流式淋巴细胞亚群检测在癌症中的临床应用价值及意义

1、流式淋巴细胞亚群检测在癌症中的临床应用价值及意义患者较晚期宫颈癌患者外周血中具有更多的CD8阳性T细胞数量和较低的CD4/CD8比值；而有淋巴结和远处转移的宫颈癌患者外周血中CD8阳性T细胞数 量低于无转移的宫颈癌患者，CD4/CD8比值那么较高。A. CD8阳性T细胞绝对数同淋巴结转移的相关性;B. CD4/CD8比值同淋巴结转 移的相关性;C. CD8阳性T细胞绝对数同远处转移的相关性;D. CD4/CD8比值同 远处转移的相关性;E. CD8阳性T细胞绝对数同临床T分期的相关性;F.CD4/CD8比值同临床T分期的相关性这局部结论提示宫颈癌患者外周血中CD8阳性T细胞的绝对数同宫颈癌的肿

2、瘤 进展转移及预后相关，与肺癌患者的完全一致，也再次验证了我们在2.1局部 提出的结论或者假设：肿瘤患者外周血中CD8阳性T细胞的绝对数及其相关联 的指标CD4/CD8比值同肿瘤的发生开展和转移相关，同时这两个指标也是肿瘤 患者预后的独立因素。外周血中具有较多数量的CD8阳性T细胞（CD4/CD8比 值相对较低）的肿瘤患者具有更好的预后。3.讨论免疫系统是机体执行免疫应答及免疫功能的重要系统，具有监视、防御和调控 的作用8。免疫系统不仅能够识别外来入侵的病原体，同时也能够识别和清除 体内发生突变的肿瘤细胞、衰老细胞等其他有害成分。正常情况下发生突变的 肿瘤细胞都会被机体的免疫系统识别并且清除，

3、但是肿瘤患者体内的肿瘤细胞 由于肿瘤微环境的复杂性，使其逃脱了机体的免疫监视，进而发生开展甚至转 移。如何使机体有效识别肿瘤细胞并对其进行清除是肿瘤治疗的核心问题之一9-10o 机体的免疫系统由多种成分构成，包括免疫器官、免疫细胞和免疫分子。淋巴 细胞作为主要的免疫细胞，在免疫系统发挥功能的过程中起重要作用4。淋巴 细胞简单的我们可以划分为CD3阳性T细胞，B淋巴细胞和NK细胞，其中CD3 阳性T细胞又可以分为CD4阳性T细胞和CD8阳性T细胞。再往下细分我们又 可以将CD4阳性T细胞分为辅助性T细胞，记忆型T细胞，调节性T细胞等等 11, 12 o此外巨噬细胞、DC细胞和MDSC细胞也是免疫

4、细胞的重要成员，协 助免疫系统发挥功能。肿瘤免疫微环境是一个非常复杂的内环境，不仅包括肿 瘤细胞，免疫细胞，内皮细胞等其他细胞，还包括各种细胞因子和基质成分。 由于免疫细胞以及肿瘤微环境的复杂性，我们无法做到实时地检测所有免疫细 胞，因此我们通过流式细胞秫亍检测肿瘤患者外周血中CD3阳性T细胞，CD4阳 性T细胞，CD8阳性T细胞，B淋巴细胞和NK细胞来评估肿瘤患者的一个免疫 功能状态，从而为临床提供有用的信息13, 14 oT淋巴区田胞介导的细胞免疫是机体主动的免疫应答，T淋巴细胞具有多种生物学 功能，如直接杀伤靶细胞、辅助B细胞产生抗体以及产生细胞因子等15-17。 而CD8阳性T细胞是细

5、胞毒性T细胞，能够直接杀伤靶细胞18。因为本研究 检测和分析T淋巴细胞及其亚群同临床的相关性。结果显示肿瘤患者外周血中 同细胞毒性T细胞相关的两个指标CD8阳性T细胞绝对数和CD4/CD8比值同肿 瘤患者的临床信息相关，早中期肿瘤患者外周血中细胞毒性T细胞数量要高于 晚期患者，提示细胞毒性T细胞的数量与肿瘤患者的预后相关。肿瘤患者外周 血中具有较多数量的细胞毒性T细胞，其具有更好的预后。本研究很好的诠释 了细胞毒性T细胞作为机体免疫系统杀伤肿瘤细胞的主要执行者，只有这类淋 巴细胞基数到达一定数量时，机体的免疫系统才有可能去杀伤肿瘤细胞；而如果 这类细胞的数量基数都很低，机体的免疫系统就无法去杀

6、伤肿瘤细胞，从而影 响后续的治疗包括一些免疫单抗治疗，如PD-1, CTLA-4等19。外周血淋巴细 胞亚群虽然不能够准确反响肿瘤原位中淋巴细胞亚群的状态，但是外周血样本 取材方便，检测准确的特点，同时同一患者外周血和肿瘤原位淋巴细胞亚群变 化具有一致性，使得外周血淋巴细胞亚群分析成为目前最为可行的评估肿瘤患 者免疫状态20-22。通过本研究，我们发现肿瘤患者外周血中CD8阳性T细胞的绝对数同患者的临 床分期，淋巴结转移和远处转移相关，提示可能是肿瘤患者预后的独立因素之 -O肿瘤患者外周血中CD8阳性T细胞的数量越多，患者具有更好的预后。我 们希望通过检测肿瘤患者外周血中淋巴细胞亚群，为临床提

7、供有价值的信息， 进而使临床能够根据每个患者的免疫功能状态制订个体化的治疗策略，也使每 个患者能够从各项检测中得到最优化的获益。Reference：Yang L, Zheng R, Wang N, et al. Incidence and mortality of stomach cancer in China, 2014J. Chin J Cancer Res, 2018, 30(3) ： 291-298. DOI： 10.21147/j. issn. 1000-9604. 2018. 03. 01.Fahmi T, Esendagli G, Yilmaz G, et al. Immunec

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21、9中国药学药品知识仓库的其它文章“以人为本”理念在妇产科护理管理中的运用斯佳康高能健康仪对植物神经的调节作用针灸治疗急性脑卒中后抑郁的临床分析延续性护理干预方式对老年前列腺增生经尿道电切术后心理弹性的影响规范化护理管理在预防与控制医院感染中的应用探讨药学服务对糖尿病患者用药依从性及血糖控制的影响一全文完一表2宫颈癌患者外周血中CD8阳性T细胞绝对数以及CD4/CD8比值同临床特征的相关性分析CD8阳性T 细胞绝对数P value CD4/8lL P value年龄W 60316012T分期T18T215T315T45淋巴结转移N022N121是否有远处转移M039Ml4315.0(240.0,

22、455.0)420.0(308.5,502.0)335.0(299.0,414.0)286.0(215.0,527.0)416.5(326.3,510.3)295.0(227.0,348.5)413.5(295.8,530.5)296.0(215.5,411.0)376.0(285.5,456.5)227.0(168.5,292.3)0.08990.22540X)1631.70()(1.300,2.000)2.150(1.400,2.150)1.70()(1.600,1.800)1.400(0.950,2,075)1.500(1.300,2.000)2.000(1.750,3.100)1.60

23、()(1.200,1.800)1.900(1.400,2.100)0.83060.04140.04110.0215”(公25, 0 031 .o(JU)1.900(1.650,2.600)图3宫颈癌患者外周血中CD8阳性T细胞绝对数和CD4/CD8比值同T分期、淋巴结转移及远处转移的相关性Summary：目的：研究肿瘤患者外周血中淋巴细胞亚群的各项指标和肿瘤患者临 床信息及预后的相关性。方法：选取肺癌、宫颈癌和乳腺癌患者共134例，收 集肿瘤患者外周血并用流式细胞术检测和分析外周血中淋巴细胞亚群7项指 标，同时收集肿瘤患者的临床信息，分析两者是否具有相关性。结果：研究发 现肺癌及宫颈癌患者外周

24、血中淋巴细胞亚群7项指标，其中CD8阳性T细胞绝 对数及CD4/CD8比值同患者的临床分期、淋巴结转移和远处转移相关。结论： 本研究发现肺癌和宫颈癌早中期患者外周血中CD8阳性T细胞的数量较晚期患 者明显增多，提示肿瘤患者外周血中CD8阳性T细胞的数量同患者的预后相 关。Key：淋巴细胞亚群，流式细胞术，细胞毒性T细胞R4A2107-2306 (2021) 0904由于全球人口的增长和老龄化，以及吸烟、不良饮食和久坐等生活方式导致癌 症患者数量越来越多，全球癌症负担持续增加1。肿瘤免疫学研究说明，癌症 的发生、开展与机体的免疫状态密切相关2, 3o其中T淋巴细胞是细胞免疫 的主要应答形式，在机

25、II抗肿瘤免疫中起主导作用，能够识别和清除肿瘤细胞 4, 5o流式淋巴细胞亚群作为一种常规检查，是反映细胞免疫功能的重要指 标，在肿瘤免疫监测具有重要意义，进一步为患者的临床治疗方案提供参考依 据6, 7o本研究通过分析患者外周血中CD3阳性T淋巴细胞，CD4阳性T淋 巴细胞，CD8阳性T淋巴细胞，B淋巴细胞和NK细胞占淋巴细胞的比例及绝对 数，并将这些指标相结合，从而评估机体的免疫功能状态。1.材料与方法1材料采集天津市肿瘤医院空港医院放疗科住院患者EDTA抗凝外周血2mlo所有患者 采血前均未接受过肿瘤治疗，并且具有完整的临床相关资料。实验方法取100ul外周血样本加入流式管中，标记CD3

26、/CD19/CD16+CD56/CD45和CD3/CD4/CD8/CD45抗体(Beckman Coulter公司)，室温孵育15分钟，加入 500ul溶血素（Beckman Coulter公司），室温静置10分钟，PBS洗涤细胞后 上机。流式数据用Kaluza软件（Beckman Coulter公司）进行分析。统计学方法应用SPSS statistics 21软件进行统计学分析。当样本数据符合正态分布时， 独立样本之间采用t检验或者单因素分析检验的统计学方法；当样本数据不符合 正态分布时，样本之间采用非参数t检验和Kruskal-Wallis检验的统计学方 法。P0. 05为差异具有统计学意

27、义。2.结果1外周血中淋巴细胞亚群同预后相关本研究中共收集肺癌32例，乳腺癌59例，宫颈癌43例。其中乳腺癌均为确定 将接受手术患者，而肺癌和宫颈癌都未接受手术治疗。因此从癌种和治疗方式 进行评估，乳腺癌较肺癌和宫颈癌具有更好的预后。本研究共收集患者外周血 中CD3阳性T细胞、CD4阳性T细胞和CD8阳性T细胞占淋巴细胞百分比和绝 对值6项指标，加上CD4/CD8比值共7项指标进行数据分析，结果如图1所 示。三个癌种间，CD3阳性T细胞和CD4阳性T细胞的绝对数都相近，无统计 学差异（图1A和图1B）；但是肺癌和宫颈癌患者外周血中CD8阳性T细胞的绝 对数明显较乳腺癌患者降低（图IC, P值分

28、别为0.0080*和0.0003*）。而 当分析三种淋巴细胞亚群在外周血中占淋巴细胞百分比时，我们发现CD4阳性 T细胞占淋巴细胞百分比在三个癌种之间无差异（图1E）,而乳腺癌患者外周 血中CD3阳性T细胞和CD8阳性T细胞占淋巴细胞百分比高于肺癌和宫颈癌患 者（图1D和1F）。由于肺癌和宫颈癌较乳腺癌是更为开放性肿瘤，因此其他 淋巴细胞比方NK细胞数量较乳腺癌会增加，这就导致CD3阳性T细胞比例在乳 腺癌中会升高，但是CD3阳性T细胞绝对数并没有差异，这也从侧面反响了淋 巴细胞亚群的绝对数较其占淋巴细胞百分比是更好的参考指标。此外乳腺癌患 者CD8阳性T细胞占淋巴细胞百分比拟肺癌和宫颈癌患者

29、高，也再次证实了乳 腺癌患者具有更多数量的CD8阳性T细胞。更为直观的CD4/CD8比值指标显 示，乳腺癌患者的CD4/CD8比值低于肺癌和宫颈癌患者（图1G）。因此我们认 为在预后较好的乳腺癌患者人群中，其CD8阳性T细胞绝对数明显高于预后较 差的肺癌和宫颈癌患者，同时乳腺癌患者的CD4/CD8比值低于肺癌和宫颈癌患 者。A.三种癌症患者外周血中CD3阳性T细胞绝对数的相互比拟;B. CD4阳性T细 胞绝对数的相互比拟;C. CD8阳性T细胞绝对数的相互比拟;D. CD3阳性T细胞 占淋巴细胞百分比的相互比拟;E. CD4阳性T细胞占淋巴细胞百分比的相互比 较;F. CD8阳性T细胞占淋巴细

30、胞百分比的相互比拟;G. CD4/CD8比值的相互比 较上述结果提示通过检测癌症患者外周血样本的淋巴细胞亚群，CD8阳性T细胞 绝对数较高的患者具有更好的预后。此外CD4/CD8比值较低的患者也具有较好 的预后，也再次证实这类患者的CD8阳性T细胞数量较多。为了再次验证我们 的结论，本研究分别将肺癌和宫颈癌患者的外周血淋巴细胞亚群的7项指标同 患者的临床信息相结合分析，进行深入的研究探索。2肺癌患者外周血淋巴细胞亚群同其临床信息的相关性分析共收集肺癌患者32例，其中男性24例，女性8例，年龄分布37-78岁。其中 肺鳞癌8例，肺腺癌9例，其它病理类型的肺癌15例，多为中晚期患者。由于 早期患者

31、较少，因此本研究将临床分期进行N分期和M分期单独分析。 我们将这7项指标分别与患者的性别，年龄，病理类型，淋巴结转移和远处转 移进行分析。结果显示其中CD3阳性T细胞和CD4阳性T细胞占淋巴细胞百分 比和绝对数与患者的所有临床信息都无统计学差异，没有相关性。而CD8阳性 T细胞绝对数与患者临床信息相关性如图2表1所示。其中淋巴结转移定义为 N3的患者其外周血样本中CD8阳性T细胞绝对数同样明显低于N2患者（如图 2c所示）；有远处转移的患者其CD8阳性T细胞的绝对数也明显低于无转移的 患者（图2A所示）。这局部结果与2.1的结果相一致，我们证实了肺癌早中期 患者外周血中CD8阳性T细胞绝对数要明显高于肺癌晚期患者，提示外周血中 CD8阳性T细胞绝对数是预后相关的指标之一，具有较高CD8阳性T细胞的患 者可能具有更好的预后。A. CD8阳性T细胞绝对数同远传转移的相关性;B. CD4/CD8比值同远传转移的 相关性;C. CD8阳性T细胞绝对数同淋巴结转移的相关性;D. CD4/CD8比值同淋 巴结转移的相关性同时我