薄层色谱法介绍和其应用

1、薄层色谱法介绍和其应用第一章 概 述第二章 薄层色谱法的分类和原理第三章 薄层色谱法实验方法及应用第四章 薄层色谱法在中草药方面的 应用目 录 第一章 概 述 薄层色谱法 指以适宜的固定相涂布于玻璃板、铝箔片或聚酯薄膜上使成一均匀的薄层，将供试品与相应的对照物点于薄层板的一端，以适宜的溶剂置展开容器中展开，使供试品中所含的相应成分分离，采用适合的显色剂或显色方法显色，将供试品色谱与对照物色谱相比较，或采用薄层扫描仪扫描，以进行鉴别、检查，或含量测定的方法。薄层色谱法 薄层色谱法（Thin Layer chromatography，TLC）是 20 世纪 50 年代发展起来的一种平面色谱技术；至

2、20 世纪 60 年代后，对薄层色谱法在使用器材的规格、操作方法及术语使用的 标准化等方面进行了大量的工作，使该方法日趋成熟和完善。迄今几十年来， TLC已在医药、滥用毒品检测、农药、食品、化工、环保等多方面有了广泛的应用。 薄层色谱技术产生和发展可分为以下3个阶段： 起步阶段 推广普及阶段 发展提高阶段1938年 N. A. Izmailor和 M. S. Schraiber首次在显微镜载玻片上涂布的氧化铝薄层分离了多种植物酊剂中的成分，标志着薄层色谱法的诞生。薄层色谱法具有设备简单、操作方便、分离速度快等优点，从而发展很快，并在中草药的定性定量分析中得到了广泛应用。80年代以来，高效薄层板

3、的出现以及薄层自动化仪器的使用，极大地提高了薄层分析结果的重现性和准确度。有的学者称之为现代薄层色谱技术（Modern TLC)或仪器化薄层色谱技术（Instrumental planar chromatography)。第二章 薄层色谱法的分类和原理根据原理分类：薄层色谱法吸附色谱分配色谱离子交换色谱凝胶色谱其他薄层色谱吸附色谱： 吸附色谱是利用被分离物质在吸附剂上被吸附的能力不同，当用展开剂展开时，不同的物质因吸附和解吸附能力的不同而造成的迁移不同，从而达到分离的目的，是薄层色谱上最常用的方法。常用的吸附剂有硅胶、氧化铝、硅藻土等。 分配色谱: 分配色谱是利用被分离物质在两相中分配系数的不

4、同使组分分离。常以硅胶、硅藻土、纤维素等作载 体，它们吸附一定量的水分或其它溶剂 (如: 缓冲液、 酸液、甲酰胺、丙二醇等)作固定相，再用与固定相不相混溶的展开剂展开, 被分离物质在两相之间不断地进行分配, 从而达到分离。 离子交换色谱: 离子交换色谱是利用被分离物质在离子交换树脂上交换能力的不同使组分分离。常用的有离子交换纤维制成的薄层板，用于分离某些亲水性强、能成离子态的物质。凝胶色谱： 葡聚糖凝胶的分离原理是葡聚糖凝胶在吸水后形成凝胶粒子，在其交联的骨架中有许多一定大小的网眼。网眼大，大分子物质能进入网眼内；网眼小，只有小分子物质才能进入网眼；而超过一定限度的大分子物质，就被排阻在凝胶粒

5、子的外部而不能进入网眼。如同按照分子大小过筛一样，所以称为分子筛。用于高分子的非离子化合物的分离，如蛋白质及核酸等。其他薄层色谱 络合薄层色谱法 AgNO3 微乳薄层色谱法 以微乳液为流动相 胶束薄层色谱法应用一定浓度的表面活性剂溶液 所形成的胶束溶液作为流动相 反相薄层色谱法 利用化学键合反应，将烃基硅烷键 合到硅胶表面，制成非极性固定 相，用极性较大的液体作流动相手性固定相法 光学活性的天然高分子纤维素，纤维素衍生物等第三章 薄层色谱法实验方法及应用特点：1、分离能力强，斑点集中； 2、灵敏度高； 3、展开时间短； 4、试样预处理简单； 5、上样量大； 6、仪器简单操作方便薄层色谱法薄层固

6、定相 、薄层点样、薄层展 开、显色、记录薄层色谱法薄层固定相按照固定相的种类，薄层板可分为正相薄层板（如硅胶薄层板、聚酰胺薄层板）、反相薄层板（如C18键合相薄层板）等。硅胶薄层板是目前使用最广的薄层板，有硅胶G板、硅胶GF254板、硅胶H板和硅胶HF254板等规格。高效薄层板（HPTLC，High Performance TLC）所使用的固定相较普通薄层板平均粒度小，颗粒分布范围窄，因此在相对短的展开距离中可以达到更好的分离效果。薄层固定相TLCHPTLC平均粒度（m）10-153-7颗粒分布（m）宽窄点样量（l）大小展距（cm）10-155-8分离时间（min）30-2003-20检出限：

7、可见光（ng）100-100010-100 荧光（ng）1-1000.1-10传统薄层板与高效薄层板的比较薄层固定相 HPTLC与普通TLC的差别A: HPTLC Silica gel 60（Merck）B:硅胶G预制板(青岛海洋化工厂) 展开剂: 氯仿-甲醇-水（15：5：1），10以下放置后的下层溶液显色: 10%硫酸：乙醇， 105加热约5分钟检视: 可见光和紫外光灯（366nm）样品：1. 华重楼； 2. 华重楼；3.重楼皂苷I； 4. 重楼对照药材；5. 滇重楼；6. 滇重楼；7. 滇重楼AB薄层固定相 HPTLC与普通TLC的差别 硅胶预制薄层板（DC- Fertigplatten

8、 SIL G-25 MN ） 高效硅胶预制薄层板（ HPTLC-Fertigplatten Nano-DURASIL-20 MN ） 菊苣薄层鉴别图谱目前国内常用的薄层板：青岛海洋化工厂(玻璃)山东烟台(玻璃)天津斯利达(铝箔)快检板(铝箔)薄层固定相薄层点样以使用的器具不同，点样可分为手动和自动点样。手动点样 主要使用的器具有微升毛细管、微量注射器或配合与之相应的手动点样仪等。自动点样 采用半自动点样仪或全自动点样仪，按预设程序自动点样。 薄层点样CAMAG Linomat5 半自动点样仪CAMAG ATS4 全自动点样仪手动点样毛细管薄层点样以点样方式的不同可分为接触式点样和喷雾点样两种。

9、接触式点样 将吸有样品溶液的毛细管或针头与薄层板表面接触，从而使样品在薄层板上形成圆点状的点。多采用定量毛细管、微量注射器手动点样，有的仪器也可进行自动接触式点样。喷雾点样 点样针针杆匀速缓慢下推，针头部形成的小液滴被喷头喷出的气流吹落到薄层板上，机械控制薄层板匀速摆动，则形成均匀的条带状原点。必须采用仪器进行。薄层点样接触式点样应注意：正确选择溶解样品的溶剂原点直径一般以3mm为宜防止点样毛细管损伤薄层表面尽量避免多次点样防止点样环形色谱效应薄层点样点样环形色谱效应点样环形色谱效应： 在点样的同时，样品在原点呈环状展开，如果样品在溶剂中的溶解度很大，原点将变成空心环，称为“点样环形色谱效应”

10、。它会对展开造成不良影响。应选择样品组分溶解度相对较小的溶剂以避免此现象的产生。薄层点样喷雾点样原理针杆点样针喷头(气流)薄层板运动方向薄层点样喷雾点样的优点喷雾点样的优点：点样过程中，点样器不与薄层板接触，防止薄层板物理损伤。样品密集，有利于展开后检视。减少样品横向、纵向扩散，样品斑点窄，展开后分离度提高。自动化程度高，样品溶液不易在针壁上残留，可提高点样的准确度与重现性。薄层点样点样时应注意选择适宜的溶剂，溶剂对样品的溶解度以及溶液粘度等均会对点样质量产生影响。高效薄层板载样量较普通薄层板小，容易引起过载，应适当调整点样量。除另有规定外，点样基线距底边10-15mm，高效薄层板一般基线距底

11、边8-10mm。接触式点样原点直径一般不大于3mm，喷雾式点样所得条带宽度一般为5-10mm，高效薄层板条带宽度一般为4-8mm。点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般不少于8mm，高效薄层板样品间隔不少于5mm。薄层色谱法基本知识-操作方法-点样90手动点样薄层点样10-15一般8 35-10 单位：mm普通薄层板点样位置示意图展开 选择大小适合的展开容器，将点有样品的薄层板放入容器内的展开剂中，浸入深度以展开剂液面距点样基线5mm为宜，密闭，展开。一般上行展开8-15cm，高效薄层板上行展开5-8cm。在溶剂前沿达到预定展距后，取出薄层板，晾干，待检测。 展开方式主要有上行展开、下

12、行展开、双向展开、水平展开、环形展开等。目前国内多采用上行展开。展开边缘效应: 薄层展开后，位于薄层板边缘的样品斑点比移值较处于中间的斑点大的现象。边缘效应会使斑点扩散变形，从而影响样品定性结果的判断。薄层扫描定量时，斑点的形状直接影响到扫描后的峰高和峰宽，从而影响定量结果的准确性。预饱和是减少边缘效应的有效办法。边缘效应示意图展开预饱和：可在加入展开剂后使展开容器密闭，放置15-30分钟，待溶剂蒸汽平衡后，迅速放入点有样品的薄层板，立即密闭，展开。必要时可放置适当大小的滤纸促使展开缸内蒸汽达到饱和。15-30分钟展开展开15-30分钟倾倒展开方法2：在一侧槽内加入展开剂，薄层板置另一侧槽内，

13、密闭容器，放置15-30分钟，再迅速将薄层板放入装有薄层板的展开槽内，密闭，展开；或放置到规定时间后，保持容器密闭，小心倾斜展开容器，使展开剂进入到放置有薄层板的槽内，放平展开容器，展开。展开 此外还有薄层自动展开仪，可将薄层板按预定程序单次或多次展开，提高薄层展开的重现性。CAMAG AMD2型自动多级展开仪分离度（resolution，R）定义式：R=2d/（W1+W2）=2L0（Rf2-Rf1）/（W1+W2）相邻两峰分开的距离是平均峰宽（W1+W2）/2的几倍基线分离：基本分离：R最佳分离：W1W2d薄层扫描图l0显色 薄层色谱可针对不同的样品采用不同的显色方法和显色剂进行显色，从而可

14、专门针对某一类化合物进行检视，或对紫外和可见光下无吸收的化合物检视。极大地提高了薄层检视的专属性与灵敏度。这是薄层色谱法灵活性的一个集中体现。显色的方法有：喷雾显色 、浸渍显色 以及蒸汽熏蒸显色等。 显色显色方法1、有色化合物直接定位2、无色紫外吸收紫外灯检出斑点有荧光荧光板上有暗斑显色剂定位喷雾显色蒸气显色：碘-生物碱、氨基酸衍生物、 肽类、脂类及皂苷喷雾后加热显色显色剂：通用有碘、硫酸动画显色喷雾显色 多用玻璃喷瓶或其它专用的喷雾设备，喷雾形成的雾滴应细小并且均匀。浸渍显色 多在盛有显色剂的展开缸中进行。蒸汽熏蒸显色 可在密闭的展开缸、干燥器等容器中进行。 显色显色是导致薄层扫描定量结果精

15、密度下降的一个重要原因，在操作时应特别注意。喷雾显色时应确保喷出的雾滴大小均匀。薄层板上的的显色剂也应确保均匀。浸渍显色应防止显色溶液溶解样品所造成的样品损失和色谱斑点变形。如薄层板需加热，可使用烘箱或专用的薄层加热台。应注意加热的均匀。 常用显色剂及其使用方法10%硫酸乙醇溶液 为通用型显色剂。具有一定的腐蚀性。显色后置105下加热至斑点显色清晰，在可见光或紫外光365nm下检视。10%三氯化铝乙醇溶液 主要针对黄酮类成分显色。一般显色后置紫外光365nm下检视。碘化铋钾试液 主要针对生物碱类成分显色。茚三酮试液 针对氨基酸类化合物显色。该试剂如接触人皮肤，会使其染色，使用使应注意避免与皮肤

16、接触。 显色设备 喷雾显色：喷瓶浸渍显色：层析缸蒸汽熏蒸显色：层析缸，密闭容器显色薄层加热台电动喷瓶自动浸板器显色Desaga Chromajet DS20Desaga Chromajet DS20全自动定量控制喷雾系统自动定量喷雾可控制喷雾区域、喷雾速度以及喷雾剂用量有利与提高喷雾的重现性节约溶剂，环境污染小记录 可使用胶片照相机、摄像头以及数码相机等设备拍摄色谱结果，以光学照片或电子图形文件保存。在紫外光下拍摄时，光源发出的紫外光会干扰摄像设备感光，导致拍摄结果与肉眼观察存在一定的色差，应使用适当滤光片滤除紫外光。可见光下进行检视的薄层板也可采用电脑扫描仪记录薄层色谱结果。 记录由暗箱及摄

17、像设备组成。暗箱 配备可见光、254nm和365nm紫外光光源以及相应的滤光片。摄像设备 有胶片照相机、摄像头以及数码相机等。其中数码相机以低廉的价格、清晰的成像，以及与计算机的接口便利等优点已经成为应用的主流。记录CAMAG Reporstar 3 薄层照相系统CAMAG Reporstar 3 薄层照相系统由暗箱和数码相机组成。可提供可见光以及366、254nm的紫外光。采用WinCats工作站控制，可以满足GLP要求。记录可见光366nm展开剂：氯仿-甲醇-水 30：10：1固定相：硅胶G预制板显色剂：2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液 样品：制剂及柴胡对照药材定性和定量分析利用Rf值

18、定性（或相对比移值Rr）Rf值+斑点颜色特征（原位化学反应）多种展开剂体系展开进行验证与其他技术联用（一）定 性（二）定量1. 洗脱定量： 薄层分离取下斑点洗脱离心 取上清液进行测定2. 原位直接测定 测定方法：目视、测面积、薄层扫描薄层扫描法岛津-9301PCCAMAG Scanner 3概述 薄层扫描法 是指用一束一定波长、一定强度的紫外或可见光对薄层板进行扫描，测定薄层板上的样品斑点对光的吸收强度或斑点经激发后所产生的荧光强度，所得到图谱及积分数据可用于药品的鉴别、检查及含量测定。Kubelka-Munk方程是薄层扫描法定量的依据。 概述薄层扫描法的分类及一般原理按照扫描方式的不同，薄层

19、扫描法可分为吸收法与荧光法。薄层扫描法吸收式测定可采用反射法以及透射法两种方式进行扫描。透射法大多用于凝胶色谱的扫描，非透明界质薄层板的扫描主要为反射式吸收法或荧光法扫描。概述薄层扫描法的分类及一般原理反射法测定透射法测定概述薄层扫描法的分类及一般原理 薄层扫描可使用单波长和双波长进行测定。单波长薄层扫描适合于分离度好，背景干扰少的薄层。双波长薄层扫描时用测定波长和参比波长分别扫描薄层板，测定样品斑点在两波长下的吸收度之差。双波长扫描可减少分离度欠佳的两组分间的相互干扰，减少薄层板的背景干扰，操作时应选择待测斑点吸收较小或无吸收的波长作为参比波长。 在CAMAG Scanner 3型仪器中双波

20、长扫描又称为背景校正模式（Background Correction)。概述薄层扫描法的分类及一般原理双波长测定对薄层扫描背景的影响概述薄层扫描法的分类及一般原理参比波长测定波长双波长测定对薄层扫描背景的影响概述薄层扫描法的分类及一般原理 根据扫描时光束的轨迹不同，薄层扫描又可分为线性扫描和锯齿扫描。 线性扫描时一般采用一束比待测斑点略宽的狭窄光带沿展开方向做单向等速扫描，它适于形状较规则斑点的扫描。 锯齿扫描使用的微小正方形光束在沿展开方向运动的同时，在垂直于展开方向也进行往复扫描，扫描过程中光束的运动轨迹呈锯齿形或矩形，它对于形状不规则或浓度分布不均匀的斑点扫描重复性较好，但扫描速度较慢。

21、概述薄层扫描法的分类及一般原理线性扫描锯齿扫描概述薄层扫描法的分类及一般原理线性扫描速度较快，但对形状不规则斑点扫描结果容易产生误差。CAMAG的仪器即采用线性扫描，在操作时应注意保证展开后斑点的均匀性。只有好的薄层色谱结果才能有好的扫描定量结果。锯齿扫描对于形状不规则或浓度分布不均匀的斑点扫描重复性较好，但扫描速度较慢。岛津的CS-9301PC等仪器即可以采用此种扫描方式进行扫描。概述薄层扫描定量原理 在采用反射式吸收法测定时，入射光照射到薄层板上，一部分光透射过薄层板，一部分光发生反射，此外还有大量的散射光。因此，薄层扫描定量不遵从于Lambert-Beer定律，其样品量与反射光强度符合K

22、ubelka-Munk方程：(1-R)2其中R为反射光强，为样品吸收系数C为样品浓度，S为薄层板散射系数仪器 薄层扫描仪主要由光源、单色器、薄层板台、检测器以及工作站组成。光源 主要有钨灯、氘灯、汞灯和氙灯等。其中汞灯为线光源，可发射特征辐射光谱。单色器 用来提供一定波长的单色光。其结构与一般的紫外分光光度计类似，通常由入射狭缝、出射狭缝、平行光装置、色散元件等组成。薄层扫描仪多采用光栅为其色散元件。仪器 薄层板台 扫描时薄层板固定于薄层板台上，薄层板台可横向及纵向移动，以完成对整块薄层板的扫描。检测器 多采用光电倍增管。此外还有监测入射光能量的参比光电倍增管，以减少入射光强度变化对扫描结果的

23、影响。工作站 可设定仪器参数，接收并存储扫描结果，进行积分和其它计算。 仪器 岛津CS-9301型薄层扫描仪光路图仪器 CAMAG Scanner 3薄层扫描仪光路图 仪器性能检定仪器波长准确度的检查 可利用汞灯的特征谱线光谱对仪器的波长准确度进行检查。选取汞灯，在200-700nm波长范围内以荧光方式扫描吸收图谱，图谱中的峰位与汞灯的谱线中相应波长的差即为仪器波长精确度。汞灯谱线的已知波长为，。在CAMAG等仪器的工作站中有专用的仪器检定软件，按要求操作即可自动进行仪器波长准确度等检查。其结果应符合规定。 仪器重复性误差的测定 对薄层板上同一斑点重复多次扫描，计算结果的标准偏差。取脱水穿心莲

24、内酯对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液。取1ul点至空白薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇（4：3：）为展开剂展开，取出，晾干，双波长法扫描，连续扫描10次，扫描波长：S=263nm，R=370nm，以峰面积积分值计算相对标准偏差，锯齿状扫描应1.5%，线性扫描应 2.0%。系统适应性实验 按各品种项下要求对实验条件进行系统适用性实验，包括检测限、分离度和重复性，应符合规定。检测灵敏度 用于限量检查时，采用供试品溶液与稀释若干倍的对照品溶液在规定的色谱条件下，于同一块薄层板上点样、展开、检视，后者应呈清晰的斑点。分离度 用于鉴别时，对照品溶液与供试品溶液色谱中相应的斑点，

25、均应显示为清晰分离的斑点。用限量检查或含量测定时，要求待测斑点与相邻斑点之间有较好的分离度。 系统适应性实验分离度（R）的计算公式为： R=2(d2-d1)/(W1-W2) d2为相邻两峰中后一峰与原点的间距 d1为相邻两峰中前一峰与原点的间距 W1及W2为相邻两峰各自的峰宽除另有规定外，分离度应大于。系统适应性实验 重复性 系指同一薄层板上同一样品溶液相同浓度的的斑点，扫描结果的差异。如薄层板展开后直接扫描，在同一薄层板上平行点样的待测成分斑点（不少于4个点）的峰面积测量值的相对标准偏差应不大于3.0%；如需显色后扫描，其标准偏差应不大于5.0%。 薄层扫描定量方法 反射式吸收法测定时，Ku

26、belka-Munk方程是定量的依据，样品量与反射光强度不呈直线的线性关系。但是在一个较窄的范围内，曲线可近似为一条直线，从而采用外标一点法或两点法定量测定。如在测定范围内工作曲线直线回归线性关系较差，可根据不同仪器采用不同方法进行校正。 在岛津CS系列薄层扫描仪上，有线性补偿器（Linarizer），它可依据Kubelka-Munk方程用电路系统将的曲线校正为直线后用于定量。 CAMAG等薄层扫描仪则可使用二次方程曲线表达样品量与反射光强度之间的关系，进行定量测定。 薄层扫描定量方法含量测定时供试品溶液和对照品溶液应交叉点于同一薄层板上，供试品点样不得少于4个，对照品每一浓度不得少于2个。其

27、计算结果如薄层板展开后直接扫描，不同样品溶液计算结果的标准偏差应不大于3.0%；如需显色后扫描，其标准偏差应不大于5.0%。 注意事项除另有规定外，薄层扫描定量应使用预制薄层板。薄层色谱分析的各个步骤如点样、展开等，均会影响薄层扫描结果的准确性与重现性，因此在实验的各个步骤均应严格操作。扫描时应沿展开方向自下而上进行扫描，不能横向扫描。测定记录中应包含薄层扫描图，积分结果，工作曲线及回归方程和相关系数，及测定结果计算方法。第四章 薄层色谱法在中草药方面的应用中草药成分复杂，中药复方制剂中化学成分更复杂，自薄层色谱采用以来，为分析中药及其制剂提供了有效的方法。在这方面，我国药物分析工作者作了大量

28、的工作。主要应用在：中药材品种的真伪鉴别中药及其制剂的质量标准研究中药资源调查和质量评价中药的安全性检测（非法添加）某些中药的指纹图谱中药的快速检验利用被鉴别化合物薄层色谱中的Rf值、斑点颜色及原位光谱扫描可作为药物的鉴别方法之一，因为方法快速、简便易行，故应用广泛，在各国药典中普遍采用，我国药典，特别是一部中更是大量应用了薄层色谱法用于中药材及其制剂的鉴别和部分含量测定。 中国药典一部 1995年版 2000年版 2005年版 417 602 1523 在2005版药典中修订的内容2005版药典中对薄层色谱法作出了详细的规定，主要有以下的修订内容：明确除另有规定外，薄层扫描含量测定应使用预制

29、板。对点样位置和斑点大小做出了详细的规定，并对条带状点样以及高效薄层板的点样做出了具体规定。将薄层记录作为一个薄层操作的一部分单独列出。表明薄层记录的重要性。在2005版药典中修订的内容在方法中提出了系统适应性实验，并规定应对实验条件进行试验和调整，使其达到规定的检测灵敏度、分离度和重复性要求。 对计算结果的标准偏差进行了修改，规定如薄层板展开后直接扫描，不同样品溶液计算结果的标准偏差应不大于3.0%；如需显色后扫描，其标准偏差应不大于5.0%。明确规定扫描时应沿展开方向扫描，不可横向扫描。直接对照； 三七胶囊以三七总皂苷为参照物 喷10%硫酸乙醇溶液，105或热风加热至斑点显色清晰。供试品色

30、谱中，在与对照物色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点。 1 21：三七胶囊；2：三七总皂苷对照物.双黄连口服液中黄芩苷薄层鉴别采用芦丁为参比物。先置紫外灯（365nm）下直接观察，供试品色谱在与芦丁参照物色谱相应位置附近，应显相同颜色的斑点；再喷1%三氯化铝乙醇溶液，紫外灯（365nm）下观察，芦丁斑点变为亮黄绿色，上述供试品斑点不变色。 1 2 1 2 紫外光(365nm)下直接观察 1%三氯化铝乙醇溶液显色 紫外光(365nm)下观察图 1 双黄连口服液样品 2 芦丁对照品双黄连口服液中黄芩苷薄层鉴别采用芦丁为参比物。先置紫外灯（365nm）下直接观察，供试品色谱在与芦丁参照物色谱相应位置

31、附近，应显相同颜色的斑点；再喷1%三氯化铝乙醇溶液，紫外灯（365nm）下观察，芦丁斑点变为亮黄绿色，上述供试品斑点不变色。 1 2 3 1 2 3紫外光(365nm)下直接观察 1%三氯化铝乙醇溶液显色紫外 光(365nm)下观察图1 双黄连口服液样品 2 芦丁对照品 3黄芩苷对照品应用实例不同条件下检视可以避免一些假阳性结果产生可见光365nm展开剂：氯仿-甲醇-水 30：10：1固定相：硅胶G预制板显色剂：2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液 样品：制剂及柴胡对照药材 制备薄层色谱旋转薄层加压薄层薄层原位水解 用于苷类成分的水解, 鉴定糖的种类, 可 进行单相或双相展开，辅助苷类成分的结

32、构鉴定。常用展开剂1、对展开剂的要求 对被测组分有良好的溶解性 有良好的分离效果 斑点圆整不拖尾 被测组分Rf值最好在，组分较多，最好在 展开剂不能和被测组分发生反应 沸点适中，粘度较小石油醚-乙酸乙酯系统正己烷-乙酸乙酯-甲醇(6.4:3.6:0.5), 氨蒸气饱和乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水 氯仿-甲醇系统氯仿-甲醇-水 (65:35:10)下层氯仿-甲醇-水 (2.5:1:0.5)氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水 (15:40:22:10) 正丁醇-冰醋酸-水 (4:1:5)薄层板及其处理薄层板表面应均匀、平整、光滑，无麻点、无气泡、无破损及污染。薄层板放置过久被杂质污染，可用氯仿、甲醇或二者的混合溶剂展开预洗。改性薄层板可在自制薄层板时加入改性剂，或用改性剂浸渍薄层板制备。薄层板使用前可于110下活化30分钟，置干燥器或密闭容器中保存备用。预洗后的薄层板也应重新活化。Camag Linomat-5半自动点样仪操作Linomat 5 半自动点样仪点样方式 喷雾点样可使用的点样针体积 100，500ul可使用的薄层板大小 1010，1020，2010，2020cm软件 WinCats薄