实验室常用药品试剂的配置与使用

1、实验室常用药品试剂的配置与使用实验室常用药品试剂的制备与使用（一）认识药品规格纯度规格简写标签颜色级别特点实验纯L.R黄色四主成分含量高，纯度较差，朵质含量不做选择化学纯C.P蓝佝主成分含量高、纯度较高，存在干扰杂质A.R红色主成分含量很高、纯度较高，干扰杂屬很低优级纯GR主成分含量很高、纯度很高，有的可柞为基准物底1甲基绿（DNA绿色）和吡罗红（RNA红色）染色剂配制：a）A液：取甲基绿2g溶于98mL蒸馏水中，取吡罗红G5g溶于95mL蒸馏水中。取6mL甲基绿溶液和2mL吡罗红溶液加入到16mL蒸馏水中，置于棕色瓶中备用。b）B液：是一种缓冲液，由乙酸钠和乙酸混合而成。先取乙酸钠16.4g

2、,用蒸馏水溶解至1000mL备用；再取乙酸12mL，用蒸馏水稀释至1000mL备用。取配好的乙酸钠溶液30mL和稀释的乙酸20mL,加蒸馏水50mL，配成pH为4.8的B液（缓冲液）。c）取A液20mL和B液80mL混合，就是实验中所用的吡罗红甲基绿染色剂。应该注意的是该试剂应现用现配。2.I2-K溶液（淀粉一蓝紫色，蛋白质一黄色）配制：将碘化钾3g溶于蒸馏水中，待全部溶解后加入碘1g，振荡使其溶解，将此液保存在棕色玻璃瓶内。3苏丹川或苏丹IV（木栓化、角质化细胞壁一红色，脂肪、挥发油、树脂等一红色或淡红色）配制：苏丹川或苏丹IV干粉0.1g与95%乙醇10mL混合，过滤后再加入10mL甘油。

3、4.1%醋酸洋红染料（染色体一紫红色）配制：将洋红1g与45%醋酸100mL煮沸2h左右，并随时注意补充加入蒸馏水到原含量。冷却后过滤，加入4%铁明矾溶液12滴，放入棕色瓶中备用。5.龙胆紫酸性染料（染色质一紫色）配制：取龙胆紫1g，溶于少量2%醋酸溶液中，滴加2%醋酸溶液，直至溶液不呈深紫色为止。6卡宝染色剂（染色体一红色，着色深，保存性好）又名苯酚-品红染色剂配制：a）原液A:将3g碱性品红溶于100mL70%的乙醇中。b）原液B：取原液A10mL加入到90mL5%苯酸水溶液中。（两周内有效）c）原液C：取原液B55mL，加入6mL福尔马林和6mL冰醋酸。d）染色剂：取原液C1020mL，

4、加45%冰醋酸8090mL，加山梨醇1.8g，将其配制成10%20%的苯酚-品红溶液，放置两周后，效果显著。7本尼迪克溶液（醛糖或醛一黄红色沉淀）又称班氏试剂配制：a）硫酸铜溶液：在50mL加热的蒸馏水中溶解8.5g硫酸铜；b）柠檬酸钠-碳酸钠溶液：在400mL蒸馏水中溶解85g柠檬酸钠和50g无水碳酸钠；c）将硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅拌并过滤沉淀物。8斐林试剂（醛糖一砖红色沉淀）配制：a）甲液（0.1g/mLNaOH）:将125g氢氧化钾（钠）和173g酒石酸钾钠溶解在500mL蒸馏水中。b）乙液（0.05g/mLCuSO4）:将34.5g硫酸铜溶于500mL蒸馏水

5、中。c）上述两种溶液应分别保存。在检测葡萄糖时，使他们等量混合，加入待测物的试管内，加热到沸腾。如果有葡萄糖，会形成红色的氧化亚铜沉淀物。9米伦试剂（含有Tyr的蛋白质一红色沉淀）配制：在60mL浓硝酸（比重1.42）中溶解40g汞（水浴加温可助溶），溶解后加入两倍体积的蒸馏水稀释，静置澄清后，取其上层的清液备用。中性红溶液（活细胞一红色）配制：将0.1g中性红溶于100mL蒸馏水。使用时，再稀释10倍左右。曙红丫乙醇（细胞质一浅红色）配制：将0.25g曙红溶于100mL95%乙醇。钌红染色剂（胞间层一红色）配制：将510mg钌红与蒸馏水2550mL混合。现配现用。苯胺蓝溶液（纤维素细胞壁、鞭

6、毛等一蓝色）配制：将苯胺蓝1g溶于0100mL35%或95%的乙醇中。14间苯三酚溶液（木质素一红色）配制：将间苯三酚5g溶于100mL95%乙醇。溶液呈黄褐色即失效。番红染色剂（细胞壁、花粉外壁和染色质一红色）配制：a）番红水溶液：将1g番红溶解到100mL蒸馏水中。b）番红乙醇：将1g番红溶解到100mL50%或95%乙醇中。c）苯胺番红乙醇染色液：甲液：番红5g+95%乙醇50mL乙液：苯胺20mL+蒸馏水450mL将甲、乙两种溶液混合后，充分摇均，再过滤。固绿溶液（细胞质、细胞壁一亮绿色）配制：a）固绿乙醇溶液：将1g固绿加入100mL95%的乙醇中。b）苯胺固绿乙醇溶液：将1g固绿加

7、入40mL95%乙醇中，再加入10mL苯胺。充分摇匀后过滤。铁矾苏木精染液（细胞分裂时染色体一蓝黑色）又称海登汉氏苏木精染色液甲液（媒染剂）：硫酸铁铵（铁矾）24g+蒸馏水100mL（现配现用）乙液（染色剂）：苏木精0.51g+95%乙醇10mL+蒸馏水90mL乙液配制：（1）苏木精的成熟：将苏木精溶于乙醇中，瓶口用双层纱布包扎，使其充分氧化（通常在室内放置两个月后方可使用）。（2）加入蒸馏水，塞紧瓶口，置冰箱中可长期保存。染色步骤：切片需先经甲液媒染，并充分水洗后才能以乙液染色，染色后稍经水洗再用另一瓶甲液分色至适度。（甲液与乙液在任何情况下决不能混合）美蓝染液（细菌、活体细胞蓝色）又称亚甲

8、基蓝染液配制：取0.5g美蓝，溶于30mL95%乙醇中D100mL0.01%氢氧化钾溶液，保存在棕色瓶内。伊红染液（细胞质、细胞间质粉红色）配制：1）伊红水溶液：取1g伊红，溶于99mL蒸馏水中，即成1%伊红水溶液。2）伊红乙醇溶液：取1g伊红，溶于99mL70%乙醇中，即成1%伊红-乙醇溶液。革兰氏染液（革兰氏阳性菌一紫色，革兰氏阴性菌一红色）配制：1）甲液（结晶紫液）：a）结晶紫2g+20mL95%乙醇b）草酸铵0.8g+80mL蒸馏水c）将a）与b）混合，静置48小时后使用。2）乙液（碘液）：将2g碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入1g碘，待碘全部溶解后，加水稀释至300mL。3）丙液：9

9、5%乙醇溶液。4）丁液（番红花红液）：10mL2.5%番红花红乙醇溶液+100mL蒸馏水5）先用甲液染色，再加乙液固定，后用丙液处理，最后用丁液复染。硼砂洋红染液（细胞核、糊粉粒红色）配制：取4g硼砂，溶于96mL蒸馏水中。再加入2g洋红，加热溶解后煮沸30min，静置3d，用100mL70%乙醇冲淡，放置24h后过滤。席夫试剂（醛类化合物紫色）又称品红亚硫酸试剂配制：称取0.5g碱性品红，加到100mL煮沸的蒸馏水中，再微微加热5min，不断搅拌，使它溶解。溶液冷却至IJ50C时过滤，滤液中加入10mL1mol盐酸。再冷却到25C时加入0.5g偏重亚硫酸钠（Na2S2O5）或无水亚硫酸氢钠（

10、NaHSO3）。把溶液装入棕色试剂瓶内，摇荡后，塞紧瓶塞，放在黑暗中24h。在溶液颜色退到淡黄色时，加入0.5g活性炭，用力荡1min，过滤后把滤液贮在棕色试剂瓶内，塞紧瓶塞，滤液应该是无色的。在使用时勿让溶液长时间暴露在空气中和见光（瓶外用黑紙或暗盒遮光）。若溶液变成红色，即失效。23詹纳斯绿乙醇饱和溶液（线粒体细胞色素C氧化酶一蓝绿色）又称健那绿乙醇饱和溶液配制：1）詹纳斯绿B乙醇饱和染液：取125mL詹纳斯绿B,加入到62.5mL无水乙醇中，搅拌。2）取詹纳斯绿B乙醇饱和染液，按1:30000比例加蒸水稀释，用来染原生动物线粒体3）取詹纳斯绿B乙醇饱和染液，按1:1000比例加蒸馏水稀释

11、，用来染新鲜蛙血线粒体。24.黑色素液（荚膜一黑色）配制：10g水溶性黑素+100mL蒸馏水+0.5mL甲醛（福尔马林）25.1%瑞氏染色液（细胞核一紫红色，细胞质一蓝色）又称伊红美蓝染料配制：称取瑞氏染色粉6g,放研钵内磨细，不断滴加甲醇（共600mL）并继续研磨使溶解。经过滤后染液须贮存一年以上才可使用，保存时间愈久，则染色色泽愈佳。（三）脱水剂（各级乙醇）的配制所需配制乙醇含量（%）原有含量（张）蒸馆水量乙醇+01（niL）3095655050+仝709525伽瓷85951085+10（四）常用固定液的配制FAA固定液（适用于一般根、茎、叶、花药、子房组织切片，但对染色体的观察效果较差）

12、配制：福尔马林（38%甲醛溶液）5mL+冰醋酸5mL+70%乙醇90mL幼嫩材料用50%乙醇代替70%乙醇，可防止材料收缩；还可加入5mL甘油（丙三醇）以防蒸发和材料变硬。FPA固定液（同FAA,但效果更好）配制：福尔马林（38%甲醛溶液）5mL+丙酸5mL+70%乙醇90mL3卡诺氏固定液（适用于一般植物组织和细胞的固定，常用于根尖、花药压片及子房石蜡切片等）配制：无水乙醇：冰醋酸（V:V）=3:3有极快的渗透力，根尖材料固定1520min即可，花药则需1h左右，此液固定最多不超过24h，固定后用95%乙醇冲洗至不含冰醋酸为止；如果材料不马上用，需转入70%乙醇中保存4.10%中性缓冲福尔马

13、林配制：磷酸二氢钠4g+磷酸氢二钠6.5g+37%甲醛100mL+蒸馏水900mL,充分混合，标记pH和日期。5.Zenker液（核固定剂）配制：1）Zenker贮备液：氯化汞50g+重络酸钾25g+硫酸钠10g+蒸馏水1000mL,充分混合。稳定性2年。2）Zenker工作液：Zenker贮备液95mL+冰醋酸5mL。3）由于Zenker液中含氯化汞，固定后必须脱去汞色素。（鲁哥氏碘液5min,水洗；5%硫代硫酸钠5min,水洗并按照染色步骤要求进行染色）4）组织必须用流水冲洗去除重铬酸钾。（五）常用透明剂使材料清净透明，增加组织折光。1二甲苯（必须脱浄水分，以免发生乳状混浊）为了避免材料收缩，应逐步从无水乙醇过渡到二甲苯中：无水乙醇T无水乙醇+二甲苯（V：V=1：1）T二甲苯2氯仿（会破坏染色）1/5氯仿（氯仿V1:无水乙醇V2=1:4）t2/5氯仿（V1:V2=2:3）t3/5氯仿（V1:V2=3:2）t4/5氯仿（V1:V2=4:1）t纯氯仿（两次）（六）解离液与离析液1解离液：a）盐酸乙醇：（95%乙醇V1:浓盐V2=1:1）