钙、镁、磷的测定课件

1、实验血清钙、镁、磷的测定西安医学院检验教研室 第1页，共38页。（一）血清钙测定西安医学院检验教研室 第2页，共38页。血浆钙的存在形式血钙可扩散钙非扩散钙离子钙可溶性不解离的钙盐占血浆总钙60%，能透过毛细血管壁与血浆蛋白结合，占血浆总钙40%，不能透过毛细血管壁血浆中直接发挥生理作用的钙相关知识 第3页，共38页。血钙的测定包括总钙测定和离子钙测定法。总钙测定方法包括同位素稀释质谱法-决定性方法，原子吸收光谱法(AAS) 参考方法、分光光度法和络合滴定法等。第4页，共38页。分光光度法中以邻甲酚酞络合酮法（OCPC）、甲基百里香酚蓝比色法和偶氮胂比色法（Arsenazo colorimet

2、ry）最常用。离子钙测定目前临床最常用离子选择电极法。第5页，共38页。血清总钙测定邻甲酚酞络合酮比色法西安医学院检验教研室 第6页，共38页。掌握：OCPC法测定血清总钙的基本原理及提高准确性的方法。 熟悉：血清总钙测定的注意事项。了解：总钙与离子钙的关系 实验目的 第7页，共38页。 邻甲酚酞络合铜是金属络合染料，同时也是酸碱指示剂，在碱性条件下与钙络合，生成紫红色络合物。在600nm处有特征吸收，用8-羟基喹啉以消除标本中镁离子的干扰，与同样处理的的钙标准液比较即可测得出血钙含量。原理第8页，共38页。试剂与器材 1.R1：乙醇胺缓冲液。2.R2：OCPC、8-羟基喹啉3.氯化钙标准液：

3、2.50mmol/L工作液：取R1和R2等量混合即为工作液。4.分光光度计第9页，共38页。操作步骤 取试管3支，按下表操作。加入物（ml） 空白管 标准管 测定管工作液 3.0 3.0 3.0 蒸馏水 0.06 标准品 0.06 血清 0.06 充分混匀， 37水浴5分钟，在波长600nm处，以空白管调零，读取吸光度值。第10页，共38页。计算 参考范围：2.032.54mmol/L第11页，共38页。用血清或肝素抗凝血浆；不能用钙的螯合剂及草酸盐做抗凝剂的标本；胆红素可产生负干扰，可用血清对照消除。镁离子也可与OCPC试剂产生紫红色络合物，因此，试剂中加入8-羟基喹啉是起络合镁离子的作用，

4、以消除镁离子的干扰。注意事项 第12页，共38页。pH对OCPC试剂的显色有很大影响，pH10.512时，反应的敏感性最好，所以选用pH11.0为宜。此法对钙离子有很高的敏感性，测定器皿要洁净，所有试剂应在聚乙烯瓶内保存；且配制试剂最好用高质量的去离子水或重蒸馏水。第13页，共38页。临床意义 血钙增高常见于下列疾病：甲状旁腺机能亢进症、代谢性酸中毒、维生素D增多症、多发性骨髓瘤、恶性肿瘤等。血钙降低见于下列疾病：甲状旁腺机能减退、慢性肾炎尿毒症、佝偻病和软骨病、大量输入柠檬酸盐抗凝血等。第14页，共38页。西安医学院检验教研室 （二）血清镁测定第15页，共38页。镁是人体内含量占第四位的金属

5、元素，50%以磷酸盐、碳酸盐、氟化物的形式存在于骨骼中，45%在细胞内液，细胞外液中仅占5%。血清中镁55%为离子型，15%与磷酸盐、枸椽酸盐等形成复合物，30%与蛋白结合。相关知识 第16页，共38页。镁测定的参考方法是原子吸收分光光度法，国内外多数实验室采用金属显色染料直接显色和比色分析，其中甲基麝香草酚蓝、钙镁试剂广泛应用于镁的自动分析或手工操作。第17页，共38页。血清镁测定钙镁试剂比色法西安医学院检验教研室 第18页，共38页。掌握：钙镁试剂比色法测定血清镁的基本原理。熟悉：有关试剂在反应中的作用。了解：本法检测过程中的注意事项及血镁检测的临床意义。实验目的 第19页，共38页。 血

6、清中镁在碱性环境中与Calmagite染料生成紫红色络合物，颜色的深浅与镁的浓度成正比。与同样处理的标准品比较，可求得镁的含量。溶液中加入EGTA可消除钙的干扰，使用表面活性剂可使蛋白胶体稳定，不必去除蛋白质而直接测定镁。原理第20页，共38页。试剂与器材 1R1：氢氧化钾、表面活性剂。2. R2： Calmagite 、EGTA3. 氯化镁标准液：1.0mmol/L工作液：取R1和R2等量混合即为工作液。4.分光光度计第21页，共38页。操作步骤 取试管3支，按下表操作。加入物（ml） 空白管 标准管 测定管工作液 3.0 3.0 3.0 蒸馏水 0.03 标准品 0.03 血清 0.03

7、充分混匀， 室温放置3分钟，在波长546nm处，以空白管调零，读取吸光度值。第22页，共38页。计算 参考范围：0.71.2mmol/L第23页，共38页。1.溶血标本对本测定有明显的正干扰；脂血标本应去脂处理后，方可测定。2.试剂宜置于塑料瓶中保存。显色剂已褪色则不可使用。3.试剂防止污染，如自来水、器皿清洗不洁、试剂交叉污染等。4.溶液中的EGTA可消除钙的干扰；表面活性剂则可消除蛋白质的干扰。5.适合于手工操作及大多数自动化分析仪注意事项 第24页，共38页。临床意义 血清镁增高：服用治疗剂过量、肾脏疾病、内分泌疾病（甲状腺机能减退等）、多发性骨髓瘤等。血清镁降低：镁摄入减少、镁由消化道

8、丢失、镁由尿路丢失、内分泌疾病（甲亢、醛固酮增多症等）等。第25页，共38页。西安医学院检验教研室 （三）血清磷测定第26页，共38页。血清中的无机磷主要有H2PO4-和HPO42-两种磷酸盐阴离子。由于这两种阴离子在不同的pH环境中能快速相互转换，因而不能确切的说出无机磷酸盐的分子量。目前常用的测定无机磷的方法有磷钼酸还原法、染料结合法、紫外分光光度法、黄嘌呤氧化酶比色法、同位素吸收质谱法和原子吸收分光光度法。相关知识 第27页，共38页。磷测定的决定方法是同位素稀释质谱法。WTO推荐的常用方法是比色法。目前我国推荐的常规方法是以硫酸亚铁或米吐尔（对甲基氨基酚硫酸盐）作为还原剂的还原钼蓝比色

9、法。第28页，共38页。血清磷测定还原钼蓝法西安医学院检验教研室 第29页，共38页。掌握：还原钼蓝法测定血清磷的基本原理。熟悉：血清磷测定的临床意义了解：本法检测过程中的注意事项实验目的 第30页，共38页。 在酸性溶液中磷与钼酸铵起反应生成磷钼酸复合物，对甲基氨基酚硫酸盐（米吐尔）还原生成钼蓝，与同样处理的标准液进行比较，可求得血磷的含量。原理第31页，共38页。试剂与器材 1磷工作液：钼酸铵溶液、米吐尔溶液。2. 磷标准液：磷酸二氢钾1.29mmol/L3. 分光光度计第32页，共38页。操作步骤 取试管3支，按下表操作。加入物（ml） 空白管 标准管 测定管工作液 4.0 4.0 4.

10、0 蒸馏水 0.1 标准品 0.1 血清 0.1 充分混匀， 37水浴5分钟，在波长650nm处，以空白管调零，读取吸光度值。第33页，共38页。计算 参考范围：成人 0.971.62mmol/L 儿童 1.452.10mmol/L第34页，共38页。1.血标本宜采用血清或肝素抗凝的血浆。应避免使用枸橼酸钠、EDTA和草酸盐作为抗凝剂。2.标本应避免溶血，因为红细胞中含有高浓度的有机磷酯，在贮存期间易水解生成无机磷。3.米吐尔试剂宜少量配置，放置时间不宜过长。4.血清中磷是稳定的， 4可稳定数天，冷冻时可稳定数月。避免水分的蒸发注意事项 第35页，共38页。临床意义 血清磷增高：肾小管对磷的重吸收增强（甲状旁腺机能减退）；排泄障碍（慢性肾炎晚期、尿毒症）；维生素D过多；多发性骨髓瘤、淋