土壤水解酶测定

1、水解酶试剂Acetate Buffer 溶液(50mM)15.4g乙酸钠，定容到1L容量瓶，加水1L,转移到大塑料瓶。底物溶液AG (200uM)6.77 mg/100mlBG (200uM)6.77 mg/100mlCB (200uM)10 mg/100mlXS (200uM)6.17 mg/100mlNAG (200uM)7.59 mg/100mlAP (200uM)5.12 mg/100mlLAP (200uM)6.5 mg/100ml3.标准液MUB先配置1mM的MUB标准液(17.6mg/100ml),定容至100ml容量瓶取 3ml 1000uM 的 MUB,加 27ml DI H

2、20，得 100uM MUB取 15ml 100uM 的 MUB,加 15ml DI H20，得 50uM MUB取 15ml 50uM 的 MUB，加 15ml DI H20，得 25uM MUB取 12ml 25uM 的 MUB，加 18ml DI H20，得 10uM MUB取 15ml 10uM 的 MUB，加 15ml DI H20，得 5uM MUB取 15ml 5uM 的 MUB，加 15ml DI H20，得 2.5uM MUB记 DI H20 为 0uM MUBMUC先配置1mM的MUC标准液(17.5mg/100ml)，定容至100ml容量瓶余下步骤和MUB 一样，配置不同

3、浓度的MUC标准液。注：所有底物为粉末状固体，且不易溶解，需适量加热&搅拌。步骤：称取约2.75g(0.001g)新鲜过筛(2mm) 土壤，放入150ml的烧杯中，加入91ml buffer，搅拌约1 min，静置30min.用微量进液器添加到黑色的微孔板中。一板两样200S1+50AG200S1+50AG200S1+50AG200S1+50AG200S1+50AG200S1+50AG200S1+50BG200S1+50BG200S1+50BG200S1+50BG200S1+50BG200S1+50BG200S1+50CB200S1+50CB200S1+50CB200S1+50CB200S1+

4、50CB200S1+50CB200S1+50XS200S1+50XS200S1+50XS200S1+50XS200S1+50XS200S1+50XS200S1+50NAG200S1+50NAG200S1+50NAG200S1+50NAG200S1+50NAG200S1+50NAG200S1+50AP200S1+50AP200S1+50AP200S1+50AP200S1+50AP200S1+50AP200S1+50LAP200S1+50LAP200S1+50LAP200S1+50LAP200S1+50LAP200S1+50LAP空空空空空空标准曲线:200S1+50蒸馏水S2S3S4S5S620

5、0S1+50蒸馏水S1S2S3S4S5S6200S1+50MUB0.5200S1+50MUC0.5200S1+50MUB2.5200S1+50MUC2.5200S1+50MUB 5200S1+50MUC200S1+50MUB10200S1+50MUC10200S1+50 MUB25200S1+50MUC 25200S1+50MUB50200S1+50MUC 50200S1+50MUB 100200S1+50MUC 10025 C培养约 3 hours进行读数（Fluorescence, excitation 波长 365, emission 波长 450）把AG, BG, CB, XS, NAG, AP的Fluorescence读数根据MUB标准曲线换算成MUB 的浓度把LAP的Fluorescence读数根据MUC标准曲线换算成MUC的浓度通过土壤干重，反应时间等计算以上水解酶的活性。注：PPOpolyphenol oxidase 多酚氧化酶AGa-glucosidaseBGb-glucosidaseCBcellubiosid