非法酵革兰阴性杆菌特征及鉴定思路内容课件

1、非法酵革兰阴性杆菌特征及鉴定思路张秀珍第1页，共70页。内容非发酵细菌分类主要非发酵细菌特征非发酵细菌耐药特征临床最常分离非发酵细菌鉴定第2页，共70页。非法酵革兰阴性杆菌感染特点引起临床各科室 人体各部位感染鉴定比肠杆菌科复杂耐药谱广 临床治疗困难第3页，共70页。非发酵菌的分类和生物学特性不发酵葡萄糖有氧方式代谢 包括不同的科、属、种缺乏糖酵解酶类代谢必须在有氧环境中进行 非发酵菌 Nonfermentative Bacilli不是细菌分类的正式名称是对一大群细菌的统称第4页，共70页。非发酵菌的分类和命名与肠杆菌科不同，非发酵菌不能简单地归于具有明显特征的某一菌科，且很多非发酵菌的正确分

2、类问题仍未解决 主要的非发酵菌分为6个科 1 分类不明其余不属于以上菌科的非发酵菌暂时归类于分类学尚未明确的细菌第5页，共70页。非发酵细菌原分类: 假单孢菌科 奈瑟菌科 未分科第6页，共70页。非发酵细菌现代分类假单孢菌科 产碱杆菌科 甲基球菌科 根瘤菌科 黄杆菌科 莫拉菌科 未定第7页，共70页。临床常见非发酵菌的分类 科 名 属 名 假单胞菌科假单胞菌属寡氧（窄食）单胞菌属伯克菌属甲基球菌科甲基杆菌属产碱杆菌科产碱杆菌属鲍特菌属根瘤菌科土壤杆菌属黄杆菌科黄杆菌属金色杆菌属稳杆菌属威克菌属伯杰菌属无色杆菌属莫拉菌科莫拉菌属不动杆菌属分类不明玫瑰单胞菌属人苍白杆菌鞘氨醇菌属第8页，共70页。

3、与鉴定方法相关的分组第一组 有动力,极鞭毛: 假单胞菌科 rRNA群IV 第二组 有动力,周鞭毛: 产碱杆菌科 产碱杆菌属 第三组 无动力,OXI(+): 黄杆菌科 黄杆菌属 华丽杆菌属 稳杆菌属第四组 无动力,OXI（-） 不动杆菌属第9页，共70页。非发酵菌的分类 假单胞菌科 rRNA I群rRNA III群 rRNA V群rRNA IV群rRNA II群假单胞菌属伯克菌属丛毛单胞菌属短波单胞菌属寡养（窄食）单胞菌属有动力 极鞭毛第一组第10页，共70页。假单孢菌科根据rRNA-DNA同源性研究分为5组rRNA-I:假单孢菌属 铜绿 荧光 恶臭 门多萨 产碱 斯氏 类产碱第11页，共70页

4、。假单胞菌属生物学特性G-杆菌 直或微弯 一根或多根极鞭毛氧化利用葡萄糖氧化酶阳性第12页，共70页。rRNA II伯克菌属:类鼻疽 ; 葱头;唐菖蒲; 皮氏;第13页，共70页。伯克菌属生物学特性所有rRNAII群的细菌归入一个新的菌属伯克菌属包括13个种 其中假鼻疽伯克菌葱头、唐昌蒲、皮氏伯克菌均以前称为假单胞菌第14页，共70页。伯克菌属生物学特性葱头伯克菌 G-杆菌 多根极鞭毛氧化利用葡萄糖氧化酶阳性 弱阳第15页，共70页。伯克菌属生物学特性葱头伯克菌黄色菌落赖氨生长无特殊要求SXT 敏感 常用药物 氨基糖甙类 天然耐药酸阳性 植物病原菌葱头腐烂和人类的坏疽水源和潮湿表面第16页，共

5、70页。唐菖蒲伯克菌伯克菌属生物学特性黄色无荧光菌落氧化酶阴性不分解麦芽糖ONPG 阳性尿酶阳性第17页，共70页。伯克菌属生物学特性皮氏伯克菌生长缓慢3个生物型12根鞭毛针尖样菌落第18页，共70页。伯克菌属生物学特性类鼻疽伯克菌人和动物类鼻疽病 生长有特定区域 存在于赤道南北纬20度之间的土壤和不流动的水中，主要泰国和越南。大多数感染无症状，只能通过血清学诊断刺激性泥土味生长无特殊要求第19页，共70页。rRNA III丛毛菌科:丛毛单胞菌属食酸菌属第20页，共70页。丛毛单胞菌科生物学特性 具有特征性的长极丛鞭毛 食酸丛毛单胞菌最常分离 通过OF果糖 甘露醇 乙酰胺阳性 与其它菌相鉴别

6、唯一橘黄色吲哚反应 OF葡萄糖培养基上不产酸第21页，共70页。丛毛单胞菌属生物学特性丛毛单胞菌属土生单胞菌 不是人类致病菌食酸丛毛单胞菌 机会感染菌唯一橘黄色吲哚反应睾酮丛毛单胞菌属 极为少见第22页，共70页。食酸菌属食酸菌属生物学特性敏捷食酸菌中泛食酸菌德氏食酸菌氧化酶阳性有动力氧化利用糖类临床意义不明第23页，共70页。rRNA IV短波单胞菌属缺陷短波单胞菌泡囊短波单胞菌第24页，共70页。短波单胞菌属生物学特性短波单胞菌属氧化酶阳性不分解糖 醇或反应很弱 短波 紧密螺旋单极鞭毛生长缓慢 48h 可见菌落 深黄到橘黄色素 七液苷阳性 区别于其他产碱假单胞菌临床少见 体弱 免疫力低下患

7、者感染 菌血症第25页，共70页。rRNA V寡养单胞菌属或窄食单胞菌属嗜麦芽寡氧单胞菌第26页，共70页。嗜麦芽寡养单胞菌名称变化寡养单胞菌属生物学特性1961年嗜麦芽假单胞菌 1983年嗜麦芽黄单胞菌1993年嗜麦芽寡养（窄食）单胞菌寡养(窄食)单胞菌属第27页，共70页。寡养单胞菌属生物学特性无溶血呈淡绿色或浅绿色有氨水味 血平板菌落粗糙菌落特点第28页，共70页。氧化酶阴性葡萄糖氧化缓慢麦芽糖快速氧化赖氨酸 DNA 阳性寡养单胞菌属生物学特性生化反应第29页，共70页。耐药特点寡养单胞菌属生物学特性天然耐药泰能SXT 敏感氨基糖甙类第30页，共70页。不定菌属的非发酵菌金色单胞菌属黄色

8、单胞菌属（浅黄假单胞菌）浅金黄单胞菌栖稻黄色单胞菌（栖稻黄色假单胞菌）第31页，共70页。不定菌属的非发酵细菌鞘氨醇希瓦菌属 希瓦16个种深海羽田少动鞘氨醇菌 有意义单胞菌属第32页，共70页。鞘氨醇单胞菌:16个 少动鞘氨醇有意义希瓦菌:希瓦 深海第33页，共70页。非发酵菌的分类第二组有动力 周鞭毛土壤杆菌属医学上唯一有意义的菌属根瘤菌科 产碱杆菌科 产碱杆菌属 鲍特菌属第34页，共70页。非发酵菌的分类条件致病菌 院内感染产碱杆菌属木糖氧化产碱杆菌木糖氧化亚种脱硝亚种粪产碱杆菌皮氏产碱杆菌第35页，共70页。非发酵菌的分类产碱杆菌的主要生物学特性菌种硝酸盐丙二木糖葡萄糖粪产碱-+-木糖氧

9、化亚种+脱硝亚种+-皮氏产碱杆菌-第36页，共70页。产碱杆菌属生物学特性产碱杆菌属粪产碱杆菌木糖氧化产碱杆菌木糖氧化亚种 脱硝亚种 皮氏产碱杆菌（1986年描 述）第37页，共70页。产碱杆菌属生物学特性粪产碱杆菌 临床标本中最常见菌落细小 边缘不规则在碳水化合物培养基上强烈碱性反应还原亚硝酸盐 不还原硝酸盐第38页，共70页。黄杆菌科黄杆菌属 金色杆菌属稳杆菌属威克菌属伯杰菌属非发酵菌的分类第三组无动力 氧化酶阳性分类学不明 鞘氨醇菌属寡源菌属莫拉菌属华丽杆菌属第39页，共70页。最新分类变动很大 金色杆菌属粘黄杆菌产吲哚黄杆菌大比目鱼黄杆菌脑膜败血黄杆菌大菱鲆黄杆菌黄杆菌科生物学特性第4

10、0页，共70页。被重新分为短稳杆菌归为新的属Myroides，水生 约翰 食果胶嗜冷 嗜糖 琥珀黄杆菌 黄杆菌属吲哚都是阴性芳香黄杆菌短黄杆菌在人类临床标本中尚未发现黄杆菌科生物学特性第41页，共70页。嗜醇鞘氨醇杆菌黄杆菌科分类及生物学特性临床标本中遇到的已有新的归属的种 脑膜败血金色杆菌IIb黄杆菌（伯杰手册归入金粉黄杆菌） 短稳黄杆菌多食鞘氨醇杆菌第42页，共70页。第IV组 无动力 氧化酶阴性 不动杆菌属第43页，共70页。不动杆菌的分类主要生物学特性新一版伯杰手册 醋酸钙不动杆菌开始被归于奈瑟菌科但最近又被归于莫拉菌科DNA-DNA杂交 营养特征17个基因种利用生化特征 生长试验可区

11、分其中 16个基因种 7个基因种有菌名第44页，共70页。不动杆菌的分类主要生物学特性只有7个基因种有菌名：基因种1醋酸钙 基因种2 鲍曼基因种4溶血 基因种5 琼氏 基因种7 约翰逊 基因种8 洛菲不动杆菌其余基因种未命名第45页，共70页。不动杆菌的分类主要生物学特性生物学特性血琼脂菌落圆形 光滑 边缘整齐灰白色一般无色素 有的产生黄褐色色素 G-球杆菌 常成对排列 不易脱色常染成假阳性 拉丝试验容易成假阴性有的种产生溶血第46页，共70页。不动杆菌的主要生物学特性氧化酶阴性 触酶反应不定吲哚 H2S 甲基红 VP反应均阴性不产生赖、鸟氨酸脱羧酶和精氨酸双水解酶有的种能产生苯丙氨酸脱氨酶所

12、有种不能还原硝酸盐大多数能利用枸橼酸盐无动力，硝酸盐还原阴性第47页，共70页。非发酵菌的生物学特性G-杆菌 球杆菌氧化酶大多阳性 少数阴性 多数菌属有动力 少数无动力极生 周生鞭毛 无鞭毛OF糖大多氧化型 少数产碱或不利用第48页，共70页。非发酵菌的鉴定临床标本中最常见 铜绿鲍曼不动 嗜麦芽窄食单胞菌选择少数关键性试验便可容易鉴定快速为临床医生提供信息 简便法第49页，共70页。非发酵菌的鉴定 分组法非铜绿 鲍曼不动 嗜麦芽必须增加其他试验进行种的鉴定根据动力和氧化酶将各种临床上重要的非发酵菌分为四个部分第50页，共70页。非法酵革兰阴性杆菌的共同特点在中国兰或麦康开选择培养基上呈不发酵乳

13、糖的菌落(中国兰上粉红色)氧化酶大多阳性有鞭毛或无鞭毛革兰阴性杆菌或球杆菌不能发酵糖色素第51页，共70页。鉴定非发酵革兰阴性杆菌的基本步骤初始菌落识别:在中国兰或麦康开培养基上呈不分解乳糖的菌落 氧化酶革兰染色色素确认非发酵细菌O/F 鞭毛染色选择鉴定系统API 20NE ATB VIEK2Compact等第52页，共70页。临床常见非发酵革兰阴性细菌的耐药特征铜绿假单孢菌不动杆菌嗜麦芽窄食单孢菌第53页，共70页。 绿脓杆菌耐药机制膜蛋白缺失使通透性下降高产ampC酶; 产ESBL;产金属酶泵出机制第54页，共70页。铜绿假单孢菌铜绿假单胞菌的细胞外膜上没有大多数革兰阴性细菌所具有的典型的

14、高渗透性孔蛋白，它的孔蛋白通道对小分子物质的渗透速度仅为典型孔蛋白通道的1%。 第55页，共70页。产KPC酶国内：已在肠杆菌科的多个菌属中有报道。肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希菌、产酸克雷伯菌、沙门菌属、弗劳地柠檬酸杆菌和铜绿假单胞菌等。该类酶除阴沟肠杆菌可有染色体介导外，其他各类细菌均可为质粒介导，已成为临床治疗难题第56页，共70页。如何检测?产KPC酶的菌株用常规药敏试验不容易检出。CLSI关于碳青霉烯类的判断标准： 厄他培南2g/ml 亚胺培南、美罗培南4g/ml 因此，MIC2g/ml 或4g/ml的菌株仍可判断为敏感的警惕：在常规药敏中如遇第三、第四代头孢菌素以及其他的-内酰

15、胺类耐药的菌株均应该进行稀释法测定碳青霉烯类的对这些菌株的MIC。第57页，共70页。检测KPC酶的最佳底物厄他培南是检测KPC酶的最佳底物。建议1：可将该药列为常规药敏试验的品种建议2：对所有具有ESBLs/AmpC酶样表型（即对第三、第四代头孢菌素耐药）的肠杆菌科细菌采用纸片法或MIC法（E-试验）进行厄他培南（和其他碳青霉烯类）的测定。如MIC为2或4g/ml应视作有产KPC酶和其他碳青酶霉烯酶的可能。这时应与临床医师联系，并将该菌株送往参考试验室作进一步的研究。第58页，共70页。改良的Hodge 试验0.5麦氏浊度单位大肠埃希菌 ATCC25922涂布MH平板中间贴亚胺培南（10g）

16、纸片接种待检菌的无菌接种环自 纸片外缘向平板边缘划线35过夜培养结果判断：亚胺培南抑菌圈内出现待检菌矢状生长者为产碳青霉烯酶 菌株PCR 扩增试验、DNA测序证实为某种KPC酶E coli ATCC25922KPC+？KPC -KPC+？第59页，共70页。不动杆菌的耐药机制对多种窄谱内酰胺酶耐药由于TEM1和CARB型内酰胺酶对新型三代头孢菌素耐药是因为产大量染色体头孢菌素酶和超广谱的TEM酶第60页，共70页。 不动杆中最主要的碳青霉烯酶是D类酶 OXA-23、24、25、26、27、40、49、51、 54、55、58、60该酶能水解亚胺培南、青霉素，但不水解三代头孢菌素.不动杆菌主要耐

17、药机制第61页，共70页。不动杆菌中还产IMP或VIM型金属酶，该酶水解底物范围广，包括碳青霉烯类、青霉素类和头孢菌素抗生素，不被克拉维酸等酶抑制剂抑制，但能被EDTA、2-巯基丙酸抑制 第62页，共70页。嗜麦芽窄食单胞菌常感染严重衰弱和免疫力低下病人在医院水龙头、污水排水孔呼吸机湿化器均可分离到可引起菌血症、心内膜炎、医院获得性肺炎、尿路感染、皮肤、软组织静脉放置插管是引起菌血症的主要原因，死亡率达4169第63页，共70页。嗜麦芽窄食单胞菌的耐药机制细胞壁对抗生素的亲和力极差膜蛋白对氨基糖甙渗透力低下药泵外排机制产二种内酰胺酶L1 内酰胺酶L2内酰胺酶（金属酶） （头孢菌素酶）第64页，共70页。细菌定植的定义定植是个”相对”的概念 定植 感染宿主因素细菌本身因素第65页，共70页。下呼吸道感染中,