已有的免疫水平、宿主

5、群体的密度和流动、适宜媒介的存在以及环境卫生水平等因素的影响3、当地所具备的有效预防措施。这些措施包括：通过接种疫苗或给予抗血清的预防（被动免疫）；卫生措施，例如食品和饮水的卫生；动物宿主或节肢动物媒介的控制4、当地所具备的有效治疗措施。这些措施包括：被动免疫、暴露后接种疫苗以及使用抗生素、抗病毒药物和化学治疗药物，还应考虑出现耐药菌株的可能性。12血液感染病原体 (BBP)来源血液精液生殖道分泌物体液脑脊液羊水关节液组织培养器官培养感染的试验动物13血液感染Hepatitis BHepatitis CHIV14暴露的危险因素病原体类型体液类型暴露途径暴露时间暴露中相关血液的量暴露时病毒的浓度

6、个人防护措施15实验室分级BSC：生物安全柜；GMT：微生物学操作技术规范16危险级别个体危险度群体危险度实验室分级例如1低低Level 1大肠杆菌2中等限制性Level 2 大肠O157, 链球菌 & 沙门菌属, 腺病毒, A, B & C型肝炎, 流感, 麻疹3高低Level 3 结核分枝杆菌, 汉塔病毒, HIV, 黄热病病毒4高高Level 4 由拉沙病毒, Ebola virus, 马尔堡病毒不可能导致健康的人和动物感染很少导致病人和动物感染可能导致严重疾病很可能导致非常严重的疾病常规病原体17Level 1 基本的实验室不需要特殊设置不需要生物安全柜18Level 2 具有2级实验

7、室相应的临床的、诊断的、研究的和教学的设备容易产生气溶胶或者飞溅时需要 I级或II级的生物安全柜 需要有对突发事件的应急处理预案需要进入规定19专门的设计和建筑最主要是个体防护其次是保护环境所有的工作人员在进入实验室进行操作前均需经过严格培训包括PPE,设备, 垃圾处理Level 3 20Level 4在加拿大仅有一个4级实验室(Canadian Centre for Human and Animal Health in Winnipeg, Man.)设计要求非常苛刻，要把工作人员完全与感染物质隔离开21不同生物安全水平对设施的要求222324原则在不同等级的实验室，建立统一的实验室操作规程和

8、生物安全要求标准根据不同的生物安全级别，实验室装备必要的实验与防护设备有可靠的防护效果和安全的菌种资源库实验室实行严格的科学化管理 25操作规范实验室的设计和设施实验室设备健康和医学监测培训废弃物处理化学品、火、电、辐射以及仪器设备安全26操作规范进入规定人员防护操作规范实验室工作区生物安全管理2728人员防护1、连体衣、隔离服或工作服2、应戴上合适手套3、洗手4、安全眼镜、面罩或其他防护设备295、严禁穿着实验室防护服离开实验室6、不得在实验室内穿露脚趾的鞋子7、禁止在实验室工作区域进食、吸烟、化妆和处理隐形眼镜8、禁止在实验室工作区域储存食品和饮料9、在实验室内用过的防护服不得和日常服装放

9、在同一柜子内30每个实验室都应该采用“安全手册”或“操作手册”，其中定义了已知的和潜在的危害，并规定了特殊的操作程序来避免或尽量减小这种危害。规范的微生物学操作技术是实验室安全的基础，而专门的实验设备仅仅是一种补充，绝不能替代正确的操作规范。31操作规范1、严禁用口吸移液管。2、严禁将实验材料置于口内。严禁舔标签。3、所有的技术操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。4、应限制使用皮下注射针头和注射器5、出现溢出、事故以及明显或可能暴露于感染性物质时，必须向实验室主管报告。实验室应保存这些事件或事故的书面报告。326、必须制订关于如何处理溢出物的书面操作程序，并予以遵守执行。7、污染

10、的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染（采用化学或物理学方法）。根据所处理的微生物因子的危险度评估结果，可能需要准备污水处理系统。8、需要带出实验室的手写文件必须保证在实验室内没有受到污染。33实验室的设计和设施可能造成安全问题的情况气溶胶的形成处理大容量和或高浓度微生物仪器设备过度拥挤和过多啮齿动物和节肢动物的侵扰未经允许人员进入实验室工作流程：一些特殊标本和试剂的使用34图2 典型的一级生物安全水平实验室（图片由CUH2A ，Princeton ，NJ ，USA 提供）35图3 典型的二级生物安全水平实验室（图片由CUH2A ，Princeton ，NJ ，USA 提供）。在生物安全柜

11、中进行可能发生气溶胶的操作程序。门保持关闭并贴上适当的危险标志。潜在被污染的废弃物同普通废弃物隔开。36图4 典型的三级生物安全水平实验室（图片由CUH2A ，Princeton ，NJ ，USA 提供）。实验室与公共通道分开并通过缓冲间（双门入口或二级生物安全水平的基础实验室）或气锁室进入。处理废弃物前，在实验室内先进行高压灭菌以清除污染。应有非手控的水槽。形成向内气流而且涉及感染性材料的全部工作应在生物安全柜中进行。37实验室设备1、在设计上应能阻止或限制操作人员与感染性物质间的接触2、建筑材料应防水、耐腐蚀并符合结构要求3、设备装配后应无毛刺、锐角以及易松动的部件4、设备的设计、建造与安

12、装应便于操作、易于维护、清洁、清除污染和进行质量检验。应尽量避免使用玻璃及其他易碎的物品38基本生物安全设备1、移液辅助器2、生物安全柜，在以下情况使用：处理感染性物质；空气传播感染的危险增大时进行极有可能产生气溶胶的操作时3、一次性塑料接种环，也可在生物安全柜内使用电加热接种环，以减少生成气溶胶4、螺口盖试管及瓶子5、高压灭菌器6、一次性巴斯德塑料移液管，避免使用玻璃制品7、高压灭菌器和生物安全柜等设备用前须进行验收39404142生物安全柜Laminar flow hoods NOT biological safety cabinets Vertical or horizontal lam

13、inar flow HEPA filtered air (intake) product protection onlyBiological Safety Cabinet HEPA filtered laminar air flow and exhaust personnel, environment & often product protectionVS43444546474849实验室中生物安全柜的使用位置操作者物品放置操作和维护紫外灯明火溢出认证清洁和消毒清除污染个体防护装备警报器50用生物安全柜之前:确认生物安全柜经过认证关闭紫外灯，打开荧光灯用适当的消毒剂消毒工作台面把需要使用的仪

14、器放入柜内工作前吹风机需开510分钟生物安全柜内的工作安全51所有的材料和设备需要放置在靠近生物安全柜的后缘，特别是能够产生气溶胶的设备，但是不能阻塞任何通气孔尽量减少飞溅和产生气溶胶所有的工作流程应从干净到脏的区域尽量较少动作避免引起气流产生生物安全柜内尽量不要使用明火生物安全柜内的工作安全52每天工作结束时:吹风机需要开5分钟来净化把所有设备和材料均移出并进行消毒消毒操作台面关闭吹风机和荧光灯，打开紫外灯生物安全柜内的工作安全53维护:每天两次擦拭工作表面每周对紫外灯表面进行擦拭*每月对生物安全柜表面进行擦拭每年二次紫外灯强度监测 每年一次甲醛熏蒸 每年一次进行认证生物安全柜内的工作安全5

15、4洗手控制感染最有效、最方便、最经济的方法但要能够经常和适时的洗手什么时间洗手?开始所有的操作之前离开实验室前当手被明显污染时在生物安全柜操作前后摘除手套后接触面部或者嘴巴时每天下班时55Youve got the wholePLEASE WASH THEM NOW !56Contamination of Hands and EnvironmentFirst cleaning, then disinfection (if appropriate)57 控制医院感染最简单, 最有效, 最方便, 最经济方法 洗 手58安全使用离心机使用前放置平稳? 过满? 平衡?塞子要正确放置?运行条件?使用密封

16、的转子 使用后完全停止? 溢出和泄漏?放置30分钟沉淀气溶胶或者在生物安全柜内开启59接种环用明火灭菌可能会产生含有污染物的气溶胶短柄来避免晃动过度推荐使用一次性塑料接种环60个人防护措施(PPE)个人防护措施是最基本的防护措施 (防护的最后防线).使用者和管理者均要确保防护措施是有效的 61PPE考虑的标准所有暴露的途径均需要进行封闭防护的程度方便使用需要进行正确的选择并且使用者需要进行严格培训离开实验室前需要正确的移除个人防护设备62PPE鞋套所穿鞋子不能露出脚趾. 在高等级生物实验室和动物房需要穿胶鞋实验服装长袖、需要到膝盖长度 袖口需要收紧后扣式需要定期清洗63PPE手套乳胶, 腈类

17、& 乙烯类等材料手套不能重复使用,更换要及时. 如果手套的防护效果没有改变可以消毒后重复使用需要有一定弹性，必须盖住袖口双层手套不要在公共场所戴手套摘除手套后必须要洗手手套不能代替洗手64戴手套的优点减少病原体迁移到手上或从手上迁移出来的最好方法如果规范地戴手套及更换，成本效果好手套的类型，用途和材料比较多样降低病原体双向传播的危险明显减少被针头刺破皮肤的几率，保护不受血液性传染病的感染65戴手套的缺点花费高使用很不规范; 没有对手套进行及时更换等医护人员认为戴手套只是为了保护他们自己手套材料质量差的情况并非少见增加了固体废物手套材料与一些洗手/擦手材料起反应66手套重复使用的问题清洗手套会增

18、加渗漏的机会Adams . J Hosp Infect 1992对手套进行灭菌或者高水平消毒比较困难一些手套的材料不能进行再处理67PPE眼罩、面罩护目镜, 安全的玻璃来防护眼睛面罩需要保护整个面部皮肤68健康和医学监测1、根据需要提供主动或被动免疫2、促进实验室感染的早期检测3、应禁止高度易感人群（如孕妇或免疫损伤人员）在高危险实验室中工作4、提供有效的个体防护装备和方法。69医疗联系卡70培训1、吸入危险（气溶胶产物），如使用接种环、划线接种琼脂平板、移液、制作涂片、打开培养物、采集血液血清标本、离心等2、食入危险，如处理标本、涂片以及培养物3、在使用注射器和针头时刺伤皮肤的危险4、处理动

19、物时被咬伤、抓伤5、处理血液以及其他有潜在病理学危害的材料6、感染性材料的清除污染和处理71医疗废物管理清除污染高压蒸汽灭菌污染性材料和废弃物的处理和丢弃程序可重复或再使用，或按普通“家庭”废弃物丢弃的非污染（非感染性）废弃物污染（感染性）锐器皮下注射用针头、手术刀、刀子及破碎玻璃；这些废弃物应收集在带盖的不易刺破的容器内，并按感染性物质处理通过高压灭菌和清洗来清除污染后重复或再使用的污染材料高压灭菌后丢弃的污染材料直接焚烧的污染材料72医疗废物管理是指从教学、临床和研究实验室和手术室丢弃的生物垃圾包括(但不是仅有)如下几种：动物尸体实验室生物垃圾人体解剖学标本人血和体液锐器73废物处理Biomedical