植物体内磷主要以有机磷如核酸

1、n 一4植物体内磷主要以有机磷如核酸、磷脂、植素等的形态存在于植物组织中， 有机磷须经干灰化或湿灰化分解转变为无机正磷酸盐。溶液中磷一般用比色法测 定。湿灰化应用不同比例的HNO3、H2SO4、HC1O4的方法较为普遍，湿灰化法 的消煮温度不会超过混合酸的沸点，灰分元素不会形成难溶的硅酸盐，而且当用 H2SO4或HC1O4消煮时，可使SiO2充分脱水且使其吸附作用降至最低限度，不致 造成灰分元素测定产生显著的负误差。但是由于试剂用量大，会带来污染的危险， 试剂空白值大。当然加有hno3的湿灰化法，则不能在消煮液中同时测定氮。在十灰化法中，所用的温度有所不同，一般建议灰化温度不超过500C，而

2、时间为28h，近年来，改进的十灰法中，添加一些“助灰化剂”，在灰化时通 02,添加KHSO4等，帮助灰化；干灰化添加试剂量少，污染的可能性比湿灰化 小，而且简便易行。对于植物全磷的测定用H2SO4-H2O2消煮法，同时测定氮、 磷和钾较为方便。总之，方法的选择应根据测定元素的各类、具体条件来决定。 溶液中磷的测定，最常用的钼蓝比色法和钒钼黄比色法，可根据样品中磷的含量 选用测定方法，当磷的含量高时，选用钒钼黄法为佳，反之则可用钼蓝法。13.2.2.植株中磷的测定(H2S04- H202消煮，钒钼黄比色法)13.2.2.1.1方法原理植物样品经H2S04- H202消煮分解制备待测液(同13.2

3、.1.1.4)。待测液中正磷酸能与偏磷酸盐和钼酸盐在酸性条件下作用形成黄色的杂聚 化合物钒钼酸盐，其组成沿不能十分肯定，有人认为是 P0 V0 - 22MoO - nHO。溶液的黄色很稳定，其深浅与磷含量成正比，可 2 52 532用比色法测定磷的含量。比色时可根据溶液中磷的浓度选择比色波长400490nm， 磷的浓度高时选择较长的波长，较低时选用较短的波长。钒钼黄法要求比色液中 酸的浓度（即终浓度）很宽，极限是0.041.6mol L-i（H+）；酸度太高时显色不完全 或不显色，太低时则可能生成沉淀或其它物质的颜色。钒酸盐的终浓度范围是 8.0X10-52.2X10-3 mol L-1，通常

4、用后一种浓度。钼酸盐的终浓度范围是 1.6X10-35.7X10-3 molL-1。在正常的室温变化范围内对黄色强度无影响。黄 色发生很快，在最初15min内会降低约1.3%，以后至少2h内很稳定，在24h内 也无显著变化。本法操作简便快速，准确度和重复性较好，相对误差约为13% ；灵敏度较 钼蓝法低，适测范围广，约为120 mg - L-1；对酸的浓度要求不严格，容易控制， 在HNO3、HCl、H2SO4、HC1O4等介质中都可适用；干扰离子少，特别是Fe3+ 的允许量远高于钼蓝法，因此该法广泛用于植物和有机肥料样品中磷的测定。13.2.2.1.2主要仪器：消煮管（瓶）；控温消煮炉；分光光度

5、计。13.2.2.1.3 试剂钒钼酸铵试剂：称（NH4）6MoO24 - 4H2O12.5g溶于200mL水中。另将偏 钒酸铵（NH4VO3） 0.625g溶于沸水150mL中，冷却后，加入浓HNO3 125mL， 再冷却全室温。将钼酸铵溶液缓慢地注入钒酸铵溶液中，随时搅拌，用水稀释至 500mL。6mol - L-1 NaOH 溶液：称 NaOH 24g 溶于水，稀释至 100mL。2,6-二硝基酚指示剂：2,6-二硝基酚0.25g溶于100mL水中。其变色范围 是pH2.4 （无色）4.0（黄色）。变色点是pH3.1。50谄-mL-1 P标准溶液：准确称取经105C烘干的KH2PO40.2

6、195g，溶于 水，移入1000mL容量瓶，加水全约400mL，加浓硫酸5mL，用水定容。装入 塑料瓶中低温保存备用。其它试剂同13.2.1.1.3。吸取13.2.1.1.4消煮好经过滤的待测液2025mL(含 P 0.251.0mg),置于 50mL容量瓶中，加2,6-二硝基酚指示剂2滴，用6mol L-1 NaOH溶液中和全 刚呈黄色，加入钒钼酸铵试剂10.00mL，用水定容。放置15min后用波长450nm, 在分光光度计上比色，以空白液调节仪器零点。标准曲线制作：分别吸取50g - mL-1 P标准溶液0，1.0，2.5, 7.5, 10.0， 15.0于50mL容量瓶中，同上述操作步

7、骤显色和测定，该标准系列P的浓度分别 为 0， 1.0，2.5， 5.0，7.5，10.0，15.0 旺 mL-1。13.2.2.1.5结果计算全 P (%) = p V X 分取倍数 X 10-4 / m式中：p一从标准曲线查得显色液P的质量浓度(旺mL-1 )；V一显色液体积(mL)；分取倍数一消煮液定容体积(mL) /吸取消煮液体积(mL)；m一十样品质量(g)。13.2.2.2植株中磷的测定(H2SO4-H2O2消煮，钼锑抗比色法)囹13.2.2.2.1方法原理植物样品经H2SO4-H2O2分解(原理同13.2.1.1.1)。溶液中的磷用钼锑抗比色 法测定。主要仪器：同 13.2.2.

8、1.2试剂1.浓 h2so4；3. 50g - mL-1 标准溶液：同 13.2.2.1.3(4)； 4.其它试剂同5.2.2.313.2.2.2.4操作步骤吸取13.2.1.1.4消煮好经过滤的待测液25mL（含P 525旺）置于50mL容 量瓶中，按照5.2.2.4, 2调节溶液酸度和显色步骤进行比色测定。标准曲线制作：同5.2.2.4, 3。结果计算：参照 13.2.2.1.5注释：参照 5.2.2.6HCIO4H2SO4 法5.2.2.1方法原理 用高氯酸分解样品，因为它既是一种强酸，又是一种 强氧化剂，能氧化有机质，分解矿物质，而且高氯酸的脱水作用很强，有助于胶 状硅的脱水，并能与F

9、e3+络合，在磷的比色测定中抑制了硅和铁的干扰。硫酸的 存在提高消化液的温度，同时防止消化过程中溶液蒸干，以利消化作用的顺利进 行。本法用于一般土壤样品分解率达97-98%，但对红壤性土壤样品分解率只有 95%左右。溶液中磷的测定采用钼锑抗比色法(其原理见5.2.1.2)。5.2.2.2主要仪器721型分光光度计；LNK-872型红外消化炉。5.2.2.3 试剂浓硫酸(Hso，P Q1.84gcm-3 ，分析纯)；247072%高氯酸(HClO4，p Q1.60gcm-3 ，分析纯)；2, 6-二硝基酚或2, 4-二硝基酚指示剂溶液：溶解二硝基酚0.25g于100mL水中。此指示剂的变色点约为

10、pH3，酸性时无色，碱性时呈黄色。4molL-1氢氧化钠溶液：溶解NaOH 16g于100mL水中。2molL-1(1/2 hso)溶液，吸取浓硫酸6mL，缓缓加入80mL水中，边24加边搅动，冷却后加水至100mL。钼锑抗试剂：A.5g.L-i酒石酸氧锑钾溶液：取酒石酸氧锑钾 K(SbO)C4H4O6)0.5g，溶解于100mL水中。B.钼酸铵一硫酸溶液：称取钼酸 铵(NH4)6Mo O24 4H2O) 10g，溶于 450mL 水中，缓慢地加入 153mL 浓 H2SO4， 边加边搅。再将上述A溶液加入到B溶液中，最后加水至1L。充分摇匀，贮于 棕色瓶中，此为钼锑混合液。临用前（当天），称

11、取左旋抗坏血酸（C6H8O5，化学纯）1.5g，溶于100mL钼锑 混合液中，混匀，此即钼锑抗试剂。有效期24小时，如藏于冰箱中则有效期较 长。此试剂中H2SO4为5.5molf-1（H+），钼酸铵为10g L-1，酒后酸氧锑钾为 0.5g L-1，抗坏血酸为 15g L-1。（7）磷标准溶液:准确称取在105C烘箱中烘干的KH2PO4（分析纯）0.2195g， 溶解在400mL水中，加浓H2SO45mL（加 H2SO4防长霉菌，可使溶液长期保存）， 转入1L容量瓶中，加水至刻度。此溶液为50p g mL-1P标准溶液。吸取上述 磷标准溶液25mL，稀释至250mL，即为5p g mL-1P标

12、准溶液（此溶液不宜久 存）。5.2.2.4操作步骤（1 ）待测液的制备：准确称取通过100目筛子的风干土样 0.50XX1.0XXXg（的），置于50mL开氏瓶（或100mL消化管）中，以少量水 湿润后，加浓H2So8mL，摇匀后，再加7072%HClO4 10滴，摇匀，瓶口上加一个 小漏斗，置于电炉上加热消煮（全溶液开始转白后继续消煮）20min。全部消煮时 间约为4060min。在样品分解的同时做一个空白试验，即所用试剂同上，但不 加土样，同样消煮得空白消煮液。将冷却后的消煮液倒入100mL容量瓶中（容量瓶中事先盛水3040mL），用 水冲洗开氏瓶（用水应根据少量多次的原则），轻轻摇动容量

13、瓶，待完全冷却后， 加水定容。静置过夜，次日小心地吸取上层澄清液进行磷的测定；或者用十的定 量滤纸过滤，将滤液接收在100mL干燥的三角瓶中待测定。（2）测定：吸取澄清液或滤液5mL （对含P，0.56gkg-1以下的样品可 吸取10mL），以含磷（P）在2030p g为最好注入50mL容量瓶中，用水冲稀全 30mL，加二硝基酚指示剂2滴，滴加4molL-1NaOH溶液直至溶液变为黄色，再 加2molL-1（1/2HS） 1滴，使溶液的黄色刚刚褪去（这里不用NH OH调节酸度，244因消煮液酸浓度较大，需要较多碱去中和，而NH OH浓度如超过10g-L-1就会使4钼蓝色迅速消退）。然后加钼锑抗

14、试剂5mL，再加水定容50mL，摇匀。30min后， 用880nm或700nm波长进行比色(g ，以空白液的透光率为100(或吸光度为0), 读出测定液的透光度或吸收值。(3)标准曲线：准确吸取5p g-mL-i，P标准溶液0、1、2、4、6、8、10mL， 分别放入50mL容量瓶中，加水全约30mL，再加空白试验定容后的消煮液5mL, 调节溶液pH为3，然后加钼锑抗试剂5mL，最后用水定容至50mL。30min后进行 比色。各瓶比色液磷的浓度分别为0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0. gmL-iP。5.2.2.5结果计算 从标准曲线上查得待测液的磷含量后，可按下式进行计 算：土壤全磷(P)量(gkg-1) = p XV/mX V2/V