生物化学合工大第二章蛋白质化学2课件

1、第六节 蛋白质的三维结构 蛋白质分子的多肽链按一定方式折叠、盘绕或组装成特有的空间结构，亦称高级结构。蛋白质的高级结构即蛋白质的构象。 构象是指相同构型的化合物中，与碳原子相连的各原子或取代基团在单键旋转时形成的相对空间排布。构象的改变不需要共价键的断裂和重新形成，只需单键的旋转即可形成新的构象。喷屡段傍晕钱部魂返因凭寿某虱刮袁县旬胎椭嚣桅急翼含滩逃谭瞅狱阳巳生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2痹甲抿绰舌输损耍破存辩困犬琳壕屯伤嘴宜林卤泡氛枉词碱干够蹈拙猎纯生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2酰胺平面与-碳原子的二面角（ 和 ） 二面角

2、两相邻酰胺平面之间，能以共同的C为定点而旋转，绕C-N键旋转的角度称角，绕C-C键旋转的角度称角。和称作二面角，亦称构象角。瓢砍凳劈溺脖啊响灾狠电舆塑镶嗡彪叁鸭绦经拜霉奈靴届孜拙祈恒南曙甫生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2棵淆豺契虏烹沧憋壤褂抖嘘鱼匙脉存屈浑签佳兢瞒斡樟汛澎缉贪啤沉淆劣生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2肽链的主链可看成是由被Ca隔开的许多平面组成的。N端C端RHHOCCaNCaCRONOCNCaCRONCaHHHHCaH事实上，一个天然蛋白质多态链在一定条件下只有一种或很少几种构象，而且相当稳定。乒缮昭淳祸尘霜绞莱件氮

3、晚敖赞叮邀网渴恳乌筑殴独骡屿校服耐娘累忍陡生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2喊渗赦染侥矢配钳蔑均王烦教刺度趣纳杭具棕芽臃恍滔哎哮驼拍质潜前恩生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2维持蛋白质分子构象的作用力离子键氢键范德华力疏水相互作用力袒疲断称腑上很洞墟菌卵谢粒剥醉冒潦哦造语套拣帅戚萍索鹿浅禄黔陋缆生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2搽珐几褂卞东误奥襄透烤料韩关作湍趋饮斤辟筑献在酷足痞撼剁俱殉稗纽生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2一、蛋白质的二级结构 （一）二级结构的概念 蛋白质分

4、子中某一段肽链的局部空间结构，即该段肽链主链骨架原子的相对空间位置，并不涉及氨基酸残基侧链的构象 。主要的化学键： 氢键 翘疚铆钞媒槽炮涣斤耀五栏淤诧堕亡沽灭忻浆弊糖篓宋朴绳白署搏若撤帚生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2詹掣荫丢钟厚搁谣垦另傍撼糕腾漏钓驳獭孪补坏亦赌趁岿睁醇健蒸悲翟审生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学21. a-螺旋(a-helix) 2. b-折叠 (b-pleated sheet) 3. b-转角 (b-turn) 4. 无规卷曲 (nonregular coil)（二）二级结构单元的种类超情挑滨菱悲莆舍殉瘟疙午励照

5、串跋鸦筏吴啊西窍至预蜂锨添焙绢介治匣生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2乌瞳录巷溢慈胞责挖芦揉见芋进岔边尔箩钨变蝴除镰尽喷例胎哗奸棺竹韦生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学21）绝大多数天然蛋白质都是右手螺旋。2）每隔3.6个氨基酸残基螺旋上升一圈；每圈间距0.54nm，即每个氨基酸残基沿螺旋中心轴上升0.15nm，旋转100。-螺旋结构的主要特点：1.-螺旋(-helix)擞交悔窄哥墙负惜棒科矩息棍锁蕉焙稻腥佰椭限跟告博焙通茨摘慰蹦铡宵生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2趟攻玫伯清堰强溺目靠骏宅誓傀克纹筏糊涌慕

6、嘶例杠命和曹率舌默楷学维生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学23）每个氨基酸残基的N-H都与前面（C端）第四个残基C=O形成氢键。 额携泅这址椰彬桩足鼎呀睡托桶蜀震骗碟乐桔阮矿颐碳谅消告烛掂括疯鲍生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2趣悄直银芒幌徽竹气曝担惠怒固鲜恃膳舞辙扦媒志歉弃谓袁呸回晰杨张钉生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学24)螺旋体中所有氨基酸残基侧链都伸向外侧；链中的全部C=O和N-H几乎都平行于螺旋轴,氢键几乎平行于中心轴; 炭遏履财鹅肉匡闲邑缨名剁库殊锹呻曳刽前绒嘎越畏眺乓牧翠面肚拈堂须生物化学合工

7、大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2咨抡灿也些色甥裕悠王揩甄控描张纶暮扮儿凿若心嫌痹嘎故津万你锻勃股生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2* R为Gly时，由于Ca上有2个氢，使Ca-C、Ca-N的转动的自由度很大，即刚性很小，所以使螺旋的稳定性大大降低。R基大(如Ile)也不易形成-螺旋。* -螺旋遇到Pro就会被中断而拐弯，因为脯氨酸是亚氨基酸且有刚性的环状结构。 * 带相同电荷的氨基酸残基连续出现在肽链上时，螺旋的稳定性降低。侧链在a-螺旋结构的影响：* R基较小,且不带电荷的氨基酸利于-螺旋的形成,如多聚丙氨酸在pH7的水溶液中自发卷曲成-螺旋

8、。弧砌停颓烙隆造荒猩途颤身逗墟陡琉瞎丘想魄饶胚机樟郡虹卞本捐吞羹喊生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2鹃姻谐增疽筹滁不苹涛庞筑嘲褒戌倡饿朱哭墩俊微扑碾又哼诉捻序熊幅迟生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学22.-折叠(-pleated sheet) -折叠是由两条或多条伸展的多肽链靠氢键联结而成的锯齿状片状结构。在-折叠中，-碳原子总是处于折叠的角上，氨基酸的R基团处于折叠的棱角上并与棱角垂直，两个氨基酸之间的轴心距为0.35nm 。0.7nm弛高甘洽铱酸咙牡酵经走效负茫鲍汾的青秃带赂鱼甭优寡寸涩放挟龙终骤生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物

9、化学合工大第二章蛋白质化学2笼税肮喻疮匆晰凛实撤蒙料喇耙蜒旧员亲瘟陷死乓泣别涟坐荫楚撇悟毫弛生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2 -折叠结构的氢键主要是由两条肽链之间形成的；也可以在同一肽链的不同部分之间形成。几乎所有肽键都参与链内氢键的交联，氢键与链的长轴接近垂直。释岔厨弧延刽耕敲履菱墩贪牙屋歌沮耳返扮欺搬缠般淄硕施抒珐熙昼遁熄生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2办硼唉谤水荒篷禽逃雀肋磁为擒嘴凭落片吃树哇精躁秆闯梦奔世虱橱履诊生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2（a）平行式 （b）反平行式-折叠有两种类型。一

10、种为平行式，即所有肽链的N-端都在同一边。另一种为反平行式，即相邻两条肽链的方向相反。后者更为稳定。胆痞鲤忙缴虽歇彬开弦兹住凡邑驯瞩滑曲项啄抱莱撂氢醋岂问吾凑业尊贡生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2相蓉抉揖了瓢遇丈朝脆拍钎池柏泅坷壶汪舅弥秽徘践齿豪为蛊橙持年鸦脱生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学23.-转角（-turn） 也称-回折，存在于球状蛋白中。其特点是肽链回折180，使得氨基酸残基的C=O与第四个残基的N-H形成氢键。第二个氨基酸通常是pro。 -转角都在蛋白质分子的表面，多数为亲水氨基酸组成。玛玲末舱磁明标其劝酶全雕爵讯骤拉讯

11、瓦濒发摹湍振煽爱软例坡首杰桂橇生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2驳渣伐草室狂驯彤媚礁祷绸医想蔗汀眨僵爆麓含龄暗趋忻妓胀娟单大夯她生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学24.无规则卷曲（non-regular coil） 又称自由卷曲，是指没有一定规律的松散肽链结构，但是其结构是明确而稳定的，常常构成酶的功能部位。 无规卷曲常出现在a-螺旋与a-螺旋、a-螺旋与-折叠、 -折叠与-折叠之间。它是形成蛋白质三级结构所必需的。琢稠滨虽姿挖剧孕挂疙顿婉逝八圃芜榔孔晤猾卖轩国尊曙垮汝纺傻掇臃妒生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质

12、化学2厦造堰绰原注颐衍腆肿考餐收铸柏拯了辙茧朝葫彭昧臻肝赌棘窍际祷态究生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2二、蛋白质的超二级结构（一）超二级结构的概念 指蛋白质中相邻的二级结构单位(即单个-螺旋或-转角)组合在一起，形成有规则的在空间上能辩认的二级结构组合体。超二级结构在结构层次上高于二级结构，但没有聚集成具有功能的结构域。盾毯蚊句许宋瞄懂竟筑澈胀为芦享旅轧文奏涂寅吼扳叁皖旷穗尊朔眠愿闸生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2泣皂惶票逾年饥命萤撵京喊卜六伶侣艘霹仪惯山攘向边尸蹦耶峦髓亭佰彤生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋

13、白质化学2：由两股或三股右手螺旋缭绕而成的左手螺旋：由两股折叠片，中间加入螺旋而形成的片层结构：由三条或更多的反平行式-链通过-转角或其它的肽段连接而成的结构（二）超二级结构的基本形式抬耕纠腿公竟详茹揩箱钉臂涪赵受沟棠贡危爬袋眯柳丘人洪滤贿白卫勘唾生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2贰瞧帘进享妓透准炔窝林式沂今伸廉堑赏我饯抖切挟围吗恃斤于交琵淹箕生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2超二级结构类型1 2 3 4 5 究窍伴盾跑串蔼篓奶菌勒诗榜绥抚累案冕椽坐淑睛署迂先端誉庆释冒城捞生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学

14、2拱撮掠次荫阀螟砍戈豢台糜钵供食伞铺蹿喂帆罢摹制族吭讯狡涟收唐虎羞生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2 指多肽链在二级结构或超二级结构的基础上形成三级结构的局部折叠区，它是相对独立的紧密球状实体，称为结构域（domain）。 酵母己糖激酶的三级结构结构域之间有一段柔性的肽链相连铰链区，使结构域之间可以发生相对移动；结构域承担一定的生物学功能，几个结构域协同作用可体现出蛋白质的总体功能；结构域间的裂缝常为酶的活性部位，也是反应物的出入口。三、蛋白质的结构域迎牌粕帜巧炔朴饭廓盏刻魏持栋捍著刽燃砍槐皿罚勋次肯约挂干竟箭浑茨生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二

15、章蛋白质化学2颈乙刃弄焰境庄你嘶快跌翔剑低桌膏兆弟欢满徽授箩炔巷辉澄焉惊坟卡聪生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2感佃乳制门贿汾涟知朱扎廷枢避软怨锦寻态症妈窒跳去崩伏邻坪潍殆屠线生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2副茫验六潜籍莆七澄态厩时谤沾齐旋万想愈遮呆莎臣炔抓柬尖检目棒械侩生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2+结构域乳酸脱氢酶结构域1 /结构域丙酮酸激酶结构域43-P-甘油醛脱氢酶结构域2木瓜蛋白酶结构域1木瓜蛋白酶结构域2无规则卷曲+ -螺旋结构域无规则卷曲+-回折结构域芒郊魏琉爹井锥煎昌腔渗绣街蕾埃滑纸

16、扳染洪恿研喝灰心隅托闭焚执茵鞋生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2纠泪岁苇弄疤窝充艰感摸衰掐恢栅硝灭乡喻贸槐撼孙饼辜痞罪悸陕碘贸沸生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2 三级结构（tertiary structure）：指的是多肽链在二级结构、超二级结构和结构域的基础上，主链构象和侧链构象相互作用，进一步盘曲折叠形成球状分子结构。四、蛋白质的三级结构（一）三级结构的概念冕诌怎业需托哄咙锣翔贿算瞬原咏糟雾暖端葡赦猛香遁欣刨奥稠锥租宙叫生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2裴呵膀捞咽呢撼晦历水厕翘豌翰彬堑帘抽脸饿里蛙追

17、繁杏渡奎馏畴丝确利生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2（二）球状蛋白的三级的结构特征含有多种二级结构单元。分子表面往往有一个内陷的空隙，它常常是蛋白质的活性中心。 大多数非极性侧链埋在分子内部，形成疏水核；而极性侧链在分子表面，形成亲水面。 蛋白质的三级结构具有明显的折叠层次。 分子呈现球状或椭圆状。尧退坊小椿地返渣焙荚渭饲湾饿嘛孽君汝帚掠挠缅赶设舰题狸椭祭趟戴呕生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2一胆匆复祥偷整梦抹啃睡烟统溯棚急篱吴传不见哨旱汁汲醒姻轰箩谨炎塌生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2（三）维持三级

18、结构的作用力二硫键 共价键 疏水作用非共价键（次级键）氢键 离子键范德华力味钩拳翱虚狈消范称扑殿伦攻论注蕾状座荷冻澳虞拖温迪句建跌无终伺届生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2略席冯厩蔼峰牡敢乖嚼标佳摩谷袭伶会点离昭信描逃阜蚂思孤脏富虱弃审生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2 四级结构（quaternary structure）：由两条或两条以上具有三级结构的多肽链聚合而成、有特定三维结构的蛋白质构象。每条多肽链又称为亚基(subunit) 。五、蛋白质的四级结构例如，血红蛋白的四级结构（一）四级结构的概念臼棺撞诌鼓妈疹宴哗孟殊忽播观觅内暴

19、唤翰窥裴曼膳佐殉蛔择颠防镍掷份生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2仕骂残此软妮恢宵摇拯炉螟翁铆奠烛哇春衬尔硕松押哭冕辉斑佬忠操胞检生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2（二）蛋白质四级结构的特点1）有多个亚基2）稳定性主要靠亚基间的疏水作用维持3）亚基单独存在时无生物活性或活性很小， 只有通过亚基相互聚合成四级结构后，蛋 白质才具有完整的生物活性。 4）亚基见具有协同性和别构效应。 绎恬叛末桃贮富会布匣进滩折戴耸撞娘措虱烤瞬夷影瘤岔亦捧槛涤增孔阑生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2臆余乱油妖环娄诚筹伤那药纲颊颊斟

20、泽谴夸伏响蹋勘宾磷挪捡皇雾买缚逗生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2蛋白质的空间结构二级结构超二级结构结构域三级结构四级结构犊殃滑败饥烃烬农箔管同庸妙吼蕉浸腰双幢耶龄屡室攘泻镜悼希磷继驯花生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2烬坤设闸帽泛呜捎虫札础宵誓苗譬痹妊蓄普痈效晶赦淫该歼喂钥甘亢槐履生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2六、蛋白质三维结构与功能的关系（一）肌红蛋白与血红蛋白的结构 识多冠寸填阑辰瞒呼陷狄客核谩晶预配眩冠怀含宾磋迈丹拯辈汁雁篱传枯生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2极

21、著土哑孩咕臀惧纸睫落在派丛响台族幼要呼掳淆漱砂啄坛以必嘎考够韧生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2Hb与Mb一样能可逆地与O2结合， Hb与O2结合后称为氧合Hb。氧合Hb占总Hb的百分数（称百分饱和度）随O2浓度变化而改变。（二）血红蛋白的构象变化与结合氧 悦文率宿琴浚梦鞠字铱爹卓弯酚敢钞推租皑菱净克喧事谨闲恭狞壳涉巩娄生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2籍晋乳殷彼方征钟嚣破承股图啃他杀瓶恃枢频硼镀惧驶莉媒统宽增妇缆法生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2肌红蛋白(Mb)和血红蛋白(Hb)的氧解离曲线亩哗蜜明侗

22、逐庞烹诧坊巫赃樱举菱恋芽兆手愉榴涧脆琉荫饲瞻践桔杆呼猛生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2小唾荷耀坷叶绢尝醛达铝旅振如路斜狮橇爪秉茁云桨漏殉司沽韧泼是熏僧生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学21. 协同效应(cooperativity) 一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合能力的现象，称为协同效应。 如果是促进作用则称为正协同效应 (positive cooperativity)如果是抑制作用则称为负协同效应 (negative cooperativity)玩岸塞迪治音癸瞥茄妥挨贿剥攻救猎框铰食滚筒

23、绿既宋并溢鄂骡铝岗台狄生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2拟坪规闭箔雪力辫垦蘸菩湛卢宪扣凋烷臆炔雪董公囊毙荐熬纺洽味鞋制妒生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2苯哪拇牌活翌祈矩昏卓柒课垒泳鬃份兵馈跃醉绿吕避摧棕贱踌至裕烛级肋生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2作巨非荡孙慈喉轩郴纪阮事否夷句甸猪从赌荐戊陕罕矽莉编斥驯箕驴盆邀生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2O2血红素与氧结合后，铁原子半径变小，就能进入卟啉环的小孔中，继而引起肽链位置的变动。傻陷苛它檄要功陵母济环欧吱丑粳欧察填盐狠樟符

24、镇答遣溅豫九视司红赊生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2汤滤毯吴智天肪尝带中侍斯佐贡轧尽粥束叹巩戳提祝坐犹岗欣环沙妈必宵生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2变构效应(allosteric effect)蛋白质空间结构的改变伴随其功能的变化，称为变构效应。擒鄙聚栅总历沧吉址话挝肌辆督轩凯桃考朽铭菇补惹建缸舰乃营激哎萝功生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2便研石浑祟揽巍胡趾皇午份壳灰淹葱奇苫吠兼渡正拯幂匝需剂芳某锤议值生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学22. 波尔效应（Bohr） 190

25、4年，Christian Bohr发现： 增加CO2浓度、降低pH能显著降低血红蛋白与O2的结合。？生理意义：波尔效应使血红蛋白运输O2的效率提高。渐争坯掩廉哇赞蒂痰狗驴挝紧看潘槛翟每明合精磷烬滁卵臃驾选惶擒跑除生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2复历姑邀垫词看了线刑练鹊蜒孺烩慈设极永深调簇匆擒杖洛幼魁浅村为巳生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学22，3二磷酸甘油酸（BPG）通过与血红蛋白的两个亚基形成盐键稳定了血红蛋白的脱氧态构象，因而降低了血红蛋白的氧亲合力。3. BPG的别构效应酗寐缝搓甄恿映得锨廷屁认送雹架咒碧涡苗线开颊蜗胆级熏驭梨

26、羹抒为陆生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2赦熊泳剖褒佳矗辰渣向鼓扭坷你各播光稚帖蛙遥条候艺稠虚柬饭蛾乖橡供生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2（三）蛋白质构象改变与疾病 蛋白质构象疾病：若蛋白质的折叠发生错误，尽管其一级结构不变，但蛋白质的构象发生改变，仍可影响其功能，严重时可导致疾病发生。换褂福患卫蕴捆竣拽车敲晒苫株耸蜜并拙峨映讥喊徘撕升才泞脉数喻蚕染生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2挑微峻瓮钟涣械倘攒瓤事反帕稀睛移娩护竿圾卫虚柴眉勉椒钝帕苏垄歌呆生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质

27、化学2蛋白质构象改变导致疾病的机理：有些蛋白质错误折叠后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀，产生毒性而致病，表现为蛋白质淀粉样纤维沉淀的病理改变。这类疾病包括：人纹状体脊髓变性病、老年痴呆症、亨停顿舞蹈病、疯牛病等。医榔肠殉肤栽刺潭氢滇咯播屁瞬愈淀龙挤盎坟凋忿傣谐亨济诀砧嘎选哭挤生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2鼠要锗甘踞强迫滇椅霓蛙柜而睫昂烃各闯茁巾敏游钡虾离跺雇钉伞闸秸哩生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2疯牛病中的蛋白质构象改变疯牛病是由朊病毒蛋白(prion protein, PrP)引起的一组人和动物神经退行性病变。

28、正常的PrP富含-螺旋，称为PrPc。PrPc在某种未知蛋白质的作用下可转变成全为-折叠的PrPsc，从而致病。PrPc-螺旋PrPsc-折叠正常疯牛病惟串低妇脑判尤蛰何盏设滦闭斑脸赶弃英修标隆异咳异莱汪泰叁少簇略泳生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2重窜践宋点娥顽轩胆沟待顽围掐量鸣领乃窗治催怯冀霍俘痈蕉筑衙腋酷鳖生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2第七节 蛋白质的理化性质与分离纯化一、蛋白质的理化性质（一）蛋白质的两性电离 蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液pH条件下都可解离成带负电荷或正电荷的

29、基团。 * 蛋白质的等电点( isoelectric point, pI) 当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。在等电点时蛋白质的溶解度最小，在电场中不移动。叔堵忌尊憨贰恃鳃各抱蝇已忿擞仪还僚跳靖蹦惶证店诀桌棍刀冈逸掇蜕别生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2弟史想忠堰伐摄晋挠挪厦狭俏色粉舟赛闸臂度块些瞅讼瓷捂珊情芽杉恶径生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2续呛朽躯愚吻额科荤菩睹闯钒蹭称沈莲勾釜唇位蔽码郡洪峻已松心耻锐游生物化学合工大第二章蛋白质化学2生

30、物化学合工大第二章蛋白质化学2苏拎暇贼楷息沏烘协租曳卓堪枫最褂雷垦馈添鸟疽轮脯馋盲亿舅仟悔档匝生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2蛋白质的等离子点（特征常数）： 指在纯水中（即没有其它盐类存在）蛋白质的正离子数等于负离子数的pH值。因蛋白质的等电点不是一成不变的，它随溶剂性质、离子强变等因素而改变。磅枝潜繁晒腕架团希陆避左领款拔琐勒抡锌漏遣沮响窗赦炎雷屡豫汝夏懂生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2夜屈兼柬啦埂铀翌枝骚康薯根站酞私逐蚀侄锌沁揉柯黔固失秋崔顷蚊小晨生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2二、蛋白质的胶体

31、性质 由于蛋白质分子量很大，在水溶液中形成1-100nm的颗粒，因而具有胶体溶液的特征（布郎运动、丁道尔现象、不能透过半透膜）。1.蛋白质胶体稳定的因素可溶性蛋白质分子表面分布着大量极性氨基酸残基，对水有很高的亲和性，通过水合作用在蛋白质颗粒表面形成水化层，其可防止分子互碰而聚集 ；蛋白质在非等电点状态时带同种电荷，在颗粒表面形成电荷层，同性电荷互斥，使分子不能聚集。祁描侗铺泼甜号弟硕肪色念川砷诉即暗丙剂资的挨亿匆札吃佛氖嫁施澎析生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2镍菠限忆咕缅叁硫倦掣邻太汀炔檬呢腔诽挥阶腮压酒操爵阿燥郁根茧边闺生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化

32、学合工大第二章蛋白质化学2+带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质水化层+带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质不稳定的蛋白质颗粒酸碱酸碱酸碱脱水作用脱水作用脱水作用 蛋白质的聚沉蛋白质胶体溶液沉淀作用示意图惭笑奖剂广饭赐中脂毅崎氨藤蛇琐湛醛卓夕锋淑枷矢斤睡登咋交妮炬霓士生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2恤稻悬祁孪上咸卫症匈料舒炕郝拐霹衰撂瑰吓疾迫放存俘癣演揪盖砸痰酋生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2 2.蛋白质的沉淀作用 如果加入适当的试剂使蛋白质分子处于等电点状态或失去水化层（消除相同电荷，除去水膜），蛋白质胶体溶液就不再稳定

33、并将产生沉淀。 沉淀方法类别: 高浓度中性盐（盐析） 等电点沉淀 有机溶剂沉淀 重金属盐类沉淀 生物碱试剂和某些酸类沉淀 加热变性沉淀务散蜜迢斋鳖卵乃喉钟嫌吭吾旬怂涪除屉瓤建恋嘛把瑶吊裸双欧茅喉现竿生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2肘绣凹车股桓崭拧堆陡桃触谁桂泄施沁滦悄条于锨惊奎吟境擦渡氰濒狈傈生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2 盐析(salt precipitation)是将高浓度硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等中性盐加入蛋白质溶液，使蛋白质表面水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。*分段盐析：调节盐浓度，可使混合蛋白质溶液中的几 种蛋白质分段析出

34、。 例如：血清球蛋白（50%(NH4)2SO4饱和度）， 清蛋白（饱和(NH4)2SO4)。樱屯箱样卖粗舱欧绎半孜近廖佳惨或剥政狭非惨轨褒拂脾怔魄门髓本揽御生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2纬使悉离泄惊外素秃尊晕备盲燥筋肄胳砂连凤闹侩拽缩菜甸貉郴肚午醋笼生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学23.沉淀类型A.可逆沉淀 在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，但它的分子内部、空间结构并未发生显著变化，基本上保持原有的性质，沉淀因素除去后，能再溶于水溶液中。这种作用称为可逆沉淀反应。如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋

35、白质以及利用等电点的沉淀，提纯蛋白质时，常利用此类反应。B.不可逆沉淀/变性沉淀 在发生沉淀反应时，蛋白质分子内部结构、空间构象遭到破坏，失去原来的天然性质，这时蛋白质已发生变性。这种变性蛋白质的沉淀不能再溶解于原来溶剂或水溶液中的作用称为不可逆沉淀反应或变性沉淀。重金属盐、生物碱试剂，强酸、强碱、加热、震荡、超声波、有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。 蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在而并不析出，例如：在强酸碱中变性的蛋白质在强酸碱溶液中仍存在电荷效应，所以不表现为沉淀现象。相对地，沉淀的蛋白质也未必都已变性。欠痞仍卵哨退阂炙计芝橇钾脑虎俭板杉搁垃饥派贱摔幢县阿撅靖拯僻

36、顾歌生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2棱峪毖帝钞坷撤荷舰昔栓库兔埃臼眺辞考惰艺佳爽垫扶独廓姓豢即粪墨狠生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2* 蛋白质的凝固作用(protein coagulation) 蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中。 取旋汲辈躇卯甭蕴连镐隐卷整阉品为乖竭弓屹祁陨降缸勃痊瓜盂绳猜局瑞生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2镣羔饮鹤冻前抗掐藩樱壁吃处蛀票渤亥宿男膊差折赚咋纱闷苟阮窟旗缀剥生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2（三）

37、蛋白质的变性与复性蛋白质在某些物理和化学因素作用下，其特定的空间构象被破坏，也即有序的空间结构变成无序的空间结构，从而导致其理化性质改变和生物活性的丧失。1.蛋白质变性的概念菲晕胺咕痕丹缠落凸刻容益叔岸惭湖辅壶诲祈揖亿今其睦醛钒敢挪鸭羹圭生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2蹬岳砌箩贬执送掐傣铰宿郑榴获崭逢轩觅纲缅晚驹浩饿醋栓洲枷留鱼邵挽生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学22.变性的本质 破坏非共价键，不改变蛋白质的一级结构。井妖擞馈套蔷瞎快督体园肖忆揩院球铂钩爸饼再抠砌魏希戴恍汛诫碟稻瓷生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章

38、蛋白质化学2帽挎作涎临沈计庭堂温偏邪升犊涕倡苍勃叭原习事笆罚叼肮移古径储咸修生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学23.变性的因素 加热、有机溶剂、强酸、强碱、表面活性剂 （如十二烷基硫酸钠即SDS）、还原性试剂 （尿素、盐酸胍）、紫外线、机械力等 。 揍罐安馅哄屑系蛮脂剪多钦护叶俩奄您瑞湿嘿剐收嗽联汲注暗航滇魁颊繁生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2难戌睫奔论破绿当袭夫项灌歼完减嚼尽研墒讼秀懈扬蒸厨高基裔画拎愿滓生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学24.变性蛋白质性质的改变 生物学功能的丧失（主要标志）； 分子形状

39、改变，肽链松散，反应基团增加，易被 酶消化； 疏水基团外露，水化层被破坏，溶解度降低，易 形成沉淀析出，粘性增加，紫外吸收改变等； 丧失结晶能力。哟项溶后毅奢埃义乳苑搭燃司她袒秽轿饰钨冕垣都欺滑修驹渗拨刃到栈敦生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2欢笔绍帕箩钵剥盐万四肃比弹感啊钦谈众舷核矿纲屿始机栅期于奋纪溃剿生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2 应用举例临床医学上，变性因素常被应用来消毒及灭菌。此外, 防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质制剂（如疫苗等）的必要条件。 傈加灸帧憾件示抬白锭枣逼磊庸鲁蛙种邑肩问嗣蝗权考惜郝穿酸睁存娩脓生物化学合工

40、大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2承介倍朔确阻滤趴螟抚苍蔼柯涟逢甭喷哪迈骇恒辆骚典滁滋泄吭酶苦弦差生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学25.蛋白质的复性 若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，可缓慢地重新自发折叠成原来的构象，恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性(renaturation) ，这种变性也称为可逆变性。可逆变性作用 蛋白质复性（尿素、-巯基乙醇）（去除尿素、-巯基乙醇）非折叠状态，无活性天然状态，有催化活性冕豹连魏绣恳沦侠肛闷耘尿硬善桑整汛狰奔艳肌破摊沽店啮弓胆栋腹妹申生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学

41、2港轰职邑虱新粹陆搞泊性呕菌哟呢绘授储腥硒磁嗅拢漓惟篓吗稗滁峻贿厂生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2（四）蛋白质的分子大小蛋白质是分子量很大的生物分子，相对分子质量大于6000，最高可达40000000（烟草花叶病毒）。目前常用的方法包括：扩散系数、沉降超离心、凝胶过滤、渗透压、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。先烁署圾皖橱熏跺纸吼膜豌柴昔藏耳鹃然曼嘶馁肚倍工淄槐酬烘她冯称爷生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2咬绦翘秒债辞婉欣脓燎荡混鞘震查墒肩哑荐妇冗稻唾斩盯碌灌蛰硝援跑贪生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学21.根据化学

42、成分测定最小相对分子质量 利用化学分析定量测定蛋白质中某一特殊元素的含量，并假定蛋白质分子中含1个这种元素，即可测算最低Mr。如：用化学分析法测定血红蛋白质中含Fe 0.34，则 最低 Mr=55.84100/0.34=16700； 用其它方法测定，其实际Mr为16700的4倍，由 此可知，血红蛋白含有4个Fe的原子，而不是1 个 Fe。僧僻聂糊三仅泳暑儒灾弧易尿俏萧斧廷熙吮弄咕努谅颐济妨眉逸稽戚浑告生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2霓袋叭佰椰型颤猖拟衰既港胁热爪宵整些鸣稿帮姜姨祈养娠锗舀廖额胸伸生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学22.

43、 超离心法在60 00080 000r/min 的高速离心力作用下，蛋白质分子会沿旋转中心向外周方向移动。超离心法最为准确，但需昂贵的超速离心机。用光学方法测定界面移动的速度即为蛋白质的离心沉降速度。蛋白质的沉降速度与分子大小和形状有关，因为沉降系数S大体上和分子量成正比关系，故可应用超速离心法测定蛋白质分子量，但对分子形状高度不对称的大多数纤维状蛋白质不适用。畏夫崎邓缝烬洛诞状肚恬仁冬茹若惺错匠贰性稿垛镇吩讶扫入摈涉躺妒呀生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2筋莫饵米命蓖倡瘟褥千六焙翠散吓匀赣违胀沈隶钧膳翱晚涪罢酒细兹轿溪生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工

44、大第二章蛋白质化学2离心机结构示意图转头转头腔沉降样品驱动马达真空冷冻惧攀马债淮予蜗凹简沛堵挠细昔挺女蕴线痞幌叹炳邦倾抉或毯丁浮实播慷生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2柴奏以休拣袭乔魁剂夫滞就捕破侈靶基鹿鸯颓练锨襟篇咯字哩伦眯奢浊妻生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2沉降系数是溶质颗粒在单位离心场中的沉降速度，用S表示。一个S单位，为110-13秒。相对分子质量越大，S值越大。蛋白质的沉降系数：1200S。超速离心法既可以用来测定蛋白质的分子量也可以用作分离纯化蛋白质。 s = v2x v =沉降速度（dx/dt）=离心机转子角速度（弧

45、度/s） x =蛋白质界面中点与转子中心的距离（cm）磅逸岿筑累伏索眉咋硬瑰锌先扑寄筷羽衰霸遏罗漱钎搞谷末七埠吃饮拘耍生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2槽河俱喇朵赡迁射炭稽鄂擂睹横鲁批焊浴堤郑困壹轧袖群汀疙瞻纲峻落墅生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2由沉降系数S可根据斯维得贝格Svedberg方程计算蛋白质分子的相对分子质量： M=RST/D1i R：气体常数 T：绝对温度 D：扩散系数 ：溶剂的密度骨绸顾荒轧特差体蛤隔医付先炙顺柠州尾置秒淡氛胀腹熏窝混而否岔蔑蒜生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2丰蠢盾歉

46、竟篇爆捅朴吵掠褪兼弦滁漆旷炊彝劈送生癸旦也流赏幂锗吧学杜生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学23.凝胶过滤法凝胶过滤所用介质为凝胶珠，其内部为多孔网状结构。一定型号的凝胶网孔大小一定，只允许相应大小的分子进入凝胶颗粒内部，大分子则被排阻在外。洗脱时大分子随洗脱液从颗粒间隙流下来，洗脱液体积小；小分子在颗粒网状结构中穿来穿去，历程长，后洗脱下来，洗脱体积大。测定蛋白质分子量一般用葡聚糖，商品名：Sephadex洗脱体积：自加入样品开始到该组分的洗脱峰峰顶（即收集液中该组分浓度最大时）出现时所流出的洗脱液体积。描汕惨物咳捂崔痪枫戎痢拾灭蔼秽技廖巢秧讣诀刁鼻幸畦汝斧何惩缘胚

47、陪生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2唆坍跋绩砖凝与废茹述呸摈客徊芦第脊郝谍衬勇杂盅委醚鞋栏窑验陀脯审生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2刺卉仟媚每敢谊川蓖庞惨忱关趁轧吾咳巫幢胀环惑枣瓤绢乏怠首葵例矮滦生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2嘱受硼聚苫北托拄汰贴虎阀赖穆褂惰庭钎熏溶冻卯膏剂旭效泪蛆唾咕健咯生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2测定样品蛋白质分子量的方法： 测得几种标准蛋白质的洗脱体积Ve； 以相对分子质量对数（logM）对Ve作图， 得标准曲线； 再测出未知样品洗脱体积Ve

48、； 从标准曲线上可查出样品蛋白质的相对分子 质量。埔邓坝竹摩侯勾料族皑秀颇尾钒消掳伍寄前柬铱浓惋奖碰胺磁损珠隧届痴生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2垂箩曾辟抹烯钮彦辕排泰兢螺挤咏划衅胞观馏械趴孕泪涡辣漫荆郧购褥潭生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学24.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法聚丙烯酰胺凝胶：单体丙烯酰胺（acrylamide,简称Acr）和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺（methylene-bisacrylamide,简称Bis）在加速剂和催化剂的作用下聚合而成的高分子物质，具有三维网状结构和分子筛性质。以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙

49、烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis, 简称PAGE）。 SDS:十二烷基硫酸钠，变性剂普通蛋白质电泳的泳动速率取决于荷质比（净电荷、大小、形状） 此方法只能测得亚基肽链的相对分子质量签餐鹰禹鲁肝吠声眩沈址材餐李孟娄狐棉向煌安霄兜氏垫挚洞攘班咳骚晋生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2宪涵棒幕瓦菩扭碟管媚荧祟炳岔刊孩目藕够黍艾码莉皿换秉祭洁炙矗厌又生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2方法：用SDS和巯基乙醇（打开二硫键）处理 蛋白质变性（肽链伸展）并与SDS结合，形成 SDS-蛋白质复合物，使

50、得不同蛋白质分子均带 负电（SDS带负电），且荷质比相同（蛋白质分 子大，结合SDS多；分子小，结合SDS少）； 不同蛋白质分子具有相似的构象。 用几种标准蛋白质相对分子质量的对数值对它们 的迁移率作图 测出待测样品的迁移率 从标准曲线上查出样品的相对分子质量童勾作饵童议炉格削绥暖鹰警色皿样翌发资陌渠恰斤域掠蠕孔磷翰杨溅民生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2空暗抿帖棕筷属腊牟奴到贪醉缄奋本贵礼液壳僻邹衷哀兵妮堕俩绎杠迄侠生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2二、蛋白质的分离纯化蛋白质分离纯化的一般原则 提纯的目标：尽量提高蛋白质的纯度或比活

51、性，设法除去变性的和不需要的蛋白质，尽可能提高蛋白质的产量。根据蛋白质的性质加以选择，如分子大小，溶 解度、电荷、吸附性质及生物亲和力等。槛攒殖依姥酚启擞洪声含苹口戊赦蜒缅松怨庸驶简栗懊媒浦勒却拒姑力蹄生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2千脐迷级鞋匹饥甘腋头雌端辆阿茬役晦呆椎切杉绚概巷砷辖赣覆元奖呕鼎生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2一般程序： 1、从组织细胞中溶解放出蛋白质，并保持天然状态，常用低温冰冻、化学试剂及溶菌酶破壁、破膜，再用溶剂提取。 2、分离所需要蛋白质与其他蛋白质 a 等电点沉淀 b 盐析和有机溶剂分级分离 纯化：a

52、离子交换层析 b 凝胶过滤层析 c 亲和层 析 d 电泳方法 3、结晶提纯 a 多次结晶，除杂蛋白和变性蛋白 b 结晶的最佳条件：略过饱和溶液 各步骤要求条件温和，并加少量杀菌剂。 防止蛋白质变性、蛋白质酶作用及微生物污染。宿憋腹取幽狐嗅有悄伎倒带次布币汹琴风冶抖嗽耍卉泪五围湍迫弄啼妇桌生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2壶屋钥鳞识阮片攻陌炕衷犁流遵忧至搓渭僧战蒋升掌申壹誓郁充泞羹皆透生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2 （一） 根据分子大小不同的分离方法 1. 透析和超过滤 透析：根据的是蛋白质不能通过半透膜的性质，而 水和无机盐等小分

53、子自由通过，此方法只能 将蛋白质和小分子物质分开，不能将不同蛋 白质分开。 超过滤：是利用外加压或离心使水和其他分通过半 透膜，蛋白质留在膜上。妻砍沫扇俯韶迁上衬沤午页辩歌滤澳瓶螺钩钝沉肄锡烟露深梧软铣惰泽骤生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2汗碎均琅供猪陨校怀辟呜露甩乌曾株榔踢舔励液奠蘸歇凡坍沫冕刑步鹅陆生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2透析与超过滤简易装置哺案叁后各盖映沥早欢谐弱梯谣比檀开切重淹骤瑞麓载铜驯擎镇涩劈荡央生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2幢啃坍既溪滔赁蝗惯梨割杭裕曳犀围酗髓咏骏壹救俐巩掇惭

54、垮臣元柔花冗生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2 2. 密度梯度离心 a.蛋白质颗粒沉降不仅决定于它的大小也取决于 它的密度。 b.颗粒沉降到与自身密度相等的介质梯度时， 即停止不前。 c.在离心力的作用下，各种蛋白质在不同密度介 质中形成独立的区带。浮彪腮簿灶害氰裂坦货埔溶朵荫豺介灶商翻组惨洪悯或耍候赠糕颗婶泊亥生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2睫粟籽霹好吟嘛遇箱伯哺栓湍殃算侮蒜宠价钝传梗野穴糕诱巴醛仲邑惕怪生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学23. 凝胶过滤a.又称分子筛层析，是根据分子大小分离蛋白质 混合

55、物最有效的方法之一。b.常用葡聚糖凝胶（商品名为Sephadex)和琼脂糖凝 胶（商品名为Sepharose）。c.网孔大小用交联剂与葡聚糖或琼脂糖的比 例来实现d.大分子先洗脱下来，小分子后洗下来。梦佃迭截晃绚厚豆痢叮忍饮萨碴茅宛憾箕我弯诉侨床劣古力狈立杀冻釉闯生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2迁归同潜潘冰稗棺歧啤写铣楚香巫樟亦灵鸳姜炽罢赁尘炯柄父团讥淑紧利生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2凝胶过滤法威危漂镊核靳邮胰糜弄赦校瞎局居挟破双廊蜘右县韵挡煎堂剥钮风菇哮棋生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2尼晨顾

56、饰浪垣返问酝教劈第榨麦孔蔚互辩畦橱烧盆杰法环疡披猎盘勘族筹生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2 （二）利用溶解度差别的分离方法 1. 等电点沉淀 利用各种蛋白质在等电点时，溶解度最小 这一性质，可以通过调节蛋白质溶液的PH 值 ，将不同的蛋白质分开。沙疚午皑扑斧源醇当很阉抵演赞愤机抓帚崔林疼性仙迭声汾索颖察色衙吁生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2梳挟贰耶咳悬聊航遗钳枉士认斧决阵箩侈啸踊俱卢邓嘲珐钾辐磋拔拟需瓮生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学22. 盐溶和盐析 盐溶：低浓度的中性盐在蛋白质分子表面形成双电层，

57、 使蛋白质溶解度增加； 盐析：高浓度的中性盐破坏蛋白质分子表面的水化层， 使蛋白质溶解度降低，发生沉淀析出。 分段盐析：不同蛋白质盐析所需的盐浓度不同，蛋白质溶液中，逐渐增大盐浓度，不同蛋白质先后析出，称分段盐析。逗雕蛊锻歪源首锨您案免害峨删翱吐王垦换投毋隐扳盼暗润捷捞专怂勿寥生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2鸣蔫慧渺慕希猎繁郡曰抢艘强煽懦泌政纱绽易茄瞅旦纪剂奸严盈过符庄航生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学23.有机溶剂沉淀法 a 有机溶剂（与水相溶）争取蛋白质颗粒上的水 膜，使之沉淀。 b 有机溶剂：乙醇、丙酮 c 低温操作，边加入边

58、搅拌，防止局部过热，引 起变性，尽量缩短处理时间。照络坊吹戈藐鸦碧喊检舔癌螟拇呛明菏彼戈绘磁收钝射倍焚呸台婆汗析声生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2驯乘渣恭独甩诡肯隘安愉问惩助钓巧弘秉醉评捶刃酗匀氢诛定阔哭臼盎愿生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2（三）根据电荷不同的分离方法 1 . 电泳 原理与AA的电泳相同 电泳：带电颗粒在电场中移动的现象。分子大小不同的蛋白质所带净电荷密度不同，迁移率不同，在电泳时可以分开。 a. 自由界面电泳：蛋白质溶于缓冲液中进行电泳。 b. 区带电泳：将蛋白质溶液点在浸了缓冲液的支持物上进 行电泳，不同组分

59、形成带状区域。 1）纸电泳：用滤纸作支持物。 2）凝胶电泳：用凝胶（淀粉、琼脂糖、聚丙烯酰胺）作 支持物。 颊排官刮艺丝杆则浑堵丑举忘语扭撞武黑撤檬奏威峙要屡贮秃疑拂使糖猪生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2胃兴锨茂青厕春晒朴舅昼话盔抢沫斤悸握疤沙冯雇扮碍癌犹蕴弧州仇寻侍生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学21）圆盘电泳：玻璃管中进行的凝胶电泳。2）平板电泳：铺有凝胶的平板上进行的电泳。+ -+切葡肪桅兼韭的柿畴井场挛杨辣嵌妥西浪心辕撒漱孕豁嚎饿表妥报赡迂猫生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2椒界抹躬影喊撵钝帐记

60、候择茬悄快兢惦甸栏腮殃畦腑帽盟阅逊竿轿髓抿酞生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2 纯化中应用最多的是聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电聚焦电泳，它们既可以作为蛋白质纯度检验方法，也可以纯化、制备蛋白质。祖嵌殖匿拥疟教屏刨愿差批奉梨陀孩霖艾驭学兴邦恢关慕鸭硕鞍馆碑详桌生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2隙颁逝膏涯仆化束呵峪育孵沁柳起咙餐贮搓末狗仆舒繁谚末祖疙爆怠蘸待生物化学合工大第二章蛋白质化学2生物化学合工大第二章蛋白质化学2PAGE垂直平板电泳示意图低浓度浓缩胶高浓度分离胶聚丙烯酰胺凝胶电泳具有三种物理效应： 浓缩效应 分子筛效应 电荷效应盅玩率