血小板免疫和血小板输注无效GianPaoloVisentin

1、血小板免疫和血小板输注无效GianPaoloVisentin人类血小板血小板浓缩液血小板血小板与炎症出现炎症反应后，储存的血小板活化，激活免疫和非免疫细胞，传递炎症信息，进步活化血小板。血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP自身免疫引起的血小板减少症-ITP,AITP新生儿同种免疫血小板减少症-NATP HLA 和HPA输血后紫癜-PTP血小板输注无效 HLA和HPA粒细胞抗体-TRALI HNA血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP自身免疫引起的血小板减少症-ITP,AITP新生儿同种免疫血小板减少症-NATP HLA 和HPA输血后紫癜-PTP血小板输注无效 HLA和HPA

2、DTIP的病原学机制免疫复合体药物和PF4反应，与肝素形成免 疫 复合体，引发一系列免疫反应， 结合Fc受体激活血小板。肝素诱发的血小板减少症（HIT)HIT伴有或不伴有血栓，发病率和死亡率都很高抗体相关的HIT与肝素和PF4复合体相关抗体相关的HIT在肝素存在的情况下可以诱导血小板活化HIT病原学机制肝素依赖抗体的检测聚合血小板14C-胺释放试验（SRA)肝素介导血小板凝集反应肝素/PF4 ELISA流式细胞检测DITP试验药物加样，孵育洗板，除去未结合和Ig与抗-人Ig，孵育阳性= 血小板结合药物 Ig 无结合血小板血清血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP自身免疫引起的血小板减少

3、症-ITP,AITP新生儿同种免疫血小板减少症-NATP HLA 和HPA输血后紫癜-PTP血小板输注无效 HLA和HPA粒细胞抗体-TRALI HNA血小板同种抗原（HPA）血小板膜糖蛋白具有多态性蛋白的构象改变，对功能没有影响，但是在血小板输注和怀孕时，这些改变可能成为抗体的结合点同种免疫反应有时很严重血小板表面GP糖蛋白的多态性HPA相关的免疫性血小板减少HPA系统HPA系统HPA系统HPA 等位基因频率人类GP III基因早期变异血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP自身免疫引起的血小板减少症-ITP,AITP新生儿同种免疫血小板减少症-NATP HLA 和HPA输血后紫癜-P

4、TP血小板输注无效 HLA和HPA粒细胞抗体-TRALI HNA严重的NATPNATP的病因学HPA基因多态性频率表CD36（GPIV)糖蛋白88KD在单核细胞，血管内皮细胞，有核红细胞，脂肪细胞和血小板上有表达受体: I&IV型胶原，疟疾感染红细胞，血小板反应素，氧化LDL，长链脂肪酸同种抗原NaKa-1989CD36缺乏血小板：亚洲人：3-11%美国-非洲人：2.5%沙哈拉非洲人：7.8%高加索人种：0.06%第一类：血小板和单核细胞缺失，导致输血或怀孕产生抗CD36的反应第二类：仅仅是血小板缺失CD36基因32kb,15外显子染色体：日本:CD36缺失出现4个变异 T478C 在外显子4

5、上的变异最常见 Pro90Ser, 81Kb阻止变异非洲:CD36缺失出现7个变异 T1264G在外显子10变异最常见 终止密码子NATP的诊断常用诊断NATP的方法比较单克隆ACE 28/32免疫荧光 21/32（主要是流式细胞技术）GTI 或其它公司ELISA 14/32全部基因型 12部分基因型 5很多实验室联合应用多种方法血小板抗体ELISA检测流式细胞仪（免疫荧光）流式细胞仪的应用流体学原理FC放散光路FC分离细胞群荧光柱状图血小板多态性Luminex 100/200 磁珠法检测Luminex检测血清和磁珠孵育洗涤抗-人IgG孵育调整体积收集数据分析数据商品化的血小板抗体检测试剂GT

6、I:PAK-PlusTM, PAK-AutoTM, PAK-LX, MACE-1TM, PF4-enhancedIMMUCOR: Capture -PTM, MCPTM, Capture-P Ready Screen TMSTAGO: HITTMDiaMed: ID-HATBiotest: Thrombomatch HPA-1a Typing HPA-1a Typing血小板抗原基因型检测PCR-SSPReal-time PCR检测基因型血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP自身免疫引起的血小板减少症-ITP,AITP新生儿同种免疫血小板减少症-NATP HLA 和HPA输血后紫癜-P

7、TP血小板输注无效 HLA和HPA粒细胞抗体-TRALI HNA血小板输注无效诊断血小板配型HLA-AB相合提供无相关HLA-抗体的血小板如果无相合的血小板，可以提供血清学配型阴性的血小板输注HLA-C是否相合，影响不大一些HLA-B抗云不相合（HLA-B45,44)在血小板上表达弱，可以不予考虑如果血清学配型的血小板输注无效，应寻找HLA相合的供者ABO血型在血小板上表达，ABO同型输注十分重要血小板形态血小板同种抗体HLA的分子结构导致抗体产生不同同种免疫反应有不可预知性由于HLA抗原的多态性（CREGs),同一种HLA分子可以产生多种抗体，HLA抗体检测方法补体依赖 固相检测 CDC -

8、ELISA -流式PRA AHG-CDC -Luminex 检测 - 敏感度低 -敏感度高-补体依赖的抗体 -补体依赖、不依赖抗体均可HLA抗体检测方法比较敏感度通量自动化费用/样本配置设备AHG-CDC低低不低显微镜ELISA中-低高是12美金读板机Flow-PRA高中-高是？30美金细胞计数仪（3色）Luminex高高是10美金Luminex相对敏感度的比较Flow ELISA AHG-Augmented CDC CDCFlow ELISA AHG-Augmented CDC CDC流式细胞仪检测敏感不需要补体IgG特异性HLA抗原特异性流式-PRA32种不同的磁珠包被HLA-I和II类抗

9、原判断主观HLA特异性需进一步检测什么是PRA？群体反应性抗体检测抗体检测是通过HLA特异性细胞完成器官移植，用来判断抗HLA的程度抗原的范围不确定，一般是常见的抗原流式方法检测PRA流式方法检测PRA输血后HLA-I抗体的表达Luminex方法检测HLA抗体高通量多元化检测敏感、准确，可以判定HLA抗体的特异性反应易观察双色，100个磁珠判定准确结果Luminex方法的抗体检测实验13种不同的Luminex磁珠分别代表HLA-I,II抗原每个磁珠包被6种HLA-I细胞和8种HLA-II细胞Luminex检测系统Luminex抗体检测REAL血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP自身免

10、疫引起的血小板减少症-ITP,AITP新生儿同种免疫血小板减少症-NATP HLA 和HPA输血后紫癜-PTP血小板输注无效 HLA和HPA粒细胞抗体-TRALI HNA输血相关急性肺损伤TRALI定义：急性肺损伤（ALI)发生在输血后6h以内，并且以前无急性肺损伤病史，无其它相关的急性肺损伤的危险因素。可能TRALI：ALI发生在输血后6h以内，以前无急性肺损伤病史，存在一个以上相关的急性肺损伤的危险因素ALI定义：SpO2 90% or Pa02/Fi02 300 mm Hg血氧偏低X线有渗出性病变输血相关急性肺损伤急性肺损伤的危险因素直接肺损伤 间接肺损伤呼吸 脓毒症肺 休克吸入性中毒 外伤肺挫伤 烧伤溺水 急性胰腺炎 心肺搭桥 药物中毒不同血液制品TRALI的发生率TRALI反应模式图人粒细胞抗原系统（HNA）人粒细胞抗原系统（HNA）粒细胞特异性抗体的临床应用非溶血性发热反应TRALI新生儿粒细胞减少症自身免疫性粒细胞减少症骨髓移植后持续性粒细胞减少下一步HLAHPA供者库的建立人有了