不同产地附子含量测定(共8页)

1、紫外分光光度法测定不同产地附子(f z)中生物碱的含量【目的(md)】 紫外分光(fn un)光度法测定不同产地附子中生物碱的含量【实验材料试剂】附子生药材（产地：广州、四川、成都、塘厦）乌头碱对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：110720-201102）25%氨水（广东光华化学厂有限公司，批号：20100806）三氯甲烷（广州化学试剂厂，批号：20060403-2）硫酸（广州化学试剂厂，批号：20070712-1）乙醚（天津市百世化工有限公司，批号：20091101）醋酸钠（天津市百世化工有限公司，批号：20100503）冰醋酸（天津市百世化工有限公司，批号：20090320）硼砂（

2、天津市北联精细化学品开发有限公司，批号：20090828）磷酸氢二钠（天津市百世化工有限公司，批号：20090620）磷酸二氢钾（天津市大茂化学试剂厂，批号：20100726）溴甲酚绿（天津市南开区红旗路楚雄道119号，批号：20100802）无水乙醇（天津市百世化工有限公司，批号：20101028）pH3.0醋酸盐缓冲液的配制：称取无水醋酸钠0.15 g，加水使溶解，加冰醋酸5.6 ml，用水稀释到500 ml，并在pH计上校正（过滤）。仪器校正用的标准缓冲液的配制：磷酸盐标准缓冲液：精密称取在1155干燥23小时的无水磷酸氢二钠3.55 g与磷酸二氢钾3.40 g，加水使溶解并稀释至100

3、0 ml。硼砂标准缓冲液：精密称取硼砂3.81 g（注意避免风化），加水使溶解并稀释至1000 ml，置聚乙烯塑料瓶中，密塞，避免空气中二氧化碳进入。0.1%溴甲酚绿的配制：0.2 g溴甲酚绿加0.05 mol/L NaOH溶液3.2ml溶解，用水稀释200 ml。【设备(shbi)与玻璃仪器】紫外分析仪（华南国家(guji)计量测试中心，型号：UV-6112424）超声波清洗仪（上海科导超声仪器(yq)有限公司，型号：250H）十万分之一分析天平（赛默飞世尔科技公司，型号:CP225D）恒温水浴锅（上海锦屏仪器仪表有限公司，型号：GKC-HOP2可控硅恒温水浴锅）旋转蒸发器（巩义市予华仪器有

4、限责任公司，型号：RE-52A）循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司，型号：SHZ-D）锥形瓶（100ml）4个圆底烧瓶（25ml）4个分液漏斗4个移液管25ml、2ml、3ml各1个容量瓶：10ml 7个【实验步骤】1.测定条件的选择1.1对照品溶液的制备精密称取经105干燥至恒重的乌头碱对照品2.96 mg，置25ml量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含乌头碱0.1184 mg）。1.2最大吸收峰的确定用下述条件对供试品液及对照品液与溴甲酚绿形成的离子对的氯仿溶液，在紫外分光光度计上从340-520 nm的范围内扫描，其最大吸收峰位在415 nm，与文献报道1

5、-2相同。1.3 标准曲线的制备精密吸取对照品溶液0,1,2,3,4,5,6 ml，分别置分液漏斗中。依次加入三氯甲烷至10 ml，再加入pH3.0的醋酸盐缓冲液10 ml和0.1% 溴甲酚绿溶液2 ml ，强力振摇5 min，静置10 min，分取三氯甲烷层，水层再用三氯甲烷提取2次，每次5 ml，用干燥滤纸过滤，滤液用分光光度计，分别在415 nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，乌头碱含量为横坐标，绘制标准曲线，测得线性范围。结果见表1及图1。表1 线性关系试验(shyn)结果序号乌头碱对照品量（mg/10ml）X对照品吸光度Y00010.11840.17620.23680.3643

6、0.35520.50540.47360.68450.59200.87560.71041.064图1 线性关系其回归方程为Y = 1.483X0.0022；线性系数(xsh) = 0.9993。试验结果表明：乌头(w tu)碱含量在11.84-71.04g/ml范围(fnwi)内，其吸收度与乌头碱浓度呈良好的线性关系。2. 含量(hnling)测定2.1供试品溶液的制备（氨水三氯甲烷冷浸法）生药分别打粉，精密称取药材粉末 3 g（其中广州附子取药材粉末6g，北京附子取药材粉末0.6g），于带塞锥形瓶中，加10氨水5ml，加三氯甲烷10ml，振荡5 min，冷浸6 h，过滤，滤渣用三氯甲烷洗2 次

7、，每次5ml，合并三氯甲烷层，减压蒸干。加入乙醚-三氯甲烷-无水乙醇（16：8：1）的混合液25ml和浓氨试液1ml，称定重量，强力振摇15min，浸渍过夜，用上述混合溶液补足减失的重量，振摇2min，静置。倾取上清液，精密量取10ml置分液漏斗中，加乙醚5ml，用0.3mol/硫酸溶液提取4次，每次10ml，分取硫酸液，过滤，合并滤液，置另一分液漏斗中，加浓氨水约10ml，摇匀，用三氯甲烷提取4次，每次10ml，分取三氯甲烷液，过滤，合并滤液，回收溶剂至干，残渣于于105加热1h，取出，放冷，加三氯甲烷分2次溶解，每次5ml，全部转入分液漏斗中，再加入PH3.0的醋酸盐缓冲液10ml和0.1

8、% 溴甲酚绿溶液2ml ，强力振摇5min，静置10min，分取三氯甲烷层，水层再用三氯甲烷提取2次，每次5ml，用干燥滤纸过滤，合并滤液，滤液用分光光度计，分别在415nm的波长处测定吸光度。并从标准曲线上求得供试品中总乌头碱相当于乌头碱的量，再计算含量。结果见表2。表2 不同产地附子的实验结果批次吸光度总碱含量(mg/g)RSD/%广州0.5310.5530.5610.05990.06230.06332.8成都0.3850.3810.3600.08700.08610.08143.6北京0.3860.3930.3640.43530.44340.41163.8塘厦0.4710.4590.493

9、0.10630.10370.11133.72.2 精密度实验(shyn)精密量取乌头碱对照品溶液(rngy)2 ml，按标准曲线项下操作，测定吸光度5次，并计算RSD值。计算平均吸光度。结果(ji gu)见表2。表2 精密度实验结果(n=5)吸光度平均值RSD（%）0.3650.3650.20.3650.3640.3640.3652.3 重复性实验称取同一批号的药材粉末(附子1号)1 g，精密称定，按供试品溶液制备项下操作制备供试品，测定吸光度，平行制备6份。结果见表4。表4 重复性实验结果(n=6) Table.4 Experiment results of repeatability (n

10、=6) 样品号取样量/g吸光度含量/%11.01180.3280.022121.00240.3280.022231.04700.3280.021841.02290.3290.022051.01620.3240.021861.00780.3290.0222 EQ s0.02200.0002RSD/%0.802.4 稳定性实验(shyn)精密称取药材粉末(附子1号)1 g，按供试品溶液制备项下操作(cozu)，并依法测定吸光度，每隔15 min测定1次，最后2h再测1次，共测定5次。结果见表6。表6 稳定性试验结果(ji gu)（附子1号）Table.5 Experiment results of

11、 stability（Aconite 1）时间（min）吸光度平均值RSD（%）00.3200.3240.29150.320300.323450.324500.327650.3271200.3272.5 加样回收率实验精密称取已测定(cdng)含量的药材1g，加入浓度为0.02368 mg/ml、0.03552 mg/ml、0.04736 mg/ml的乌头碱对照品溶液1ml，照供试品溶液制备项下的方法制备，依法测定(cdng)吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中乌头碱的量（g/ml），并按下式计算(j sun)回收率:加样回收率（%）=（测得量-样品中含量）/加入量100%，结果见表6。表6

12、加样回收实验结果Table.6 Experiment results of recovery ratio序号样品量/g原有量/mg加入量/mg测得量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%11.01170.22260.23680.458199.4699.731.821.00270.22060.23680.4583100.4031.02590.22570.23680.460199.0041.01580.22350.35520.573398.5051.02590.22570.35520.574198.1061.03560.22780.35520.573497.3071.02580.22570.47360.7012100.4081.01490.22330.47360.7122103.2491.03560.22780.47360.7071101.202.6样