扎那米韦长链酯衍生物1c体内外抗流感病毒活性研究

1、扎那米韦长链酯衍生物1c体表里抗流感病毒活性研究【摘要】目的研究扎那米韦长链酯衍生物1的体表里抗流感病毒活性。要领体外实行以流感病毒熏染的DK细胞为模子，以细胞病变为指标，研究了化合物1的细胞毒性以及对4种流感病毒A型和3种流感病毒B型的按捺活性。体内实行应用熏染了流感病毒甲1(H1N1)亚型F1株的小鼠动物模子，不雅察差异给药方案、差异剂量、差异给药途径的多项指标。结果在细胞造就内，化合物1按捺流感病毒A型的I50在0.2326.86l/L之间；按捺流感病毒B型的I50在21.79246.80l/L之间。体内实行中，应用差异给药方案1治疗可以显着改进F1熏染小鼠的存活率，均匀生存日及肺指数。

2、结论化合物1有潜能开拓为抗流感病毒药物。【关键词】扎那米韦；衍生物；流感病毒KEYRDSZanaivir;Derivative;Influenzavirus流感是一种由流感病毒引起的急性病毒性呼吸道熏抱病，每年都在全天下盛行，其涉及范畴很广，造成的经济丧失严峻，对群众卫生的威胁宏大1，2。只管人们在分子和细胞程度对流感病毒的熟悉有了长足的希望，但是由于流感病毒抗原变异频仍，疫苗结果不抱负，药物研发相对迟钝，以是流感病毒引起的殒命和损伤仍旧是呼吸体系疾病中最为重要的37。如今人们已经创造的流感病毒药物研发分子靶点有：血凝素、神经氨酸酶(neurainidase，NA)、2卵白等，此中针对NA的研

3、究最为普及和深化。通过在布局程度对酶活力的研究，可以研制出构效干系更明白、越发广谱的抗病毒药物811。FDA容许的两个NA按捺剂药物扎那米韦和seltaivir就是显着的例子。由于扎那米韦的口服生物使用度低，漫衍体积较小，尿扫除速率过快，以是临床应用受到限定，给药途径范围为吸入给药12。一些实行室研究了扎那米韦雷同物的合成以及它们对流感病毒的按捺活性1315。本研究中，我们对刘宗英等合成的扎那米韦长链酯衍生物1(布局式见图1)举行了体表里抗流感病毒活性研究。在体外实行中，我们以DK细胞为模子，研究了化合物1的细胞毒性以及对4种A型和3种B型流感病毒的按捺活性，体内实行以熏染了流感病毒甲1(H1

4、N1)亚型F1株的小鼠为模子，评价化合物1的体内抗病毒活性。图1化合物1的布局式1质料与要领1.1质料DK细胞由本室自行传代造就。流感病毒A/粤防/243/72(H3N2)、流感病毒A/济防/15/90(H3N2)、流感病毒A/京防/262/95(H1N1)、流感病毒A/汉防/359/95(H3N2)、流感病毒B/济防/13/97、流感病毒B/京防/76/98、流感病毒B/四川/83/2000和流感病毒甲1(H1N1)亚型(F1株，H1N1)鼠肺顺应株均由本室提供。细胞造就液为含10%新生牛血清，0.3g/l谷氨酰胺，100IU/l青霉素，100g/l链霉素的Eagles底子造就液(E)。维持

5、液为含10%白卵白，0.3g/l谷氨酰胺，100IU/l青霉素，100g/l链霉素的Eagles底子造就液(E)。小鼠为昆明鼠，雌、雄各半，1416g，购于中国医学科学院实行动物研究所。化合物1和扎那米韦由本研究所合成室提供；利巴韦林(RBV)购自湖北省医药产业研究院。1.2化合物1对DK细胞毒性实行(1)细胞病变法(PE法)将生长状态精良的DK细胞，按每孔约2.5104DK细胞接种到96孔造就板，每孔0.1l，37，5%2造就箱造就24h，待细胞长成单层后举行实行。参加含有差异浓度倍比稀释的1的维持液，共8个稀释度，每浓度2孔，同法测定扎那米韦，同时设无药物细胞比较。以不雅察细胞病变为指标，

6、显微镜下不雅察细胞病变，75%100%为4，50%74%为3，25%49%为2，1%24%为1，无病变为0。盘算每浓度药液均匀细胞病变程度，按Reeduenh法盘算半数有毒浓度50。1.3化合物1体外抗流感病毒活性实行(PE法)1.4化合物1小鼠体内抗流感病毒甲1(H1N1)亚型(F1株)疗效实行(1)殒命率及均匀生存日(2)肺病变、肺指数(3)鼠肺TID50滴定2结果2.1化合物1的细胞毒性及体外按捺流感病毒实行化合物1在DK细胞中抗流感病毒A型和流感病毒B型的活性以及对DK细胞的毒性结果见表1，阳性比较药为扎那米韦。表1数值表现化合物1对流感病毒A型、流感病毒B型差异株的按捺活性差异较大，

7、扎那米韦也表现同样环境；1对流感病毒A型的按捺活性虽不及扎那米韦，但对流感病毒B型的按捺活性显着高于扎那米韦。化合物1以及扎那米韦对DK细胞的毒性测试结果为：化合物1的50值大于318.05l/L，扎那米韦的50值大于1.50104l/L。2.2化合物1体内抗流感病毒活性实行结果见表2。(2)治疗给药方案本次实行除熏染方案差异外，还增长了1的剂量，不雅察小鼠对1的耐受环境，并增长一组1的腹腔给药，与灌胃给药组在划一剂量下，不雅察疗效有无差异。表2结果表现1灌胃各剂量组各指标间呈量效干系，同为31.25g/kg，腹腔注射组的疗效优于灌胃给药组，其疗效相称于62.5g/kg灌胃组，在肺病变及肺指数

8、两项指标上乃至优于62.5g/kg灌胃组。小鼠对62.5g/kg药量耐受精良，在实行期间，药物毒性比较组体重增长环境与正常比较组相似，未见毒性反响(详细数据未列出)。图2列出治疗给药方案各组的肺病变照片；防范+治疗给药方案各组肺病变照片结果相似，未列出。(3)治疗给药方案中鼠肺病毒分散环境图3表现治疗给药方案各组31.25g/kg，31.25g/kg(腹腔注射)，RBV及病毒比较组的鼠肺病毒分散及毒力图2治疗实行中各组肺病变图图3小鼠肺内流感病毒滴度曲线测定(TID50)结果。熏染后d1，4组鼠肺TID50相近，d2各组之间病毒TID50别离为107.6/l、107.1/l、106.4/l以及

9、108.3/l；d4病毒TID50别离107.6/l、106.9/l、105.1/l及107.2/l。1腹腔注射组病毒滴度低落比灌胃组更显着，与别的指标一样等，RBV低落病毒滴度最显着。防范+治疗方案各组(31.25g/kg，RBV及病毒比较组)的鼠肺病毒分散及毒力测定TID50结果与治疗方案组相似，未列出。3讨论对化合物1举行的体内、外抗流感病毒活性研究结果表现，1具有广谱抗流感病毒活性，且作用机制与金刚烷胺类抗病毒药物差异。体外实行中，1对流感病毒A型各株的按捺活性虽不如扎那米韦，但1对流感病毒B型的按捺活性显着优于扎那米韦。在流感盛行，病原诊断不明白时，1有上风。在熏染了流感病毒甲1(H

10、1N1)亚型(F1株)的小鼠模子中，两种给药方案均表现可重复的疗效，并有量效干系。体内实行结果表白1腹腔注射途径，药物汲取较灌胃佳。由于1适口服或注射给药，而扎那米韦仅能局部喷药，并需特别给药装置，以是1有必然的有用远景。原方案将seltaivir作为阳性比较药，比力1与seltaivir在动物实行中的疗效，但遗憾的是临时无法得到seltaivir，我们正在积极寻求，以期办理上述表2化合物1体内抗流感病毒甲1(H1N1)亚型小鼠熏染作用治疗方案及熏抱病毒量*：P0.05；*：P0.01。题目。对1抗流感病毒的作用机制研究，我们曾开端测定1抗流感病毒A型粤防243/72株NA活性，创造1对NA的I50为42.0nl/L，活性显着低于扎那米韦0.2